Способ приготовления гистологических препаратов для микроскопических исследований

 

Изобретение относится к гистологии . Цель изобретения - одновременное окрашивание всех структурных элементов среза, включая нервы. Исследуемьй материал помещают в формалин . Промывают биоптат в проточной воде , споласкивают в дистиллированной воде. Затем готовят срезы и помещают их в чашку сосвежей дистиллированной водой. Готовят раствор красителя Гимза-Романовского при следующем соотношении компонентов (мас.%): этиловый спирт 0,4-0,8, краситель Гимза-Ромйновского 4-11, вода остальное . Спирт и краситель Гимза-Романовского вводят в воду каплями. В этот раствор помещают срезы на 1-72 ч. После этого срезы промывают водопровод- Q S ной водой, споласкивают. Помещают (Л срез на предметное стекло, обсушивают и заключают в глицерин.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИН (51)4 С 01 N 1/30

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

Il0 ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНЯТИЙ

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТ

H А ВТОРСНОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 3764792/28-14 (22) 13.07.84 (46) 15. 10.86. Бюл. У 38 (71) Калининский ордена Трудового

Красного Знамени политехнический институт (72) Н.И. Вержбицкая (53) 615.475(088.8) (56) Левинсон Л.Б. и др. Микроскопическая техника. Советская наука, 1957, с. 349-350. (54) СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ГИСТОЛОГИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ ДЛЯ ИИКРОСКОПИ CKm ИССЛЕДОВАНИЙ (57) Изобретение относится к гистологии. Цель изобретения — одновременное окрашивание всех структурных

„80„„12 4040 А 1 элементов среза, включая нервы. Исследуемый материал помещают в формалин. Промывают биоптат в проточной воде, споласкивают в дистиллированной воде. Затем готовят срезы и помещают их в чашку со свежей дистиллированной водой. Готовят раствор красителя Гимэа-Романовского при следующем соотношении компонентов (мас.Ж): 96 -ный этиловый спирт 0,4-0,8, краситель

Гимза-Романовского 4-11, вода остальное. Спирт и краситель Гимэа-Романовского вводят в воду каплями. В этот раствор помещают срезы на 1-72 ч. После этого срезы промывают водопроводной водой, споласкивают. Помещают срез на предметное стекло, обсушивают и заключают в глицерин.

С::

1 264040

Затем срезы извлекают, промывают в водопроводной воде до исчезновения синего окрашивания воды, споласкивают в дистиллированной воде,. помещают на предметное стекло, расправляют, обсушивают бумажным фильтром и заключают в глицерин или другую среду традиционным способом. При исследовании окрашенного гистологического препарата отчетливо выявляются паперечно-полосатые мышечные волокна,. сосуды, клеточные и неклеточные элементы тканей и нервы.

Пример 1. Проводится гистологический анализ фрагмента органа., подлежащего оперативному вмешательст ву. Биоптат фиксируют в 10-12Х-ном нейтральном формалине 1 сут, промы50

Изобретение относится к биологии и медицине, а именно к гистологии, эмбриологии, патанатомии, и может быть использовано для выявления струк. турных компонентов органов, тканей. 5

Цель изобретения — одновременное окрашивание всех структурных элементов среза, включая нервы, Способ осуществляется следующим образом. 10

Берут исследуемый материал, помещают в 10-12Ж-ный нейтральный формалин на 1-3 сут и более, так как срок хранения в фиксаторе не ограничен.

Промывают биоптат в проточной воде комнатной температуры 1-6 ч, споласкивают в. дистиллированной воде. На замораживающем микротоме готовят срезы толщиной 10-50 мкм и помещают в чашку со свежей дистиллированной 20 водой.

Когда все срезы подготовлены и собраны в чашке с водой, их переносят в свежепригGToBJIBHHblH водно-спиртоо вой раствор красителя Гимза-Романов- 25 о ского при следующем соотношении компонентов, мас.Ж:

96 градусный этиловый спирт 0,4 — 0,8

Краситель ГимзаРомановского 4-11

Вода Остальное

Причем, и спирт, и краситель Гимза-Романовского вводят в воду капля( ми б

Помещенные срезы оставляют в красителе на 1-72 ч в зависимости от поставленной цели и характера объекта, например при окраске плотных срезов их помещают на 48-72 ч.

40 ! вают в водопроводной воде 4 ч, споласкивают в дистиллированной воде, готовят срезы толщиной 10-50 мкм на замораживающем микротоме, переносят срезы в чашку со свежей дистиллированной водой на время подготовки всех срезов, подлежащих окраске. Готовят водно-спиртовой раствор красителя Гимза-Романовского при следующем соотношении компонентов, мас.Ж:

96 градусный этиловый спирт 0,4

Краситель ГимзаРомановского 4

Вода Остальное

В приготовленный раствор помещают срезы на 48 ч. Затем срезы промывают водопроводной водой до исчезновения синего окрашивания воды, споласкивают дистиллированной водой, помещают срез на предметное стекло, обсушивают бумажным фильтром, заключают в глицерин, Заключение: данный фрагмент органа неудачно выбран для оперативного вмешательства в связи с тем, что здесь проходят крупные нервы, окрашенные в фиолетовый цвет, артерии, встречается множество сосудов микроциркуляторного русла, стенки которых черезвычайно тонки, эритроциты окрашены в желтоватый или розовый цвет; цвет межклеточного вещества изменяется от голубого до синего.

