Способ определения виснадина

 

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВИСНАДИНА путем обработки анализируемой пробы химическим реагентом с последующим измерением интенсивности флуоресценции , отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности и селективности определения и сокраи1,ения времени определения, в качестве химического реагента используют водный насыщенный раствор брома и измеряют интенсивность флуоресценции полученного раствора.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (5D 4 G 01 N 21 64

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

IlO ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ /"

К АВТОРСКОМУ(СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 3790886/23-04 (22) 31.07.84 (46) 15.11.85. Бюл. № 42 (71) Курский государственный медицинский институт (72) А. А. Хабаров, О. А. Григорьев, Г. А. Дрозд и .Н. Ф. Змейкова (53) 543.42.062 (088.8) (56) Tyfczynska 1. Photometric determination of drugs containing carboni1 gro s.

D/S Pharm pharmacol PAN, 1970, ч. 22, № 5, п. 337 — 343.

Федорин Г. Ф., Георгиевский В. П.

Применение хроматографии для идентификации некоторых производных 3 - и сс-пирона,—

Растительные ресурсы, 1973, вып. 3, т. 1Х, с. 467 — 472.

„„SU„„1191789 А (54) (57) СПОСОБ ОГ! РЕДЕЛ Е НИ Я

ВИСНАДИНА путем обработки анализируемой пробы химическим реагентом с последующим измерением интенсивности флуоресценции, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности и селективности определения и сокращения времени определения, в качестве химического реагента используют водный насыщенный раствор брома и измеряют интенсивность флуоресценции полученного раствора.

1191789

Изобретение относится к аналитической химии, а именно к способам определения

BHcHBJIèíà, и может быть применено для качественного и количественного анализа этого соединения в различном материале для фармацевтических исследований.

Виснадин представляет собой производное фуранохромона и содержится в плодах растения аммизубная, Целью изобретения является повышение чувствительности и селективности определения и сокращения времени определения.

Пример !. Качественное определение виснадина.

К 1 — 2 мг виснадина прибавляют 8—

lO мл дистиллированной воды, 2 капли водного насыщенного раствора брома и встряхивают. В ультрафиолетовом свете со светофильтром УФС вЂ” 3 или УФС вЂ” 6 наблюдают яркую фиолетовую флуоресценцию.

Пример 2. Качественное определение виснадина в растительном сырье.

1 — 2 г измельченного сырья экстрагируют 100 мл смеси этилового спирта и хлороформа (3:7). Для выделения виснадина применяют хроматографию на тонком закрепленном слое силикагеля марки LS

5/40 р+1ЗЯ гипса. Пластинки активируют при 110 С в течение 30 мин. О,l мЛ экстракта наносят на пластину и хроматографируют в системе растворителей гексан этиловый эфир — этилацетат (12:12:1). После этого пластину высун ивают и опрыскивают водным насыщенным раствором брома. В

УФ-свете наблюдают флуоресцирующее ярко-фиолетовое пятно, что свидетельствует о присутствии виснадина.

Пример 3. Количественное определение виснадина в препарате «Ависан».

Таблетки «Ависан» содержат по 0,05 г суммы фурокумаринов и хромонов, выделенных из аммизубной.

Точную навеску (0,350 г) мелкоизмельченных таблеток «Ависана» переносят в мерную колбу на IOO мл, прибавляют 20 мл

96О-ного этилового спирта, встряхивают в течение 5 мин и добавляют дистиллированную воду до метки. Энергично встряхивают, растворяя препарат, 5 — 10 мин.

Данный раствор «Ависана» переносят в делительную воронку и экстрагируют 100 мл хлороформа, приливая его порциями по

10 мл. Аликвотную часть хлороформной вытяжки (10 мл) упаривают досуха на водяной бане и остаток растворяют в 1 мл этилового спирта (96Я) и 8,9 мл воды.

К полученному раствору добавляют 0,1 мл водного насыщенного раствора брома и измеряют интенсивность флуоресценции полученного раствора по отношению к стандартному с содержанием виснадина 10 мкг/мл.

Содержание виснадина определяют по калибровочному графику. Результаты определения виснадина в «Ависане» представлены в табл. 1.

Таблица 1

Навеска таблеток, r

Метрологические характеристики

Найдено виснадина, г

0,000400

0,000410

0,000390

0,000412

0,000420

Х 406 10 б= ».10 г,0,95 = 14 10 6

0,3506

0,3504

0,3496

0,35»

0,3490

А 3,5 о а = 406 10 6+

+ 14 ° 10

1 таблетка препарата содержит 0,00041 г виснадина, т.е около 8Я. При данной методике определения другие соединения в растворе с бромом не флуоресцируют, что проверялось опытным путем. Полнота экстрагирования (93 — 95Я) проверялась хроматографированием оставшегося после экстрагирования хлороформом раствора препарата.

30 Пример 4. Количественное определение виснадина в препарате «Фловерин».

Таблетки «Фловерин» содержат по 0,05 г виснадина и дигидросамидина.

