Способ определения са-связывающих белков

Авторы патента:

G01N33/48 - биологических материалов, например крови, мочи (G01N 33/02-G01N 33/14,G01N 33/26,G01N 33/44,G01N 33/46 имеют преимущество; определение всхожести семян A01C 1/02); приборы для подсчета и измерения клеток крови (гемоцитометры) (подсчет клеток крови, распределенных по поверхности, путем сканирования этой поверхности G06M 11/02)

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ Са-СВЯЗЫВАЮЩИХ БЕЛКОВ путем насьпцения полиакриламидного геля ионами кальция в щелочных системах с последующим промыванием геля от несвязавшегося с белками кальция и выявления зон Са-связывающих белков, о тличающийся тем, что, с целью ускорения способа, после промывания гель насыщают оксалатом кальция.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИН

„„SU„„1108357

gall G 01 N 33/48

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

flO ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И OTHPblTHA

4 ф; к;,„-з,л,, Ф . .,-:, » р

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ,„, - 1

К ABTOPCHOMY СВИДЕТЕХЗЬСТВУ (? 1) 340506 9/28-13 (22) 09 ° 03.82 (46) 15.08.84. Бюл. N 30 (72) А.А. Синичкин и Б.В. Страдомский (71) Ростовский ордена Трудового

Красного Знамени государственный университет (53) 616.07 (088,8) (56) 1. Sohibeci А., Martonosi А.

Defection of Ca binding proteins

on poIijacryIamide geIs Ьу Са

autoradiography. вЂ” "AnaI. Biochem"., 1980, 104, Ф 2, р. 335-342 (прототип). (54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ Са-СВЯЗЫВАЮЩИХ БЕЛКОВ путем насыщения полиакриламидного геля ионами кальция в щелочных системах с последующим промыванием геля от несвязавшегося с белками кальция и выявления зон Са-связывающих белков, о тл и ч а ю шийся тем, что, с целью ускорения способа, после промывания гель насыщают оксалатом кальция .

1108357 2 щих белков и для количественной оценки гели сканируют на денситометре. При этом на денситограммах вы1О

15 пиков денситограмм.

ВНИИПИ Заказ 5854/30

Тираж 823 Подписное

Филиал НПП "Патент", г. Ужгород. va.Ïþîåêòèàÿ,4

Изобретение относится к биохимии, а именно к определению Са-связывающих белков, и может быть использовано при изучении их роли в метаболических процессах организма.

Известен способ определения

Са-связывающих белков вЂ” радиоиэотопный (1 ).

Недостатком радиоизотопного метода является сложность процесса эа счет применения специальных радиоактивных реактивов, аппаратуры, длительного времени экспозиции радиочувствительной пленки (до

30 дней).

Цель изобретения вЂ” ускорение способа, упрощение технологии за счет применения доступных безопасных реактивов, использования широкораспространенной аппаратуры, кратковременности, простоты операций .

Указанная цель достигается тем, что согласно способу определения

Са-связывающих белков путем насыщения полиакриламидного геля ионами кальция в щелочных системах с последующим промыванием геля от несвязавшегося с белками кальция и выявления зон Са вЂ связывающ белков после промывания гель насыщают оксалатом кальция.

Способ осуществпяют следующим образом.

Полиакриламидные гели с разде35 ленными в них белками, в том числе Са вЂ” связывающими белками, насыщают Са-ионами, помещая гели в 17-ный раствор Са(О,), на 40 мин.

Затем гели отмывают пятикратной сменой 27-ной уксусной кислоты по

10-12 мин.

Отмытый гель помещают в 107-ный раствор оксалата натрия íà 10 мин, в результате чего в гелях выявляются

45 белые полосы оксалата кальция в местах локализации белков, связывающих Са. Экспозиция в течение 10 мин приводит к развитию максимального светорассеивания зонами . 0

Затем гели отмывают от избытка оксалата натрия трехкратной сменой дистиллированной воды по 15 мин. ПосвЂ” ле отмытия гелей визуально опредевЂ” ляют выявившиеся зоны Са-свнзываюявляют эоны Са-связывающих белков.

