Способ определения кодеина в сложных лекарственных смесях

 

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОДЕИНА В СЛОЖНЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СМЕСЯХ путем тонкослойной хроматографии анализируемой пробы на полиамидной плеике с последукщей идентификацией полученной ,хроматограммы в УФ-свете по значению iRf, отличающийся тем, что ,с целью повышения чувствительности и специфичностиСпособа, хроматограмму предварительно нагревают щм 115125 С и идентификацию дополнительно проводят по нативной флуоресценции. § GO СО ел 42 Од

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19) (11) 4 А

4(51) С 01 )1 30/00 с С с с

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ ц

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

"сФ с

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3613773/23-04 ,(22) 01.07.83 (46) 07.01.85. Бюл. К 1 (72) О.П.Игольникова и Л.И.Брутко (71) Всесоюзный научно-исследовательский институт фармации (53) 543.54.45(088.8). (56) 1. Пособие по химическому анализу лекарств. Под ред. М.И.Кулешовой М., "Медицина", 1974, с. 81-85.

2. Bican Fister Т. Идентификация некоторых фармацевтических смесей тонкослойной хроматографией. Acta

Pharm. Jugosl., 1962, т. 12, с. 73 °

3. Михеева М.Н., Брутко Л.И.

Идентификация димедрола, кодеина, кофеина-бензоата натрия и барбитал-натрия в жидких лекарственных формах.

"фармация", 1983, )) 1, с. 58-59 (прототип) . . 4. Wang K.Т., Rang J.S.Õ. Хроматография нуклеозидов оснований нуклеиновых кислот в тонком слое полиамидного геля. — J.Chromatogr., 1967, ч.27, р. 318. (54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОДЕИНА

В СЛОЖНЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СМЕСЯХ путем тонкослойной хроматографии анализируемой пробы на полиамидной пленке с последующей идентификацией полученной ,хроматограммы в УФ-свете по значению

IRj, отличающийся тем, что е целью повышения чувствительности .и специфичности способа, хроматограмму предварительно нагревают при 115125 С и идентификацию дополнительно

О проводят по нативной флуоресценции.

1133546

Изобретение относится к фармацевтическому анализу, конкретно к способам определения. кодеина в сложных лекарственных смесях, и может быть использовано в контрольно-аналитических лабораториях.

Известен фотометрический метод определения кодеина в лекарственных смесях, основанный на его взаимодействии с формальдегидом и оксидом селе .1О на в среде концентрированной серной кисл оти f1) .

Недостатками способа являются невозможность одновремецного определения всех компонентов смеси, невысо-15 кая чувствительность и специфичность, а также относительно большой расход анализируемой лекарственной формы.

Известен способ идентификации кодеина фосфата в смеси с фенобарбиталом, 2О амидопирином, фенацетином, ацетилса.лициловой кислотой методом тонкослойной хроматографии путем растворения анализируемой смеси в метаноле с последующим отделением инертных до- . бавок фильтрованием и хроматографированием полученного раствора в тонком слое силикагеля s присутствии веществ-"свидетелей" в течение

30 мин. в качестве элюента используют эфир. Затем хроматограмму для обнаружения зон всех компонентов последовательно обрабатывают реактивом Драгендорфа, раствором азотнокислой ртути и раствором хлорного железа с последующим нагреванием нри

150 С в течение 15 мин. Чувствительность определения кодеина фосфата в зоне 0,25 мкг (2j .

Недостатками данного способа являются сложность и длительность (не . 40 менее 60 мин), невысокая чувстви" тельность и специфичность определения.

Наиболее близким к предлагаемому 4> по технической сущности и достигаемому эффекту является способ определения кодеина в смеси с димедролом и кофеином-бензоатом натрия в.жидких лекарственных формах который заклю- 5О чается в том, что анализируемую жидкую лекарственную форму и растворы соответствующих веществ-"свидетелей" наносят на.полиамидную пленку и хро- . матографируют в системе хлороформ- 55 эфир 15:5 или хлороформ-эфир 22:3.

