Способ выделения лейкоцитов из крови

Авторы патента:

G01N33/48 - биологических материалов, например крови, мочи (G01N 33/02-G01N 33/14,G01N 33/26,G01N 33/44,G01N 33/46 имеют преимущество; определение всхожести семян A01C 1/02); приборы для подсчета и измерения клеток крови (гемоцитометры) (подсчет клеток крови, распределенных по поверхности, путем сканирования этой поверхности G06M 11/02)

СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ ЛЕЙКОЩЬ ТОВ ИЗ КРОВИ путем смеишвания крови с гепарином, осаждения в термостате при 37°С и отделения лейкоцитарной массы от остатка, отличающийся тем, что, с целью увеличения выхода лейкоцитов и ускорения способа, лейкоцитарную массу центрифугируют 9-10 мин, верхний слой возвращают в термостатируемый остаток , переме111ивают и после повторного термостатирования вновь отделяют лейкоцитарную массу, весь цикл повторяют четыре раза, причем при каждом цикле угол наклона термостатиi руемой емкости-изменяют ступенчато из положения наклона под углом (Л 45° до вертикального, а термостатирование проводят 20-40 HIIH .

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН (19) (11) 8 А

ЗС51) G 01 N 33/48

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ABTOPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И OTHPblTMA (21) 34б2893/13 (?2) 02.07.82 (4б) 15.08.84. Бюл. !l 30 (72) О.Ф. 1 Гельников, Э.М. Олишевский и H.A. Коваленко (71) Киевский научно-исследовательский институт отоларингологии им. А. И. Коломийченко (53) 615,3б1.018.51/55 (088.8) (5б) 1. РаняаЬ уа ct . ef . а Г, Vnhi.вЂ”

b i t i on o f 1eu cocy t e в18г» t i on i n пил by the a@егоse р late technique

using protein рцгГГей plerv : ion (ppg) f rom thrc ч « li Га чч1г snuyies.вЂ”

Acta Al Гег»о1о j i co", 1974, 1 . ?9, р. 209-221 (прототип). (54) (57) СПОСОБ ВЬДЕЛЕНИЯ ЛЕЙКОЦИТОВ ИЗ КРОВИ путем смешивания крови с гепарином, осаждения в термостате при 37 С и отделения лейкоцитарной массы от остатка, о т л и ч а юшийся тем, что, с целью увеличения выхода лейкоцитов и ускорения способа, лейкоцитарную массу центрифугируют 9-10 мин, верхний слой возвращают в термостатируемый остаток, перемеШивают и после повторного термостатирования вновь отделяют лейкоцитарную массу, весь цикл повторяют четыре раза, причем при каждом цикле угол наклона термостатируемой емкости изменяют ступенчато из положения наклона под углои

45 до вертикального, а термостатирование проводят 20-40 мин.

Изобретение относится к биологии и медицине, в частности к гематологии и иммунологии, и может быть использовано в клинической практике и для исследовательских работ.

Известен способ выделения лейкоцитов периферической крови слонтанным осаждением гепаринизированной венозной крови путем отбора

30-50 мл крови, помещения ее в про" бнрку с гепарином, осаждения в термостате при 37 С в течение 1-1,5 ч и однократного отделения в градиенте фиккол-уоотраста осажденной плазмы (13.

Недотатками указанного способа выделения лейкоцитов являются сравнительно низкий выход лейкоцитов (не более 22Х от возможного максимального количества), необходимость отбора большого количества крови у больных для полноценного их обследования и получения достоверных данных о их чувствительности к раз личным антигенам, что особенно необходимо при операциях трансплантации, неэкономное использование донорской крови, необходимой для работ, длительность процесса.

Цель изобретения вЂ” увеличение выхода лейкоцитов и ускорени способа.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу выделения лейкоцитов из крови путем смешивания крови с гепарином, осаждения о в термостате при 37 С и отделения лейкоцитарной массы от остатка,лейкоцитарную массу центрифугируют 910 мин, верхний слой возвращают в .термостатируемый остаток, перемешивают и после повторного термостатирования вновь отделяют лейкоцитарную массу, весь цикл повторяют 4 раза, причем при каждом цикле угол наклона термостатируемой емкости изменяют ступенчато из положения наклона лод углом 45О до вертикального, а термостатирование проводят 20-40 мин.

Пример. У больного забирают из вены 10 мл крови в пластиковый шприц, содержащий гепарин, для достижения конечной концентрации

50 ед/мл. Смесь выливают в стериль.ные пробирки емкостью 20 мл и помещают в термостат при 37 С. Пробирки о размещают с наклоном в 45 на стан08358 з дартных подставках. Через 30 мин при достижении видимой границы раздела отбирают первую порцию надосадочной жидкости плазмы и центрифугируют ее при 1500" в течение

10 мин. После отделения клеток их помещают в среду 199, плазму выливают в пробирки, находящиеся в термостате, встряхивают, перемешивая

tp с имевшимся в них остатком, и размещают в термостате под углом 60

После получасового стояния вновь отбирают плазму и центрифугируют

9 мин. Отделив ее от образовавшегося

15 осадка, возвращают в термостатируемые пробирки. Термостатирование пробирок со смесью проводят при той же температуре (37ОС), расположив о их вертикально (угол наклона 90 ) .

