Способ получения 5- @ 3- @ 2-(2,2,2-трифторэтил)-гуанидино @ пиразол-1-ил @ -валерамида и его фармацевтически приемлемых кислотно-аддитивных солей

 

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИН

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н ПАТЕНТV

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3503157/23-04 (62) 3411500/23-04 (22) 26.10.82 (23) 05.03,82 (31) 8128179 (32) 17.09.81 (33) GB (46) 30.01.87. Бюл. К 4 (71) Империал Кемикал Индастриз

ПЛС(СВ) и Ай-Си-Ай Америказ Инк.(US) (72) Тобиас Орегон Еллин (US) и Дэвид Джон Гилман (GB) (53) 547.772.1.07(088.8) (56) Патент Великобритании

Р 2052478, кл. С 07 D 277/38, опублик. 1980.

„„SU„„1287747 А 3 (50 4 С 07 D 237/04, А 61 K 31/145 (54)(57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ 5-13-(2-(2,2,2-ТРИФТОРЭТИЛ)-ГУАНИДИНО) ПИРАЗОЛ-1-ИЛ}ВАЛЕРАЯ4ДА И ЕГО ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИХ ПРИЕИЛЕК 1Х КИСЛОТНО-ф1ЛИТИВHblX СОЛЕЙ, отличающийся тем, что 5-13-(3-(2,2,2-трифторэтил)тиоуреидо пиразол-1-ил)валерамид. подвергают взаимодействию с аммиаком в среде этанола в присутствии окиси ртути и, в случае необходимости, полученньй продукт переводят в кислотно-аддитивпую соль.

1 12877

Изобретение относится к производным гуанидина, являющихся антагонистами гистамина Н-2 и ингибиторами секреции желудочного сока, а именно к способу получения 5-1 3-(2- (2,2,2трифторэтил)гуанидино)пиразол-1-ил)валерамида и его фармацевтически приемлемых кислотно-аддитивных солей.

Цель изобретения — способ получения гуанидинового производного, являющегося более сильным антагонистом гистамина Н-2 по сравнению со структурным. аналогом — 3-(2-гуанидинотиазол-4-HaxevHz — zHo) пропионамидом.

Пример 1. К раствору 0,5 г

5-(3-(3- 2,2,2-трифторэтил1-тиоуреидо) пиразол-1-ил налерамида в б-мо- лярном растворе аммиака в этиловом спирте (6 мл) добавляют 0 56 г окиси 20 ртути в течение 5 мин, Смесь перемешивают 1 ч и фильтруют.Фильтрат выпаривают в вакууме до получения в остатке масла, которое растворяют в этилацетате, к раствору прибавляют петролейный эфир (с т. кип. 60-80 С), выделившийся осадок отфильтровывают, сушат. Получают 5-(3 †f2 †(2,2,2-трифтор этил) -гуанидино) пира з ол-1-ил) ва— лерамид н виде кристаллического твер- 30 дого вещества с т,пл. 128-132 С.

Выход 76Х.

ЯМР-спектр (ДМЬО), м.д.: 7,4 (д.1Н), 5,65 (g. 1Н), 4,0 (м, 1н), 2,1 (ш, 2н), 2 6 (м, 4н). 35

47 2 лаждения льдом ° По прошествии 4 ч водород больше не абсорбируется.

Смесь фильтруют и фильтрат выпаривают в вакууме. Получают 5-(3-аминопиразол-1-ил)-валерамид в виде масла, которое кристаллизуется. Этот продукт (2,5 г) перемешивают н 25 мл ацетонитрила и добавляют к нему

2,17 г 2,2,2- трифторэтилизотиоцианат.

Через 18 ч смесь фильтруют и осадок на фильтре промывают ацетонитрилом, затем диэтилоным эфиром. Получают

5-13-(3-(2,2,2-трифторэтил)тиоуреидо)пиразол-1-ил налерамид с т.пл.

172-174 С. 5- 3- (2-(2,2,2-трифторэтил)гуанидино)пиразол — 1-ил валерамид является антагонистом рецептора

Н-2 гистамина (или просто l-iicTBMHHB

Н-2), ингибирует секрецию кислоты желудочного сока у теплокровных животных и в связи с этим находит ценное применение для лечения пептических язв (язны желудка и дненадцатиперстой кишки) и других заболеваний, вызванных или обостряемых кислотностью желудочного сока, в том числе стрессовых язв и желудочно-кишечных кровотечений, вызванных травмами.