Предварительная обработка полиамидных .пленок 0,0057.-ным щелочным раство2 ром флуоресцина в бутаноле позволяет в УФ-свете (254 нм) обнаружить эоны разделенных компонентов. поглощающих в УФ-области, в виде темных пятен на флуоресцирующем фоне )3) .

Недостатками известного способа являются невысокая чувствительность (0,2 мкг в зоне) и низкая специфичность, так как идентичность компонентов устанавливается только по значению 11 .

Цель изобретения — повышение чувствительности и специфичности способа определения кодеина в сложных лекарственных смесях.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу, заключающемуся в тонкослойной хроматографии анализируемой пробы на полиамидной пленке с последующей идентификацией полученной хроматограммы в УФ-свете по значению 11, хроматограмму предварительно нагревают при 115-125оC и йдеитификацию дополнительно проводят по нативной флуоресценции.

Обнаружение зон веществ на хроматограммах по натинной флуоресценции является одним из наиболее чув- . ствительнык способов. Однако зона кодеииа в обычных условиях опыта не обнаруживается при непосредственном просматривании хроматограмм на полиамидной пленке в УФ-свете.

Предварительное нагревание полученньи хроматограмм при 115-125 С позволяет эа счет специфической флуоресценции обнаружить ультрамалые ко-: личества кодеина (0,02 мкг в зоне) .

Оптимальность укаэанного температурного.интервала объясняется тем, что нагревание хроматограмм при более низкой температуре менее эффективно, так как при этом требуется большая затрата времени, более высокая температура нежелательна ввиду опасности деструкции.полиамидных слоев и снижения чувствительности оп" ределения (табл.. 1) .

В табл. 1 показана зависимость чувствительности обнаружения кодеина на полиамидных пленках в УФ-свете от температуры и времени нагревания хроматограммы.

Как видно из результатов, представленных в- табл. 1 необходимое время о нагревания хроматограммы при 115-125 С составляет 2 мин. Меньшее время нагревания трудноконтролируемо. Большее

3 1133 время нагревания не приводит к повышению чувствительности способа, а только увеличивает время анализа.

Преимуществом предлагаемого способа является так же то, что одновременно с кодеином проводится разделение и обнаружение хроматографических зон всех других компонентов лекарственных смесей по специфической фпуоресценции с чувствительностью, превышаю- 10 щей в 10 раз известный метод (табл.2) .

При этом цветной оттенок флуоресценции

1 служит удобным вспомогательным средством, позволяющим в совокупности

i со значением Rf наиболее достоверно идентифицировать кодеин и другие компоненты смеси.

Универсальность способа состоит в том, что хроматографические зоны .практически всех компонентов иссле- 2б дуемых лекарственных смесей, анализируемые данным способом, обладают собственной (нативной) флуоресценцией, что можно объяснить особенностью протекания фотохимических процессов в полимерах, в данном случае в полиамиде. Введение любой добавки (зона вещества) приводит к протеканию в полимере сложных фотохимических процессов, причем тепло и облучение УФ- ЗО светом оказывают существенное влияние на процессы, сопровождающиеся флуоресценцией.

° Полиамидные пленки готовят известным методом Г4) путем растворения . 35 полиамидной смолы в муравьиной кисло- . те, смачивания полученных вязким раст. вором обеих сторон полиэтилентерефталатной пленки (основы) и высушивания в.камере, насыщенной парами воды.

Полученные полиамидные пленки об-. ладают высокой механической прочI I ностью для длительного хранения..

Определение кодеина в сложных лекарственных смесях осуществляют 45 следующим образом.

Раствор навески порошка в этиловом спирте с помощью микрошприца (МШ-1) или калиброванных капилляров наносят на линию старта на рас-.50 стоянии 5 мм от нижнего края поли-, амидной пленки размером 5х5 см и одновременно наносят этанольные растворы веществ- "свидетелей" тех же концентраций. 55

Хроматографирование осуществляют восходящим способом в подходящей дпя . каждой смеси системе растворителей.

546

Длина пробега фронта растворителей составляет 40 мм и является вполне достаточной для полного разделения компонентов смеси. При этом время хроматографирования 5-7 мин.

