Ингибиторы холинэстераз
Применение четвертичных фосфониевых соединений общей формулы R - P(R2)5Br где R, - CHsCCH ; СН СНСН2 или СН -СНз-СН 2. ИЛИ C(, RO - CftHj 2 в качестве ингибиторов холинэстераз (Л с
СОЮЗ СОЖТСНИХ
МЭО
PECfMi JNH ае а»
ОПИСАНИЕ ИЭОБРЕТ
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР
ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ
Н АВТО СЙОМЪ СВИДВТОФСТВУ (21) 3590543/28-13 (22) 10.05.83 (4б) 23.09.84. Бюл. И 35 (72) Ю.Г.Жуковский, Н.А.Колчанова, Е.В.Роэенгарт, Н.Л.Фарцейгер, В.С.Бровко и Н.К.Скворцов (71) Институт эволюционной физиологии и биохимии им. И.M.Ñå÷åíîâàu Пермский научно-исследовательский институт вакцин и сывороток (53) 577. 15 (088.8) (5á) 1. Usdin E. Sn "Anticholinesterase agents", ч. I, р. 173, Ed, by
Korcrmar А. G, Intern. Епоус1. Pharmac. Iher. Per@amon Press, 1970. (54) ИНГИБИТОРЫ ХОЛИНЗСТЕРАЗ. (57) Применение четвертичных фосфо- ниевых соединений общей формулы
R1 Р (Н2) Br где. R< — СН=ССН2, СН =СНСН2 или
СН>-СН -СН2, R2 — C6H5 Н С Н9ь в качестве ингибиторов холинэстераэ
1 11 146
Изобретение относится к энзимологии, конкретно к ферментам гидролазам карбоновых кислот, и макет быть использовано в практике биохимических медицинских лабораторий для классификации ферментов холинэстераэ и выяснения особенностей их строения
Известны четвертичные аммониевые соединения тетраметиламмоний
Н (СН )4 Х (TMA) и тетраэтиламмоний 1Î
\
N (С Н 5)4 ° Х ТЭА), где Х - галоген, обладающие ингибирующим действием на ферменты холинэстеразы: типичные ацетилхолинэстеразу (АХЭ; КФ 3.1.1.7) и б утир илхолинэс т ер а з у (БуХЭ, 15
° КФ 3.1.1.8) . Антихолинэстеразное действие четвертичных аммониевых соединений известно (1 .
Недостатками данных четвертичных аммониевых соединений являются малая 20 величина ингибирующего действия на ферменты холинэстеразы и малая избирательность ингибирующего действия на один иэ двух типов холинэстераз (АХЭ или БуХЭ) . 25
Целью изобретения являются сильные обратимые ингибиторы холинэстераз с выраженной избирательностью ингибирующего действия или к АХЭ, или к БуХЭ и расширение ассортимента ингибиторов ферментов для выяснения различий в строении активного центра ферментов. ,Поставленная цель достигается применением в качестве ингибиторов ферментов холинэстераз четвертичных фосфониевык соединений.
Ранее не было известно об использовании этих соединений в качестве ингибиторов холинэстераэ. Они пред- 40 назначались лишь для органического синтеза.
Пример 1. К 1 мл 1 мМ раствора реактива Элмана, т.е. 5,5-дитио-бис-(2-нитробензойной кислоты), в 100 мИ фосфатном буфере (рН 7,5) добавляют 1 мл раствора фермента, 1 мл 0,5 М раствора КС, 1 мл Н О (в контрольной пробе) или 1 мл .раствора ингибитора (в опьггной пробе) и затем 1 мл 2,5 мИ раствора субстра
98 2 та ацетилтиохолина (АТХ) . В качестве фермента используют или АХЭ из эритроцитов крови человека, или БуХЭ из сыворотки крови лошади (серийные образцы препаратов). В качестве ингибитора используют или предлагаемое четвертичное фосфониевое соединение, или известное как ингибитор четвертичное аммониевое соединение.
С помощью фотоэлектроколориметра
ФЭК вЂ” 5ЬМ (светофильтр У 3) измеряют время (с) за которое оптическая плотность реакционной смеси возрастает на величину 0,1. (t — в контрольном опьгге без ингибитора, „ — в опьгге с ингибитором). Увеличение оптической плотности обуслоштено образованием желтого продукта взаимодействия реактива Элмана с тиохолином, образующимся при ферментативном гидролизе субстрата АТХ. Подбирают концентрацию ингибитора равной 15о, т.е. такой, чтобы скорость ферментативного гидролиза уменьшилась под действием ингибитора вдвое (г.„/t„ = 2). Чем меньше величина 3 О, тем сильнее ингибктор, В таблице представлены величины
3<О при взаимодействии холинэстераэ с предлагаемыми и известными ингибиторами.
Из данных таблицы следует, что предлагаемые ингибиторы проявляют на холинэстеразы намного более сильное ингибирующее действие, чем известные четвертичные аммониевые соединения. Так, предлагаемое соединение Br превосходит известный ингибитор (TMA) по величине ингибирующего действия на БуХЭ в 3600 раз (7200:2=
=3600) и на АХЭ в 168 раз (6200:37=
=168). Кроме того, предлагаемые ингибиторы превосходят известные (четвертичные аммониевые соли) по избирательности действия на АХЭ или на
БуХЭ. Например, ингибирующее действие соединения В7 па БУХЭ в 18 раз сильнее, чем на АХ3, а соединения В на АХЭ в 9 раз сильнее, чем на БУХЭ. (540:58=9). Известные ТМЛ и Т3А почти не проявляют избирательности.
1114698
Краткое условное название ингибитора
Ингибитор
Формула ингибитора
Фермент
Предлагаемый
СН=ССН2 P РИЗ Br
БуХЭ
СН -"СНСН -P РЬ ° Br
БуХЭ
АХЭ
СН СН СН -P Ph Br
В8
БуХЭ
АХЭ
СН СН СН2 Р Ви Вг
В10
540
БуХЭ
АХЭ
N (СН ) I
Известный
ТМА
7200
БуХЭ
6200
И (С Н5) ° Т
ТЭА
БУХЭ
4800
4700
АХЭ
Составитель В . Му кон ец
Техред С.Легеза . Корректор Е.Сирохман
Редактор И.Шулла
Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4
Заказ 6734/17 Тираж 521 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета СССР о делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб °, д. 4/5
