Способ оценки иммунологического статуса больного

 

СПОСОБ ОЦЕНКИ ИММУНОЛОГИЧЕСКОГО СТАТУСА БОЛЬНОГО путем исследования лимфоцитов в реакции розеткеобразования , отличающийся тем, что, с целью повьнпения точности способа, перед постановкой реакции розеткообразования лимфоциты окрашивают 0,05%-ным раствором П-нитротетразолия синего, а оценку осуществляют по количеству розеткообразующих субпопуляций лимфоцитов и их функциональной активности.

СОЮЗ COBETCHHX

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИН (!9) (III

4рц А 61 К 39/00

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

AO ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ

OllHCAHHE ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н ABTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 3425207/28 13 (22) 19.04.82 (46) 23.03.85. Бюл. У 11 (72) И.Г.Шиленок и О.Б.Гуревич (7 1) Горьковский государственный медицинский институт им. С.M."Êèðîâà (53) 615.375(088.8) (56) 1. Петров P.Â. Итоги науки и техники. Сер. "Общие вопросы патологии". M., 1976, с. 76-83. (54) (57) СПОСОБ ОЦЕНКИ ИИИУНОЛОГИЧЕС.

КОГО СТАТУСА БОЛЬНОГО путем исследования лимфоцитов в реакции розеткообразования, отличающийся тем, что, с целью повьипения точнос-. ти способа, перед постановкой реакции розеткообразования лимфоциты окращивают 0,05Х-ным раствором П-нитротетразолия синего, а оценку осуществляют по количеству розеткооб-разующих субпопуляций лимфоцитов и их функциональной активности.

1 1146052

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторным исследованиям крови, и может быть использовано для оценки Т и В систем лимфоцитов.

Известен способ оценки иммунологического статуса больного путем исследования популяций Т и В-лимфоцитов, включающий проведение реакции розеткообразования И .

Однако известный способ не позволяет осуществлять оценку функционального состояния субпопуляций лимфоцитов и те11 самым является неточным

Целью изобретения является повышение точности оценки иммунологического статуса.

Указанная цель достигается тем, что согласно способу оценки иммунологического статуса больного путем исследования лимфоцитов в реакции розеткообразования, перед постановкой реакции розеткообраэования лимфоциты окрашивают 0,05%-ным раствором П-нитротетразолия синего, а оценку осуществляют по количеству розеткообоазующих субпопуляций: лимфоцитов и их функциональной активности.

Способ осуществляется следующим образом.

Для постановки реакции берут

1лимфоциты9 выделенные из гепаринизированной веноэной. крови (1-3 мл) в градиенте плотности, равном 1,08.

Дважды отмывают средой 199, концентрацию лимфоцитов доводят после под6 счета в камере Горяева до 2 ° 10 в/мл

В две пробирки наливают по 0,01 мл взвеси лимфоцитов и смешивают с равным объемом 0,057-ro раствора

П-нитротетразолия синего, приготовленного на фосфатном буфере рН 7,27,4 и инкубируют 1 ч при 37 С. Затем клетки осаждают центрифугированием в течение 5 мин при 1000 об/мин надосадочную жидкость убирают, объем доводят до исходного (09 1 мп) .средой 199 и осадок ресуспенэируют.

Перед постановкой реакции розеткообразования проводят тест на жизнеспо,собность лимфоцитов 17о Hûì водным раствором эозина. Процент жизнеспособных клеток составляет 95-987.

Далее реакции розеткообраэования с эритроцитами барана и с эритроцитами, "покрытыми" антителами и комплементом (ЕАС-розетки) проводят как в известном способе.

Количественную оценку ведут по числу розеткообраэующих клеток на

100 лимфоцитов, качественную — по числу гранул восстановленного формаэана в роэеткообразующих клетках (подсчет велся в 507 розеткообразующих клеток).

Используемый краситель П-нитротетраэолий,синий, химическая формула СО "„о И1 О С12 мол. M 81» 66 (Реанал, Венгрия), соль тетразолия, используемый в гисто- и цитохимических исследованиях для выявления дегидрогенаэ в присутствии определенного субстрата окисления (сукцинат, лактат, глицерофосфат натрия и др.) . Предлагаемая реакция проходит в бессубстратной среде, поэтому свидетельствует о суммарной активности многих ферментов, ведающих окислением.

Предлагаемая концентрация красителя в растворе 0,057 является оп- тимальной, так как при проведении серии опытов по титрованию необхо— димой концентрации отмечено, что концентрация, 0,047. слабо окрашивала клетки, а концентрация 0,067 приводила к снижению их жизнеспособности, хотя окраска была так же выражена, как и при 0,057..

Пример. Больной С.Е., 9 дн., находился в городской детской больнице ¹ 1 с диагнозом пузырчатка новорожденных. Постгипоксическая

25

35 перинатальная энцефалопатия, синдПроведенные исследования показывают высокую метаболическую активность как Т, так и В-лимфоцитов. Причем активность В-лимфоцитов выше, что подтверждает острую фазу заболером повышенной нервно-рефлекторной возбудимости средней тяжести. Ребенок поступил на второй день болезни.

Проводились иммунологические исследования. Концентрация иммуноглобулина 14/4 3 G 800 мг, %93 Ì 144 мг/7., 3/A — следы. Содержание Т-лимфоцитов

45 . (Е P0K) 67%9 В-лимфоцитов 25Х. Функциональная активность Т-лимфоцитов

18,84, активность В-лимфоцитов 25,3 гранул в клетке,при этом количество розеткообразующих Т-клеток (ЕА-POK) 67%, ЕАС-РОК 237, жизнеспособность клеток перед постановкой теста розеткообраэования 97Х.

3 1146052 4 вания и свидетельствует. об активном ку иммунологического статуса больнопроцессе антителогенеза. На основа- го, т.е. оценить состояние напрянии проведенных исследований можно женности клеточного и гуморального предположить благоприятный исход за- звеньев иммунитета в различные фазы болевания. Всего обследовано 30 заболевания по функциональной акдетей с различной патологией (сепсис, тивности иммунокомпонентных клеток. пиелонефрит, пеомерулонефрит, брон- Кроме того, способ позволяет вйявхиальная астма, острые респиратор- лять вторичные иммунопатии, связанные инфекции). ные с теми или иными энэиматическими

Таким образом, предлагаемый спо- 1и дефектами. Все это позволяет повысоб позволяет осуществлять как коли- сить точность оценки иммунологи-. чественную, так и качественную оцен- ческого статуса больного.

Составитель Т.Крюкова

Редактор О.Черниченко Техред Л.Микеш Корректор Л.Пилипенко

Заказ 1253/6 Тираж 722 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35 Раушская наб;, д. 4/5

Филиал ПНП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4