Необходимо изменить зону оперативного вмешательства.

Пример 2, Окраску подготов" ленных ранее (см. пример 1) срезов ведут в водно-спиртовом растворе красителя Гимза-Романовского при следующем соотношении компонентов, мас.й:

96-градусный этиловый спирт 0,4

Краситель ГимэаРомановского 7

Вода Остальное

В приготовленный раствор помещают срезы на,1-48 ч, а затем их промывают до исчезновения синего окрашивания промывочной воды и проводят все подготовительные операции для заключения окрашенных срезов в глицерин или другую среду.

Заключение: данный фрагмент органа неудачно выбран для оперативного вмешательства в связи с тем, что видны артерия и ветвящийся нерв.

Базальная мембрана артерии голубо1 264040

Остальное

В приготовленный водно-спиртовой раствор красителя помещают срезы на

1-48 ч, затем их промывают до исчезновения синего окрашивания промывочной воды. Далее ведут все подготовительные операции для заключения окрашенных срезов в глицерин или долгую среду.

При микроскопировании срезов отчетливо видны нервы, окрашенные в фиолетовый цвет, сосуды, клеточные

30 и неклеточные элементы тканей.

Использование предлагаемого спосо-. ба приготовления гистологических препаратов для микроскопических исследований позволяет обеспечить

100Х-ное выявление нервов по сравнению со всеми известными способами приготовления гистологических препаратов для микроскопических исследований с выявлением всех структурных элементов ткани. ватая, мышечные клетки ее стенки голубые с синим ядром. Тучные клетки, связанные с артерией и нервом, окрашены в фиолетовый цвет. Межклеточное. вещество серо-синее или розовое.

Гистологический анализ подтверждает: необходимо изменить зону оперативного вмешательства.

П р и.м е р 3. Окраску подготовленных ранее (см. пример 1) срезов ведут в водно-спиртовом растворе кра ситепя Гимза-Романовского, при следу ющем составе компонентов, мас.: !

96-градусный этиловый спирт 0,8

Краситель ГимэаРомановского

Вода

Пример 4. При вскрытии кошки через 40 мин после воздействия

:лазерным излучением или электрическим током берут образец (язык, кожа, подкожные мышцы и т.д.) фиксируют в 10-12Х-ном нейтральном формалине

3 сут, промывают образцы 3 ч в проточной воде, споласкивают в дистиллированной воде. Готовят на замораживающем микротоме срезы толщиной

15-50 мкм и переносят 50-70 срезов в чашку Петри с чистой дистиллированной водой, а затем — на 42 ч в сосуд со свежеприготовленнъпк водно.спиртовым раствором красителя ГимзаРомановского при следующем соотношении компонентов, мас.X:

96-градусный этиловый спирт 0,79

Краситель ГимзаРомановского 11

Вода Остальное

Далее окрашенные срезы промывают в водопроводной воде до исчезновения синего скрашивания промывочной воды и споласкивают в дистиллированной воде. Помещают окрашенный

4 срез на предметное стекло, расправляют, обсушив его бумажным фильтром, заключают в глицерин или другую среду.

При микроскопическом изучении срезов установлены реактивные изменения нервов, сосудов и соединительных элементов.

Заключение: используемые параметры воздействия вызывают адаптационно- трофические изменения в составе тканей и органа. При окраске в течение 24 ч видны нервы без признаков деструктивных изменений, окрашенные в темно-фиолетовый цвет; сосуд (артериола), клетки мьппечной оболочки голубоватые со светло-синим ядром; активные клетки с признаками дегрануляции. Их цитоплазма интенсивно окрашена в фиолетовый и темно-красный цвет.

Межклеточное вещество голубоватосерое. При окраске в течение 72 ч виден нерв; полнокровная венула и форменные элементы крови в ней; артериола с уплотненной базальной мембраной, тучные клетки с признаками дегрануляции; межклеточное зещество с извитыми коллагеновыми волокнами ..

Нерв окрашен в фиолетовый цвет.

Базальные мембраны сосудов темнофиолетовые или синие. Тучные клетки имеют разные оттенки и цвета в зависимости от их использования. Встречаются темно-фиолетовые, сиреневые, темно-красные. Эритроциты крови розовые или желтоватые, ядра лейкоцитов голубые, зернистость специфическая.

Гладкомышечные клетки артериолы голубые со светлым синим ядром. Ядра соединительных клеток голубые. Межклеточное вещество от бледно-голубого до интенсивного синего, встречаются участки межклеточного вещества, окрашенного в розовый цвет.

12б4040

Составитель А. Рыбина

Техред М.Ходанич КорректорМ. Максимишинец

Редактор Н. Киштулинец

Заказ 5552/42

Тираж 778 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Н-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Формула изобретения

Способ приготовления гистологических препаратов для микроскопических исследований путем фиксации ткани в формалине, изготовления замороженных срезов с последующим их окрашиванием и промывкой, отличающийся тем, что, с целью одновременного окрашивания всех структурных элементов 10 ткани, включая нервы, окраску проводят в течение 1-72 ч в растворе,содержащем этиловый спирт, краситель

Гимза-Романовского, воду при следующем соотношении компонентов, мас.7.:

96-градусный этиловый спирт 0,4-0,8

Краситель ГимзаРомановского 4 — 11

Вода Остальное