Чувствительность предложенного способа 1 вЂ” 10 мкг ионов Са + в зоне. Время осуществления способа 2,5 часа.

Пример 1. Кислый Са-связывающий белок молока (каэеин) выделяют из цельного молока известным способом и разделяют методом дискэлектрофореза в 7,57.-ном полиакриламидном геле в 1-й (щелочной) системе по Мауреру. После дискэлектрофоретического разделения казеина гель подвергают указанным процедурам.

В геле идентифицируют 6 зон Са-связывающих белков. Интенсивность зон определяют по весу соответствующих

Пример 2. Водорастворимые белки сыворотки крови крыс подвергают дискэлектрофоретическому разделению в 7,57.-ном полиакриламидном геле в 1-й (щелочной) системе по Мауреру.

В гелях идентифицируют Са-связывающие белки описанным способом.

Обнаруживают 8 зон Са-связывающих белков среди 15 зон водорастворимых белков.

Пример 3. Методом дискэлектрофореза в 7,57.-ном ПААГ разделяют водарастворимые белки головного мозвЂ” га крыс в 1-й (щелочной) системе по

Мауреру. Идентифицируют Са-связывающие белки предложенным способом.

Обнаруживают 13 зон Са-связывающих белков иэ 18 зон водорастворимых белков.

Таким образом, предложенный спо- соб позволяет определять Са-связывающие белки в полиакриламидных гелях с помощью метода дискэлектрофореза в щелочных системах, а также упрощает определение и ускоряет его в несколько десятков раз (2,5 ч вместо 30 сут по известному способу). Предлагаемый способ прост и доступен, так как не требует специальной аппаратуры и радиоактивных реактивов, снижает требования к технике безопасности.

Способ определения са-связывающих белков

Способ определения хлорпропамида в сыворотке крови // 1107052

Способ определения концентрации фибронектина в растворе // 1107051

Способ приготовления водородного ферментного электрода // 1107050

Способ диагностики инфаркта миокарда // 1107049

Способ отбора коров симментальской породы,устойчивых к маститу // 1105817

Способ окрашивания нейронов // 1104376

Способ определения сульфгидрильных групп в клетках крови // 1101739

Способ определения индивидуальной чувствительности к гипербарической оксигенации при лечении гнойно- воспалительных заболеваний челюстно-лицевой области // 1101738

Способ подготовки гемосорбента к использованию // 1101737

Способ контроля состояния сельскохозяйственных и пищевых веществ или лекарственного препарата и устройство для его осуществления // 2100805

Способ определения в пробе цельной крови распределения вероятностей в популяции эритроцитов их подмножеств и устройство для его осуществления // 2100807

Способ определения гетероциклических нитросоединений в биологическом материале // 2100808

Способ выявления лимфоидных узелков в тотальных анатомических препаратах // 2101699

Изобретение относится к медицине, а именно к анатомии, топографической анатомии, патологической анатомии и может быть использовано для изучения лимфоидных узелков в тотальных анатомических препаратах макромикроскопическом поле видения в норме, в возрастном аспекте, в эксперименте и патологии

Способ ионного парамагнитного резонанса на нервном волокне // 2101700

Изобретение относится к медицине, в частности к способам неинвазивной диагностики функционирования биологических мембран и соответствующей оценке метаболических процессов в организме на клеточном уровне

Способ прогноза хронического рецидивирующего течения заболевания у лиц, перенесших первичную рожу // 2101701

Изобретение относится к медицине, а именно инфекционным болезням и дерматологии, и может найти применение как в стационарных, так и поликлинических условиях

Способ определения реактивного лизиса клеток // 2101702

Изобретение относится к медицине, а именно к медицинской биохимии, и может быть использовано для определения реактивного лизиса клеток в содержащей комплемент биологической жидкости в клинической практике и в научных исследованиях

Способ определения наличия активности воспалительного процесса при ревматоидном артрите // 2101703

Изобретение относится к медицине и предназначено для оценки активности воспалительного процесса при ревматоидном артрите путем биохимического исследования сыворотки крови

Способ дифференциальной диагностики миокардита и миокардитического кардиосклероза // 2102749

Устройство для локального подведения биологически активных веществ // 2102750