Активность антагониста гистамина

Н-2 может быть продемонстрирована посредством стандартных испытаний, например, по способности соединения ингибировать вызванную гистамином положительную хронотропную ответную реакцию при спонтанном биении правого

45.

Исходный материал может быть получен следующим образом.

Раствор 0,2 г 5-(3-нитропиразол-1-èë)âàëåðoíèòðHëà в 1 мл концентрированной серной кислоте выдерживают при 20 С в течение 19 ч, Смесь разбавляют 4 мл воды, подщелачинают

10,8 нормальной гидроокисью натрия до рН = 10 и экстрагируют этилацетатом (Зх5 мл). Экстракты высушивают (над MgSO ) и выпаривают н вакууме до получения в остатке твердого белого вещества, которое перекристаллизовывают из этанола, в результате чего получается 5-(3-нитропиразол-1-ил)валерамид с т.пл.

129-1 31 С.

Смесь 3,6 г 5-(3-нитропиразол-1— ил)налерамида и 3%-ного (вес/вес) палладия на угле (0,54 r) перемешивают ai 20 мл изопропанола в атмосфере водорода. Температуру поддерживают ниже 40 С за счет внешнего ох- предсердия морских свинок или по способности этого соединения ингибировать вызванное гистамином поглощение аминопирина в кислотное пространство париетальных клеток (т.е. обкладочных клеток желез желудка). .Испытания на морских свинках осуществляются следующим образом, Правое предсердие морской свинки подвешивают с натяжением 1 г (изометрическое натяжение) в тканевой ванне с термостатическим регулированием (ЗООС), емкостью 25 мм, содержащей насыщенный кислородом (95i. О, 5/

СО ) буфер Krebs Hehseleit (рН=7,4).

Ткань стабилизируется в течение одного часа и н течение этого времени она промывается 2-4 раза, Отдельные сокращения регистрируются посредством датчика силового смещения, с использованием измерителя деформации и мгновенные частоты сокращения регистрируются посредством кардиотахометра. Получают значение контрольной

1287747 ответной реакции на 1 мкмоль гистамина, после чего ткань промывают три раза и снова приводят в равновесное состояние до основного показателя частоты. После установления равнове- 5 сия, длящегося 15 мин,вводят испы— тываемое соединение до желаемой Конечной концентрации. Через 10 мин после введения соединения снова вводят гистамин (1 мкМоль) и ответную реакцию на гистамин в присутствии антагониста сравнивают с контрольной ответной реакцией на гистамин. Результат выражают в процентах от контрольной реакции на Гистамин.

После этого стандартными методами определяют кажущуюся константу диссоциации антагониста гистамина Н-2, Испытание с аминопирином осуще- 20 ствляют следующим образом. Удаляют слизистую оболочку желудка из мышцы дна желудка и пролгывают ее в Буфере

1 (содержащем на 1 л раствора 8,007 г

ИаС1; 0,201 г КС1, 0,113 г Иа НРО, 0,204 r КН РО, 0,132 г СаС1 2Н О, 0,101 г МНС1 и 1 г глюкозы, с регулированием величины рН до-7,4 посредством МаОН). Ткань тонко измельчают, суспензируют в Буфере 1 и промывают 30 три раза Буфером 1. Затем ткань суспензируют в диспергирующей среде

Коллагеназа (Sigma Chemicalio Тип У, 100 мг) и альбумин коровьей сыворотки (Miles laboratories Ltd фракция — У, 100 мг) в Буфере 1 (100 мл), 50 мл на 10 г чистого веса ткани — и термостатируют при 30 С и величине рН рН 7,4 (поддерживаемой путем непрерывного регулирования) при перемеши- 40 вании в атмосфере кислорода. По прошествии 30 мин ткани дают возможность осесть и поверхностный жидкостный слой удаляют. Вводят свежую порцию диспергирующей среды и продолжают 45 термостатирование с использованием ткани, которая в большей своей части диспергируется в железы и целые клетки по прошествии 40-60 мин. Любые оставшиеся большие кусочки ткани 50 удаляют путем фильтрации через нейлоновую сетку. Смесь желез и клеток извлекают путем центрифугирования при 200 r и суспензируют в Буфере I, содержащем 1Х альбумина коровьей сыворотки (Miles Laboratories Ltd;

