Штамм @ @ @ -тест-объект для определения продукции @ - триптофана

 

Штамм Pseudomonas Species МЗ - . (коллекция Центрального музея промышленных микроорганизмов Института ВНИИГенетика, коллекционный номер ЦМПМ В-3037) - тест-объект для oiqjeделения продукции L-триптофана.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19) (11)

GD4 С 12 Q 1/04; С 12 Q 1/04

С 12 R 1/38

ГОСУДАРСТ8ЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ

I

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ;;;: )3

К ABTOPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ би:.:,:,,;.:.:, t

И%

° Ф

Ю

,ю (21) . 3743422/28-14 (22) 25.05.84 (46) 15.11.85. Бюл. N 42 (71) белорусский ордена Трудового Красного Знамени государственный университет им. В. И. Ленина (72) Н. П. Максимова, И. Н. Олехиович, P. А. Желдакова и Ю. К. Фомичев (53) 663;18 (088.8) (56) Конова И. и Вербина Н. Микробиология, 1966, 35, вып. 5, с. 906.

Вербина Н. Микробиология, 1966, 35, вып. 1, с. 107. (54)ШТАММ PSEUDOMONAS SPECIES МЗ +

ТЕСТ вЂ” ОБЪЕКТ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ IIPO—

ДУКЦИИ 1TÐÈÏÒÎÔÀHA. (57) Штамм Psegdomonas Species ЩЗ (коллекция Центрального музея промышленных микроорганизмов Института

"ВНИИГенетика", коллекционный номер

ЦМПМ В вЂ” 3037) — тест-объект для определения продукции ?триптофана.

1 11914

Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается нового штамма, являющегося тест-объектом для определения продукции L-триптофана..

Целью изобретения является получение нового штамма Pseudomonas Species МЗ, . высоко специфичного и чувствительного по отношению к L-триптофану, с помощью которого можно выявлять продукцию последнего, начиная с 0,5 мкг/мл, на простых 10 по составу жидких и агаризованных минеральных средах (не содержащих дополнительно каких-либо ростовых факторов), среди различных групп микроорганизмов, в том числе ассимилирующих низшие спирты 15 (этанол и метанол) в качестве источников углерода и энергии.

Предлагаемый штамм Pseudomonas Species

МЗ получен с помощью, мутагенеза N-метил-N -нитро-N- нитроэогуанидином и является 29 ауксотрофным триптофанзависимым мутантом (имеет мутацию в trpB-локусе) штамма дикого типа Pseudomonas Species М, вьщеленного из сточных вод Минского завода медпрепаратов. 25

Идентификацию trpB-мутации у бактерий

Pseudomonas species МЗ осуществляли по отсутствию способности роста на антранило.вой кислоте и индоле, добавленных в среду вместо L-триптофана, а также биохимически по утрате активности 1:субъепиницы фермента триптофансинтазы (КФ. 4.2.1.20) .

Рост клеток штамма Pseudomonas species

МЗ на минеральных средах без Ь-триптофана полностью отсутствует. Минимальная концентрация L-триптофана, обеспечивающая рост

: бактерий в жидких и агаризованных минеральных средах;соответствует 0,5 мкг/мл.

Штамм Pseudomonas Species M3 хранится.. в Центральном музее промышленных микроорганизмов ВНИИГенетика (Москва), N  — 3037.

Штамм Pseudomonas Species МЗ имеет следующие характеристики.

Морфологические особенности штамма.

Клетки прямые, палочковидной формы с округленными концами, 0,6х2 — 3 /Ц, подвижные с 2-4 монополярными жгутиками, грамотрицательные, спор не образуют.

Культуральные признаки.

Колонии на агаризованных питательных средах (мясо-пептонном arape, Кинг В агаре) гладкие, плоские, круглые, край ровный, серовато-белые. Через 24 ч при 28 С образуют колонии размером 2 — 3 мм. Рост по уколу в МПА умеренный, в основном на поверхности среды. В жидких питательных средах образует интенсивную муть.

Хорошо растет иа минеральных средах простого состава, дополненных L-триптофаном, и не нуждается в добавлении ростовых факторов и аминокислот.

Физиолого-биохимические признаки.

