Способ очистки липазы @ @ от пигментов

 

СПОСОБ ОЧИСТКИ ЛИПАЗЫ ASPt AWAMORI от ПИГМЕНТОВ' посредством обработки ее водных" растворов адсорбентом с последующим осаждением целевого продукта ацетоном и высушиванием, отличающийся тем, что, с целью повышения активности целевого продукта, в качестве адсорвс бента используют макросетчатый сильм ноосновный анионит на основе хлормет тилированных сополимеров стирола и дивинилсульфида, модифицированных триметиламином.

(19) (111.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

flO ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 2512919/23-04 (22) 21.07.77 (46) 07.06.84. Бюл. Р 21 (72) A.Ê. Светлов, И.A. Крахмалец, В.В. Крючков, Л.И. Орещенко и И.A. Новикова (71) Кемеровский научно-исследова тельский институт химической промышленности Кемеровского НПО Карболит и Всесоюзный научно-исследовательский биотехнический институт (53) 577.15.07(088.8) (56) 1. Авторское свидетельство СССР

Р 368304, кл. С 07 G 7/02, 1970.

2. Патент США Р 3513073, кл. С 07 G 7/02, опублик. 1970 (прототип) .

3(51) С 12 N 9/18 A 61 К 37/48 (54) (57) СПОСОБ ОЧИСТКИ ЛИПАЗЫ

АВРсАИАМО111 ОТ ПИ(МЕНТОВ посРедством обработки ее водчых растворов адсорбентом с последующим осаждением целевого продукта ацетоном и высушиванием, отличающийся тем, что, с целью повышения активности целевого продукта, в качестве адсор с бента используют макросетчатый сильн ноосновный анионит на основе хлорме9 тилированных сополнмеров стирола и дивинилсульфида, модифицированных триметиламином.

655150

4,48

ВНИИПИ Эаказ 3948/1 Тираж 522, Подписное

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул.Проектная, 4

Изобретение относится к способам получения высокоочищенных фермент- ных препаратов, в частности к способу очистки липазы (KC 3.1.1.3), фермента, который находит применение в микробиологической промышленности, 5 в.пищевой промышленности и в медицине.

В литературе описаны способы очис тки липазы. Известен например, спо соб Очистки липаэы животного проис- 19 хождения посредством многократного фракционирования сульфатом аммония, диалиэа с последующим осаждением фермента ацетоном и высушиванием (1)., ° Недостатком этого способа является низкая.активность получаемого препарата фермента.

° Известен также способ очистки липазы Asp. awamori посредством многократного фракционирования сульфатом аммония с последующим осаждением фермента и высушиванием (2). Недостат ком этого способа также является низкая активность получаемых ферментных препаратов (5000-1200 ед), обусловленная высоким содержанием в них пиг-25 ментов и других балластных веществ.

Пель изобретения — повышение активности целевого продукта.

Это достигается за счет того, что: водные растворы, содержащие фермент- gp липазу, обрабатывают адсорбентом, представляющим собой макросетчатый сильноосновный анионит на основе хлорметилированных сопалимеров стирола и дивинилсульфида, модифицирвванных триметиламином.

Предлагаемый способ очистки липазы

Asp. ажашягь с повышенной активностью целевого продукта, заключается в обработке водных растворов фермента адсорбентом, представляющим собой 4О макросетчатый сильноосновный анионит на основе хлорметилированных сополимеров стирола и дивинйлсульфида, мод дифицированных триметиламином, с последующим ) осаждением целевого продук45 кта ацетойом и высушиванием.

Предпочтительно процесс проводят следующим образом.

Культуральную жидкость Asp. awamo

ri обрабатывают макросетчатым силь- 5() ноосновным анионитом на основе сополимеров стирола и дивинилсульфида, . модифицированных триметиламином, (AB-l7C) в хлоридной форме (сополимер с содержанием серы 0 5 2 03) при 55 рН 8-9, температуре 8-10 С и соотношением массы сухого анионита и объема раствора фермента 1:40. Время контакта анионита и раствора фермента 1, 5-2, 5 ч. При этом достигается

8-9-кратная степень осветления раст вора фермента. Нелевой продукт выделяют осаждением ацетоном с последующим фильтрованием и высушиванием при 20-25 С.

Пример 1. В плоскодонную колбу емкостью 100 мл помещают

0,6250 г, в пересчете на сухой вес, анионита AB-17C в хлоридной форме, заливают 25 мл 2,5а-ного культурального раствора грибковой липаэы Asp.

awamori (pH 8,0). и выдерживают 2 ч при 10 С и периодическом перемешиваО нии. Осветленный раствор липаэы фильтрованием отделяют ат гранул анионита. Степень осветления раствора составляет 9,6 раза. Иэ раствора фермент выделяют осаждением 75 мл ацетона с последующим фильтрованием

m высушиванием при 20-25 С.

Активность очищенной липаэы

550000 ед.

Выход 97%.

Физико-химические свойства анионита AB .- 17С.

Удельный объем в хло ридной форме в воде, мл/г 48,5

Обменная емкость в стати ".с ческих условиях по 0,1 н. раствору НС1, мг-экв/г 4,25

Содержание серы в исходном сополимере,Ъ 1,5

Пример 2. В плоскодонную колбу емкостью 100 мл помещают

0,6250 r в пересчете на суМой вес . анионита AB-17С в хлоридной форме, заливают 25 мл 2,5Ъ-ного культурального раствора грибковой липаэы

Asp.awamori (pH 8,0) и выдерживают

2 ч при 8 С и периодическом перемешивании. Осветленный раствор липаэы фильтрованием отделяют от гранул ани онита. Степень осветления раствора составляет 9,3 раза. Из раствора фермент выделяют осаждением 80 мл ацетона с последующим фильтрованием и высушиванием при 20-25 С.

Активиость очищенной липазы

500000 ед.

Выход 98%

Физико-химические свойства анионита AB-17Ñ.

Удельный объем в хлоридной форме в воде, мл/г 37,1

Обменная емкость в статиеских условиях по 0,1 н ° раствору НС1 мг-экв/г

Содержание серы в исходном сополимере,Ъ 1,7