Способ определения активности токсинов
С1ЮСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ ТОКСИНОВ VERTfCILLIUM DAHLIAL, включающий выделет1е хлороформом липиднобелковогр полисахариДЕЮгр комплекса токсинов из культуральной жидкости и его анализ, отличающийся тем, что, с целью повьщхения точности и сЬкращения времени определения, анализ лшшдно-белкового полисахарндного комплекса токсинов проводят путем инфракрасной спектроскопии, причем в качестве показателя ак швности токсинов яспользуют изменение соогаоиюния интенсивности полос спектра в областях 3100 - ,-V 3700 2920 см § (Л с
СОЮЗ СОВЕТСКИХ нооввон
РЕСПУБЛИК ае 03) Зш> 6 01 М 33/00
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТ н ввтовономн овндвтвъотви
ГОСУДАРС. ТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3538555/30 — 15 (22) 12.11.82 (46) 30.08.84. Бюл. И 32 (72) Р. Г. Жбанков, А. Тоиров, P. Марупов, E. А. Мещерякова и М. Г. Зайцева (71) Физико-технический институт им. С.У.Умарова, ордена Трудового Красного Знамени институт физики AH БССР и отдел общей генетики хлопчатника АН ТадССР (53) 632:35 (088.8) (56) 1Красильников Н. А. и др. "Агрохимии", 1965, 10, с. 128-134.
2. Мещерякова E. А. и др. Действие токсичных веществ биостоков 2 расы Ч.dah1ia1 на семена хлопчатника, Доклад АН Таджикской ССР, т, 25, 2, 1982 (прототип). (54) (57) СПОСОБ ОПРБДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ ТОКСИНОВ ЧЕВТ1С!Ш0М OAHLIA1, включающий выделение хлороформом липидн» белкового полисахаридпого комплекса токсинов из культуральной жидкости и его анализ, отличающийся тем, что, с, целью повышения точности и сЬкращения времени определения, анализ липидно-белкового полисахаридиого комплекса токсинов проводят путем инфракрасной спектроскопии, причем в качестве показателя активности токсинов используют изменение соотношения интенсивности полос спектра в областях 3100—
3700 см и 2920 см .
1111105
Составитель М. Мирзаев
Техред И.Асталош Корректор Г. Решетник
%Редактор М. Келеме
Тираж 822 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж-35, Раушская на9., д. 4/5
Заказ 6303/Зб
Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная,4
Изобретение относится к биофизике и молекулярной спектроскопии, в частности к выявлению групповых различий в токсических . веществах возбудителя .вертициллезного вилта, и может быть использовано в фитопатологии и защите растений.
Известен способ определения токсичности веществ, выделяемых грибом ЧАап1!а1.
Способ заключается в том, что побеги хлопчатника выдерживают в,культуральной жидкоаги в течение 3 сут и по скорости увядания побегов судят о токсичности культуральной жидкости, т: е. способ основан на ответной реакции растения (11.
Недостаток известного способа заключается в его продолжительности и необходимости наличия самого растения.
Известен также способ оценки токсических веществ путем исследования их воздействия на семена и проростки хлопчатника. Сущность способа состоит а том, что семена хлопчатника замачивают в течение 24 ч в растворах токсических веществ, вьщеленных из мицелия и as культуральной жидкости, затем определяют количество РНК в ядрах семян и в семядольных листочках 9-дневных проростков, выращенных из семян после обработки, и по изменению содержания РНК отдельных фракций судят об активности токсического вещества (21.
Однако данный способ является трудоемким и длительным. Оценка активности токсических веществ производится без использования каких-либо приборов (по ответной реакции растений), что делает способ недостаточно точньиа Кроме того, для его осуществленйя требуетея всегда наличие самого растения.
Бель изобретения — создание точного и экспрессного метода определения активности токсических веществ возбудителя вертициолезного вилта в отсутствие растения.
Для достижения цели согласно способу определенна акпшности токсинов Vertici11мя
dah1ia1, включающему выделение хлороформом липидно-белкового полисахаридного комплекса токсинов иэ культуральной жидкости и его анализ, анализ липидно-белкового полисахаридного комплекса токсинов осуществляют путем инфракрасной спектроскопии, причем в качестве показателя активности токсинов используют изменение соотношения ин.тенсивности полос спектра в области 31003700 см и 2920 см 1, Пример. В качестве объектов исследования берут токсические вещества различных по вирулентности штампов возбудителя хлоп10 чатника: вирулентный штамм Хл-78 и П-215 (почвенный изолят), авирулентный к сортам
С-4727; 708-ф и Ташкент-1.
По известной методике выделяют ЛБПК токсических веществ из культурапьной жид15 кости (КЖ) 30-дневной культуры гриба
Y.dah1ia1, выращенной на жидкой среде
Чапека при 297 К. Среду Чапека заражают суспензией спор Ч.dah1ia1 из расчета 9 KR
9 млн. конидий/100 мл жидкости. Лиофильно высушенную ЮК многократно взбалтывают с хлороформом, затем хлороформный экстракт высушивают под вентилятором. Осадок растворяют в воде и ЛБПК выделяют осаждением
5-кратным объемом этанола по методу Грина.
Снимают ИК.спектры выделенных комплексов
25 токсических веществ и обласп 2700 — 3700 см на инфракрасном спектофотометре.
Из полученной спектрограмьп1 видно, что для спектра токсических веществ, выде30- ленных из вирулентиого штамма ХЛ-78, относительная интенсивность в максимуме нолосы 3100 — 3700 см I бGоoлaьaaшaе, чем пиковая интенсивность полось1 2920 см" ; Для спектра токсических веществ, выделенных йз авиру35 лентного штамма — почвенный изолят П-215, относительная интенсивность в максимуме полосы 3100 — 3700 cM значительно/меньше„, чем пиковая интенсивность полосы 2920 см
Таким образом, предлагаемый способ
40.нозволяет оценивать активность токсических веществ вирулентной и авирулентной формы возбудителя вилта. В отличие от известных способов, где активность оценивается по ответ, ным реакциями растений, в предлагаемом спо45 собе оценка производится на уровне молеку лярно-структурных изменений, что позволяет экспрессно и достоверно в отсутствии растений устанавливать активность разнообразных штам мов возбудителя вертициллезного вилта.