Фракция У). Железы и клетки промывают три раза Буфером 1 и суспензируют в Буфере 2(содержащем Eagles

МЕМ (500 мл) Лпротин (818та Chemical

Со, 10 мг) и l1epes е. 2-(4-(2-оксиэтил)пиперазин-1-ил)этансульфокислоты, 1500 ммолн; 20 мл), при поддержании величины рН 7,4, посредством

Na0H, 150 мл на 10 г чистого веса ткани). Эту тканевую суспензию перемешивают в атмосфере кислорода при температуре 32"C в течение по меньшей мере одного часа, после чего ее можно использовать. Тканевую суспензию термостатируют вместе с испытываемым соединением и аминопирином (10 мкмоль) меченым С в диметиламиновой группе (О,1 мк дюйм /мл), в течение 20 мин. Затем поглощение аминопирина стимулируют путем добавления гпстамина и ингибитора фосфодиэстеразы ТСТ 63197 (Biochem Soc.

Special Publication 1, 1973, с. 127— 5

132) до конечных концентраций 10 моля

-7 и 5 х 10 моля соответственно. По э прошествии 18 мин клетки (железы) извлекают из термостатированной среды путем фильтрации суспензии через стеклянный микрофибрильный фильтр, Клетки (железы) быстро (в течение менее чем 10 с) промывают три раза охлажденным льдом Буфером 1. Лминопирин, мечеHbM C, ep Bae tD TKa нью, измеряют с помощью сцинтилляционного счетчика и степень ингибирования поглощения испытываемым соединением рассчитывают путем сопоставления с контрольным образцом. Затем с помощью графиков, полученных в ряде испытаний, проводимых при различных кон. центрациях, рассчитывают концентрацию испытываемого соединения, дающую ингибирование на 501.

5-13 (2-(2,2,2-трифторэтил) -гуанидино)ппразол-1 — ил валерамид испытывался в экспериментах с аминопирином.

Оно активно в концентрации

0,0036 мкмоль. Структурный аналог—

3-(2-гуанидинотиазол-4-илметилтио пропионамид в данном тесте активен в концентрации 0,29 мкмоль, т.е. менее активен, чем 5-(3-(2-(2,2,2триФторэтил) гтаннднно) пираэ оп-1-ил)— валерамид приблизительно в 100 раз.

Ингибирование секреции кислоты желудочного сока может быть продемонстрировано стандартными испытаниями, например, по способности соединения. при вводе его путем внутривенной инъекции через желудок или через рот ингибировать секрецию кислотного

1287747 желудочного r.oêà, например, у крыс или у собак, у которых имеется желудочный свищ или денервированные углубления дна желудка и у которых секреция желудочного сока стимулирует- 5 ся путем ввода секретогенного агента„ например, гистамина, пентагастрина, бетанехола или пищи.

Испытание на крысах проводится следующим образом, 10

Самок крыс (весом 200-230 г) анестезируют путем внутримышечного ввода уретана (1,5 г/кг) и в трахею вводят полую хирургическую иглу. Гибкую трубку пропускают через пищевод в желудок и укрепляют ее путем стягивания в области шеи. Многодырчатую пластмассовую трубку (диаметрам

3 мм) пропускают в полостную зону желудка через надрез в двенадцатиперсной кишке и закрепляют, привязывая ее посредством хирургической нити к привратнику желудка. Солевой раствор (9 г/л NRC1) пропускают через

25 желудЬк, посредством вставленной в пищевод полой иглы, со скоростью

7 мл/мин и извлекают его из пилорического отвода через каждые 10 мин и собирают в химических стаканах.

Секреция кислоты стимулируется путем подкожного ввода специфического агониста Н-2 димаприта, вводимого дозой 10 мг/кг, с последующим вливанием 30 мг/кг/ч. Вьделение кислоты рассчитывается путем титрования

20 ммоль гидрата окиси натрия 10минутных образцов до конечного значения рН 6,4 (вьделяемых в течение

10 мин).

40 . Когда секреция достигает постоянного значения (плато на кривой, три последовательных показания с расхождением в пределах 5Е), испытываемое соединение вводится путем внутривенной инъекции через полую иглу, введенную в левую наружную яремную вену.

