Способ определения функциональной активности фагоцитирующих клеток

 

Изобретение относится к иммунологии . Цель изобретения - ускорение и упрощение способа за счет использования цельной взвеси лейкоцитов. Готовят чашки Петри со стандартными лунками в агарозной среде. При спонтанном осаждении эритроцитов в растворе желатины получают лейковзвесь. Готовят рабочую концентрацию лейкоцитов 5«10 кл/мл в среде 199. Клетки вносят в лунки. Затем чашки инкубируют в течение 6 и 24 ч. После этого клетки фиксируют раствором формалина. Удаляют агарозу. Чашки отмывают, высушивают. Спонтанную миграцию оценивают при микроскопии, измеряя зону миграции с помощью окуляр-микрометра. Величину спонтанной микрации (СМ) клеток крови больных и первого из доноров сравнивали § со СМ клеток второго донора. Прини- 1 мают СМ клеток второго донора рав- Iwr ной 1,0. Высчитьшают индекс спонтанЧ ной миграции по отношению величины | СМ клеток больного к величине СМ 2 клеток донора-. to ел 4 QO СХ) 00

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК..SU» 12543

А1 (51)4 G 01 N 33 80

//."

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И OTHPblTHA

Н АВТОРСН0МУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 3769878/28- 14 (22) 09.07.84 (46) 30.08.86. Бюл. N - 32 (71) 1-й Ленинградский ордена Трудового Красного Знамени медицинский институт им. акад. И.П. Павлова (72) И.С. Фрейдлин и А.А. Тотолян (53) 616.07(088.8) (56) Nelson R.D., Quie p.G., Simmous R.Z. — Chemotaxis undes agarose . а new and simple method for measuring chemotaxis and spontaneous

inigration of human polimorphonuclear

leucocytes and inonocytes. — J. Immunolopy, f975 155, Р 6, с. 16501656. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ ФАГОЦИТИРУЮЩИХ КЛЕТОК (57) Изобретение относится к иммунологии. Цель изобретения — ускорение и упрощение способа эа счет использования цельной взвеси лейкоцитов.

Готовят чашки Петри со стандартными лунками в агарозной среде. При спонтанном осаждении эритроцитов в растворе желатины получают лейковэвесь.

Готовят рабочую концентрацию лейкоцитов 5 10 кл/мл в среде 199. Клетки вносят в лунки. Затем чашки инкубируют в течение 6 и 24 ч. После этого клетки фиксируют раствором формалина. Удаляют агарозу. Чашки отмывают, высушивают. Спонтанную миграцию оценивают при микроскопии, измеряя зону миграции с помощью окуляр-микрометра. Величину спонтанной микрации (СМ) клеток крови больных и первого из доноров сравнивали щ

O со СМ клеток второго донора. Принимают СМ клеток второго донора равной 1,0. Высчитывают индекс спонтан ной миграции по отношению величины

СМ клеток больного к величине СМ клеток донора;

Изобретение относится к мецицине, в частности к иммунологии.

Целью изобретения является ускорение и упрощение способа эа счет использования цельной взвеси лейкоВеличину спонтанной миграции (СМ) клеток крови больных и одного из доноров сравнивают со СМ клеток второго донора, принимая миграцию клеток второго донора равной 1,0.

Высчитывают индекс спонтанной миграции (ИСМ) путем деления величины

СМ клеток больного на величину CM клеток донора.

II р и м е р 1. Больная У„ 41 года, диагноз бронхиальная астма

Составитель В.Решетняк

Техред И.Попович

Корректор М.Максимишинец

Редактор М.Циткина

Заказ 4714/48

Тираж 778 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 цитов.

Способ осуществляют следующим образом.

Готовят чашки Петри (40 мм) со стандартными лунками в агарозной среде, состоящей из 250 мг агарозы (ЧССР), 23,0 мл дистиллированной воды, 3,0 мл 10%-ного концентрата среды 199, 3,0 мл сыворотки человека и 0,6 мл 7,5%-ного раствора бикарбоната натрия (расчет на 10 чашек).

Лейковзвесь получают спонтанным осаждением эритроцитов в растворе желатины. Готовят рабочую концентрацию лейкоцитов 5 10 кл/мл в среде

199 ° Клетки вносят в лунки, после чего чашки инкубируют при 37 С в увлажненной атмосфере воздуха, содержащей 5% СО, в течение 6 и 24 ч.

После инкубации клетки фиксируют

45%-ным раствором формалина 15 мин, удаляют механическим путем агарозу, чашки отмывают под струей теплой воды и высушивают. Спонтанную миграцию оценивают при микроскопии (МБС-9,56-кратное увеличение), измеряя зону миграции с помощью окулярмикрометра.

54388 2 инфекционно-зависимая, средней степени тяжести, фаза ремиссии.

При обследовании; ИСМ гранулоциТоВ 2,9, мононуклеаров 1,5; лейкоцитов (б ч) 5,0, лейкоцитов (24 ч)

1,8.

Таким образом, как в способепрототипе, так и в предлагаемом способе выявлена существенная стимуля10 ция миграционной активности клеток крови.

Пример 2. Больная Ш, 25лет, диагноз бронхиальная астма атопическая, средней степени тяжести, 15 фаза ремиссии.

При обследовании: ИСМ гранулоцитов 0,21; мононуклеаров 0,3, лейкоцитов 0,25 (инкубация 5,5 ч); лейкоцитов 0,4 (инкубация 23,5 ч).

20 Таким образом, при обследовании обеими способами выявлено угнетение миграционной активности всех видов клеток.

Пример 3. Донор К, 25 лет, 25 практически здоровый человек.

При обследовании: HCM гранулоцитов 0,9; мононуклеаров 1,0, лейкоцитов 6,5 ч 1,05, лейкоцитов

24,5 ч 0,95.

Формула изобретения

Способ определения функциональной активности фагоцитирующих клеток путем инкубирования гранулоцитов и мононуклеаров крови под агарозой с последующей оценкой результатов их спонтанной миграции, о т л и ч а юшийся тем, что, с целью ускорения и упрощения способа, иэ крови

40 выделяют взвесь лейкоцитов, затем инкубируют ее в течение б+0,5 ч и определяют миграцию гранулоцитов, далее инкубируют пробу дополнительно

18+0,5 ч и определяют спонтанную миграцию мононуклеаров.