Затем полученную хроматограмму нагревают в сушильном шкафу при 115О

125 С в течение 2 мин, и обработанную таким образом хроматограмму про-. сматривают в УФ-свете при длинах волн

254 и 366 нм.

При этом обнаруживают на полиамидной пленке зоны компонентов смеси и соответствующих веществ-"свидетелей". По совпадению значений Й 1 и цветного оттенка флуоресценции исследуемых и стандартных веществ ("свидетелей") идентифицируют состав смеси.

Пример 1. 0 05 r порошковой смеси состава: кодеина фосфат

0,015, фенобарбитал 0,05; амидопирин 0,3, растворяют в 1 мл 70Х-ного этилового спирта. Параллельно готовят растворы веществ-"свидетелей": кодеина фосфата, фенобарбитала и ! амидопирина.

На линию старта полиамидной пленки наносят по 0,5 мкл исследуемого раствора и растворов "свидетелей" и хроматографируют в системе растворителей эфир-метанол — 25X-ный водный аммиак (1221:1) .

Затем хроматограмму нагревают в течение 2 мин при 115-125 С.

При обнулении хроматограмм УФ-све-. том обнаруживают зоны трех веществ, которые идентифицируют по значениям

Rf.и цветному оттенку флуоресценции эоны (табл. 2).

Пример 2. 0,05 г порошковой смеси состава: кодеина фосфат 0,01, фенацетин 0,3; кислота ацетилсалициловая 0,3, растворяют в 1 мп 70Х-ного этилового спирта. Далее поступают, как описано в примере 1, используя для хроматографирования систему растворителей ацетон-эфир-ледяная уксусная кислота (15:5:0,5) .

При облучении хроматограммы УФсветом обнаруживают зоны трех веществ,которые идентифицируют по значениям и цветному оттенку флуорес-. ценции зон (табл. 3) °

Пример 3. 0,02 г порошковой смеси состава: кодеина фосфат 0,02> папаверина гидрохлорид 0,02, эфедрина гидрохлорид 0,025, фенобарбитал

1133546

Таблица 1

Температура ос

Чувствительность, мкг в зоне, при времени нагревания, мин

4 j 6

105

0,04

0,05

0,03

0,03

0,02

115

0,02

0,02

0,03

125

0,02

0,02

0,03

0,04

0,03

0,03

0,04

135

0,05

Таблица 2

Окраска в УФ-свете

Вещество

254 нм 366 нм

0,51

Кодеина фосфат розовая

Голубая

0,71

Амидопирин

Фенобарбитал

Голубая

Темная

0,28

Синеватофиолетовая

Таблица 3

Окраска в УФ-свете

Вещество

254 нм 366 нм

Кодеина фосфат

0,59

Желтая

Желтоваторозовая

0,79

Фенацетин

Ярко-зеленая

Светло-голубая

Кислота ацетилсалициловая

Синяя

0,43

Синяя

0,025 димедрол 0,03, растворяют в

1 мл 70Х-ного этилового спирта и да-: лее поступают, как описано в примере 1, в присутствии соответствующих веществ-"свидетелей".

При облучении хроматограмм УФсветом, обнаруживают эоны пяти seществ, которые идентифицируют по значениям И и цветному оттенку флуорес5 ценции (табл. 4) .

Желтая Желтовато1133546 Таблипа 4

Окраска в УФ-свете Вещество

254 нм 366 нм

Кодеина фосфат

Желтоваторозовая

О, 51 Желтая

Папаверина гидрохлорид

0,70 - Ярко-голубая

Ярко-голубая

Эфедрина гидрохлорид

Тускло-голуб ая

0,80 Зеленоватоголубая

Фенобарбитал

0,28 . Темная (гашение) Синеватофиолетовая

Светло-seленая

0,91

Желтоватозеленая

Димедрол

Филиал ППП"Патент", г Ужгород, ул. Проектная, 4

Составитель В.Шкилъкова

Редактор В.Петраш Техред Л.Иикеа . Корректор, И.Иуска. 1

Заказ 9945/38 Тирак 898 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35,Раушская.наб ., д. 4/5