Затем измеряют секрецию в течение последующих двух часов. Приготавливают основной раствор каждого испытываемого соединения (10 мг/мл в диметилсульфоксиде) и разбавляют соответствующим образом солевым раствором так, чтобы обеспечивалась возможность ввода в организм дозы 1мг/кг (диметилсульфоксид <2Х).

Испытание на собаках с хроническим свищем осуществляют следующим образом.

Испытания проводят на самках собак коротконогой гончей породы весом

9-12 кг, имеющих хронический желудочный свищ. В течение ночи их не кормят, но дают воду сколько требуется.

В ходе эксперимента собаки находятся в стоячем положении.

При вводе испытываемого соедине— ния путем внутривенной инъекции свищ открывается и после полного убеждения в том, что базальная секреция не происходит в течение 30 мин, начинают осуществлять непрерывное внутривенное вливание секретогенного агента (гистамина, 0,5 мкмоль/кг/ч или пентагастрина, 2 мкг/кг/ч) в солевом растворе (15 мл/ч). Пробы желудочной кислоты собирают каждые 15 мин. Измеряют объем каждой пробы, 1-миллиметровую аликвотную пробу титруют до нейтральной 100 млмоль NaQH с целью определения концентрации кислоты.

Когда достигается постоянная секреция (плато кривой, 1-2 ч), путем внутривенной инъекции испытываемое соединение в солевом растворе и пробы кислоты желудочного сока собирают . в течение дальнейших 2-3 ч, в ходе чего непрерывно продолжается вливание секретогенного агента, При исследовании испытываемого соединения путем внутрижелудочного ввода после полной убежденности в отсутствии базальной секреции в течение 30 мин испытываемое соединение, содержащееся в 25 мл 0,5Х-ной (вес/об) оксипропилметилцеллюлозы и 0,1%-ного (вес/об) Твина 80 в воде (Твин— торговая марка), вливается по каплям в желудок через дозирующую пробку, вставленную в свищ. Спустя один час свищ снова открывается, и тотчас начинают вливание секретогенного агента, как описано выше. Пробы кислоты желудочного сока измеряют, как описано выше, и приближение секреции кислоты к постоянному значению сравнивают с приближением секреции кислоты к постоянному значению для контрольного животного, в организм которого вводят путем внутрижелудочного вливания лишь один носитель.

При изучении испытываемого соединения, вводимого через рот, это соединение используется в форме желатиновых капсул вместе с 15 мл воды. Через час после ввода свищ открывается и тотчас начинают внутривенное вли1287747 вание секретогенного агента. Пробы желудочной кислоты измеряют так же, как указано выше, и приближение секреции кислоты к постоянному значению (к плато кривой) сравнивают с 5 приближением секреции для контрольного животного, в которое не вводилось испытываемое соединение.

Испытание на собаках с денервированным углублением дна желудка осу1 ществляют следующим образом. Испытания проводят на самцах собак коротконогой гончей породы весом 14-22 кг.

Денервированные углубления в области .железы дна желудка у этих собак получают обычным способом. В течение

6 недель животные поправляются от операции, и в дальнейший период в течение 2-3 мес до обычного использования проводится подготовка таблиц и нормализация секреторных реакций.

Собак не кормят в течение 23 ч перед экспериментом (по желанию, дают воду), и в процессе эксперимента повязку, 25 которой они перевязаны, расслабляют.

После промывки углубления теплой водой нутем подкожной инъекции вливают гистамин со скоростью 10 мкг/мин.

Такая доза агониста приводит к менее, чем максимальному (60-90Х от максимального) увеличению выделения кислоты при всех используемых дозах. Выделения желудочного сока из углубления собирают через каждые 15 мин в градуированные стеклянные пробирки 35 и измеряют объем секреторных выделений, приближающийся к 0,1 мл. Пробу в количестве 500 мкл разбавляют 5 мл солевого раствора и величину рН доводят до 7,0 посредством 100 ммоль 40

Na0H. Общее выделение кислоты рассчитывают как произведение концентрации кислоты на объем выделенного желудочного сока, Испытываемые соединения вводятся внутривенно (0,1мл/кг)t5 через лучевую подкожную вену или через рот в виде желатиновой капсулы после достижения постоянной секреции (расхождение в трех последовательных показаниях в пределах 10X). Секрецию измеряют 8 течение трех часов после ввода испытываемого соединения.