20 Общее количество циклов термостатирования и последующего центрифугирования плазмы равно четырем. За это время удается выделить 28 млн/мл клеток.

25 Данные, характеризующие преимущества предлагаемого способа выделения лейкоцитов перец известным, представлены в табл. 1.

Та блица 1

Число лейкоцитов, млн/мл, полученных

Показатепо предла- с использовагаемому нием фикколспособу, уротраста

28,0

11,2

5,0

2,2

Число на блюдений

Таким образом, предлагаемый способ по сравнению с прототипом позво" ляет повысить выход лейкоцитов в

2,5 раза. Причем для выделения необ50 ходимого количества лейкоцитов, например при иммунологических тестах, можно использовать меньшее количество крови, что позволяет получать достоверные результаты исследований

55 при щадящем режиме отбора крови у обследуемого. Кроме того, предлагаемый режим выделения лейкоцитов позволяет интенсифицировать собствен1108358 4 массы более, чем в 2 раза дешевле . sa счет повышения выхода лейкоцитов.

Данные по времени осуществления способа представлены в табл.2.

Та бли ца 2

Угол наклона, град.

50 32 36 42 38

40 40 40

Время, мин

Из данных таблицы видно, что оптимальным является изменение угла 15 наклона пробирки с кровью при териостатировании в таком порядке: I-45, II-60, III-90, IV-90 . Время, затрачиваемое при этом режиме термостатирования, минимально при максимальном получении лейкоцитов.

Составитель Е. Колчина

Редактор К. Волощук ТехредЛ. Коцюбняк Корректор A. 06P aP

Тираж 823 Подпис ное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Иосква, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Заказ 5854/30

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная,4 з но процесс осаждения и добиться более эффективного и экономичного использования донорской крови.

Стоимость выделяемой лейкоцитарной

Предложенный способ позволяет .повысить выход лейкоцитов при одновременном сокращении времени. Он эффективен в клинической практике при дифференциальной диагностике заболеваний, а также может быть применен при изготовлении препаратов крови на станциях переливания крови.

Способ количественного определения меланина // 1107053

Способ определения хлорпропамида в сыворотке крови // 1107052

Способ определения концентрации фибронектина в растворе // 1107051

Способ приготовления водородного ферментного электрода // 1107050

Способ диагностики инфаркта миокарда // 1107049

Способ отбора коров симментальской породы,устойчивых к маститу // 1105817

Способ окрашивания нейронов // 1104376

Способ определения сульфгидрильных групп в клетках крови // 1101739

Способ определения индивидуальной чувствительности к гипербарической оксигенации при лечении гнойно- воспалительных заболеваний челюстно-лицевой области // 1101738

Способ контроля состояния сельскохозяйственных и пищевых веществ или лекарственного препарата и устройство для его осуществления // 2100805

Способ определения в пробе цельной крови распределения вероятностей в популяции эритроцитов их подмножеств и устройство для его осуществления // 2100807

Способ определения гетероциклических нитросоединений в биологическом материале // 2100808

Способ выявления лимфоидных узелков в тотальных анатомических препаратах // 2101699

Изобретение относится к медицине, а именно к анатомии, топографической анатомии, патологической анатомии и может быть использовано для изучения лимфоидных узелков в тотальных анатомических препаратах макромикроскопическом поле видения в норме, в возрастном аспекте, в эксперименте и патологии

Способ ионного парамагнитного резонанса на нервном волокне // 2101700

Изобретение относится к медицине, в частности к способам неинвазивной диагностики функционирования биологических мембран и соответствующей оценке метаболических процессов в организме на клеточном уровне

Способ прогноза хронического рецидивирующего течения заболевания у лиц, перенесших первичную рожу // 2101701

Изобретение относится к медицине, а именно инфекционным болезням и дерматологии, и может найти применение как в стационарных, так и поликлинических условиях

Способ определения реактивного лизиса клеток // 2101702

Изобретение относится к медицине, а именно к медицинской биохимии, и может быть использовано для определения реактивного лизиса клеток в содержащей комплемент биологической жидкости в клинической практике и в научных исследованиях

Способ определения наличия активности воспалительного процесса при ревматоидном артрите // 2101703

Изобретение относится к медицине и предназначено для оценки активности воспалительного процесса при ревматоидном артрите путем биохимического исследования сыворотки крови

Способ дифференциальной диагностики миокардита и миокардитического кардиосклероза // 2102749

Устройство для локального подведения биологически активных веществ // 2102750