По отношению к кислороду — облигатный аэроб. Оптимальная температура роста

28 — 30 С, рН среды в пределах 6,8 — 7,3.

Азот утилизирует в виде солей аммония, мочевины, нитратов.

Пигменты.

Образует желто-зеленый водорастворимый флюоресцирующий пигмент на Кинг В агаре.

Внутриклеточного пигмента не образует.

Реакция на оксидазу и каталазу положи.тельная. Реакция Фогес-Проскауэра отрицательная. Индол не образует. Тест на аназроб-. ную аргинин-дегидролазу положительный. Реакция на анаэробную денитрификацию отрицательная. Лецитинаэная активность отсутствует.

Не гидролизует крахмал, желатин, Твин-80.

В качестве источников углерода использует глюкозу, глицерин, сахарозу, галактозу, мальтозу, фруктозу, этанол, метанол, тирозин, фенилаланин, орнитин, глицин, лейцин, глютаминовую кислоту, аспарагиновую кислоту. Не утилнзирует арабинозу, маннозу, ксило- эу, лактозу, маннит, раффинозу, дульцит, сорбит, целлобиозу, инозит, серии, лизин, триптофан, антраниловую. кислоту, ацетамид.

Штамм идентифицирован как Pseudomonas

species согласно определителю Bergey.

Пример 1. Определение продукции Ь-триптофана с помощью тест-объекта

Pseudomonas species МЗ производят следующим образом.:

Делают посев культуры Pseudomonas

species M3 с косяка в МПБ (мясо-пептон/ ный бульон), либо в другую питательную среду, обеспечивающую рост бактерий, и культивируют в течение ночи при 28 С. .Затем бактериальные клетки отмывают дважды физиологическим раствором с помощью центрифугирования (10 мин, 5000 g) и ресуспендируют до первоначального объеьв в этом же растворе. 0,1 мл суспензии клеток

Ьносят в пробирку с 4 мл расплавленного и охлажденного до 45 .С минимального полужидкого агара (0,7%), приготовленного на основе минеральной среды М9, содержащего в качестве источника углерода глюкозу (в концентрации 0,2%) и наслаивают вторым слоем на поверхность агаризованной среды (1,5%) того же состава. После застывания верхнего слоя с культурой тест-объекта уколом делают посевы отдельных клонов испытуемых на продукцию L-триптофана культур микроорганизмов, утилизирующих в качестве источника углерода и энергии

Составитель Н. Афанасьева

Техред А. Бабинец Корректор С. Шекмар

Редактор Т. Колб

Тираж 524 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж вЂ” 35, Раушская наб;, д. 4/5

Заказ 7121/24

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4

3 11914 глюкозу (по 20 — 30 клонов на чашку Петри). Пробы выращивают в течение 24—

48 ч при 28-30 С. Вокрут колоний, клетки которых продуцирует Е-триптофан, наблюдаются четкие, интенсивные эоны роста тест-культуры Pseudomonas species M3, размеры котррых зависят от количества синтезируемого L-триптофана.

Пример 2. Посевной материал тест-культуры Pseudomonas species M3 и последующие процедуры производят как в примере 1, за исключением того, что в качестве источника углерода и энергии в используемые минеральные среды добавляют вместо глюкозы этанол (в концентрации 1%) и делают посевы испытуемых на продукцию

1триптофана культур, микроорганизмов, утилиэирующих этанол.

Пример 3. Посевной материал тесткультуры Pseudomonas species M3 и после64 4 дующие процедуры производят как в примере 1, за исключением того, что в качестве источника углерода и энергии в используемые минеральные среды добавляют метанол (в концентрации 1%) и делают посевы испытуемых на продукцию L-трнптофана культур микроорганизмов, утилизирующих метанол. Пробы выращивают в течение 48 — 72 ч.

Штамм Pseudomonas Species МЗ яюйется мутантом по гену, что. обеспечивает его потребность и высокую специфичность по отношению к ?триптофану. С помощью штамма Pseudomonas species МЗ можно выявлять и изучать продукцию 1:триптофана, начиная с 0,5 мкг/мл, на простых по соетаJ. ву минеральных средах среди различныхгрупп микроорганизмов, в том числе ассимилирующих низшие спирты (этанол и метанол) в качестве источников углерода и энергии.,