5-13-t 2-(2,2,2-трифторэтил)гуанидино1пиразол-1-ил валерамид вводят путем внутривенной инъекции в группы, включающие две анестезированные крысы и четыре не потерявшие сознание мыши, дозами, которые соответственно в 10 раз и в 100 раз превышают дозу (в мг/кг), приводящую к примерно

50Х-ному ингибированию секреции желудочного сока в анестезированной крысе. Никаких токсических симптом у животных с указанными введенными в них дозами не обнаружено.

5 — 13 — (2-(2,2,2-трифторэтил)-гуанидино)пиразол-1-ил валерамид может использоваться в форме фармацевтической композиции, которая включает гуанидиновое производное в сочетании с нетоксичным фармацевтически пригодным разбавителем или носителем.

Эта фармацеьтическая композиция может находиться, например, в форме пригодной для ввода через рот, через прямую кишку, парэнтерально или пригодной для местного применения: для этого она может быть приготовлена уже известными способами в форме, например, таблеток, капсул, водных или масляных растворов или суспензий, эмульсий, диспергируемых порошков, свечей, стерильно вводимых путем инъекции водных или масляных растворов или суспензий, галей, кремов, мазей или лосьенов.

Наряду с гуанидиновым производным фармацевтическая композиция, соот-. ветствующая изобретению, предназначенная для ввода через рот, прямую кишку или парэнтерально, может содержать совместно вводимое (или вводимые) одно или несколько лекарств, выбранных из числа нейтрализующих кислоту препаратов, таких как смеси гидрат окиси алюминия — гидрат окиси магния, антипепсиновых соединениипепстатин, других антагонистов гис-тамина H-2, — циметидин или ранитидин, лекарств для вылечивания язв, карбоноксолон или соли висмута, противовоспалительных агентов — ибупрофен, индометацин, напроксен или аспирин, простагландинов — 16,16 †диметилпростагландин Е, классических антигистаминов (антагонистов гистамина Н-2) — мепирамин или дифенгидрамин, антихолергических агентов атропин или пропантелинбромид, успокаивающих средств — диазепам,.хлордиазопоксид или фенобарбитал.

Фармацевтическая композиция, предназначенная для локального применения, может содержать также наряду с гуанидиновым производным 5-(3 (2-(2,2,2трифторэтил)-туанипино)пираэол-1-нл>10

1287747 валерамидом одно или несколько классических антигистаминов (антагонистов гистамина Н-1), например мепирамин или дифенгидрамин, и/или одно или несколько стероидных противовоспалительных агентов, например флуоцинолон или триамцинолон.

Составитель И.Корсакова

Редактор В.Ковтун Техред И.Попович Корректор Н.Король

Заказ 7732/61 Тираж 371 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, r. Ужгород, ул. Проектная, 4

Композиция, предназначенная для локального применения, может включать 0

10 от 1 до 10Х (вес/вес) гуанидинового производного. Предпочтительная фармацевтическая композиция пригодна для ввода в организм через рот в виде единой дозы в форме, например, 15 таблетки или капсулы, содержащей от

5 до 500 мг гуанидинового производного, или пригодна для внутривенной, подкожной или внутримышечной инъекции в форме,, например, стерильной 20 жидкости, содержащей от 0,1Ж до 10Х (вес/вес) гуанидинового производного, Фармацевтическая композиция обыч-но вводится в организм человека для лечения пептических язв и других заболеваний, вызванных раздражением за счет кислотности желудка, причем введение в организм данной композиции осуществляется таким же образом, как и введение циметидина, причем при определении дозы вводимого препарата учитывается сила действия и продолжительность действия гуанидинового производного, соответствующего данному изобретению, в сравнении с циметидином. Так, каждый пациент при приеме дозы препарата через рот должен получать (в дозированной форме) от 5 до 500 мг и предпочтительно от

10 до 100 мг гуанидинового производного, при приеме дозы препарата пу— тем внутривенной, подкожной или внутримышечной инъекции он должен получать (в дозированной форме) 0,5 мг50 мг, предпочтительно 2-20 мг, гуанидинового производного, причем данная композиция вводится в организм

1-4 раза и предпочтительно один раз в день. Доза препарата, вводимая через прямую кишку, приблизительно такая же, как и доза, вводимая через рот. Данная композиция может вводиться в организм менее часто, когда она содержит количество гуанидинового производного кратное тому, которое эффективно при вводе 1-4 раза в день.