Точную навеску (0,350 г) мелкоизмельченных таблеток «Фловерина» переносят в

35 мерную колбу на 100 мл, прибавляют

20 мл 96Я-ного этилового спирта, встряхивают в течение 5 мин, добавляют дистилл ированной воды до метки. Энергично встряхивают 5 — 10 мин, растворяя препарат..

Данный раствор препарата переносят в делительную воронку и экстрагируют 100 мл хлороформа, приливая его порциями по

l 0 мл. Аликвотную часть хлороформной вытяжки (25 мл) упаривают досуха на водя-. ной бане и остаток растворяют в 0 2 мл

45 гексана. Это количество наносят микропипеткой на хроматографическую пластину с тонким закрепленным слоем силикагеля LS 5/40,и + 1Зо гипса. Хроматографируют в системе растворителей гексан— изоамиловый спирт (2:1) RF виснадина рав50 но 0,58. Зону виснадина, выявленную по величине Rf или по стандартному образцу виснадина, количественно переносят в пробирку и элюируют 9,9 мл дистиллированной воды. Полнота десербции составляет

98 — 99Я. К раствору, отделенному от осадка после элюирования, добавляют 0,1 мл водного насыщенного раствора брома.

Флуориметрируют исследуемый раствор по отношению к стандартному с содержанием

1191789

Таблица

Цвет флуоресценции после обработки раствором брома

Название кумарина

На хроматограмме в тонком слое силикагеля

В растворе

Кумарин незамещенный

6-Метилкумарин

Умбеллиферон с

Келлин

Бледно-голубой

Бледно-голубой

Виснадин ирко-фиолетовый

1ÐK0 -фиолетовый

Императорин

Пеуценидин

Бледно- синий, быстро затухающий

Бледно-синий

Ангелицин

Бергаптен

Изопимпинелин

Ксантоток сии

Ксантотоксол

10 мкг/мл виснадина. Содержание виснадина н образце определяют по калибровочному графику. Таблетки «Фловерина» содержат около 487(, виснадина.

Пример 5. Количественное определение виснадина в аммизубной.

5 г мел коизмельченных плодов растения экстрагируют 100 мл смеси 96Я-ного этилового спирта и хлороформа (3:7) .

0,1 мл этого раствора наносят на хроматограмму из силикагеля марки LS 5/40 ц+

+1ЗЯ гипса, активированную 30 мин при

110 С. Пластину с нанесенной пробой высушивают и помещают в камеру с системой растворителей гексан — диэтиловый эфир— этилацетат (12:12:1) и хроматографируют 1 восходящим методом. После высушивания

В табл. 2 представлены данные о флуоресценции виснадина и достоверных образцов кумаринов, наблюдаемые при использовании описываемого способа.

Интенсивность флуоресценции виснадина после взаимодействия его с бромом не изменяется в течение 2 ч. Прямолинейная зависимость между интенсивностью флухроматограммы в течение 5 мин на воздухе в ультрафиолетовом свете уста на влива ют локализацию зоны виснадина и эту зону с Rf=0 38, отмеченную по стандарту виснадина, количественно переносят в пробирку, прибавляют 9,9 мл дистиллированной воды, элюируют 5 — 10 мин и, отделив раствор от осадка силикагеля, добавляют 0,1 мл водного насыщенного раствора брома. Флуориметрируют полученный раствор по отношению к стандартному с содержанием виснадина

10 мкг/мл. Содержание виснадина определяют по калибровочному графику. Плоды растения содержат 0,008 г виснадина, т е. около 0 2 Я. Подобной реакции не дают близкие по структуре соединения: кумарин, ангелицин, псорален, ксантотоксол, изопимпинелин, ксантотоксин и другие. оресценции и концентрацией виснадина лежит в пределах 0,5 — 10 мкг/мл.

Анализ возможно проводить при достаточно широком диапазоне рН как в нейтральной, так и кислой среде.

Чувствительность известного способа составляет 30 мкг/мл, описываемого

1191789

Продолжение табл. 3

Время, мин, по способу

Операции известному (про го тип) предлагаемому

Таблица 3

Наблюдение флуоресценции

Время, мин, по способу

Операции

Итого

Подготовка раствора

Хроматографирование

Обработка хроматог раммы 5

Добавление реактивов

Составитель В. Шкилькова

Техред И. Верес Корректор И. Муска

Тираж 896 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и -открытий

1! 3035, Москва, Ж вЂ” 35, Раушская наб., д. 4(5

Филиал ППП «Патент», г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Редактор Н. Швыдкая

Заказ 7150/40

0,5 мкг/мл, что в 60 раз выше известного.

Использование описываемого способа экономично и требует меньших затрат времени (см. табл. 3). известному предлагаемому (прототип) Из приведенных данных видно, что описываемый способ обладает более высокой чувствительностью, селективностью и экспрессностью, чем известный и позволяет качественно и количественно определять виснадин в субстанции, лекарственных препаратах и растительном сырье. Обладая простотой и экономичностью, предлагаемый способ применим в контрольноаналитических лабораториях и заводских лабораториях фармацевтических предприятий для контроля качества препарата и производства его, а также в фармакогностичЕских исследованиях для анализа лекарственных растений, содержаших висна-— дин, и поиска новых растений — источников этого соединения.