Способ подготовки ткани к электронно-микроскопическому исследованию

 

Для повышения качества подготовки ткани животному чепез канюлю, вставленную в грудную аорту, промывают сосудистое русло гепаринизированным раствором до появления чистого раствора в канюле, дренирующей нижнюю полую вену, температура раствора 36- . Вводят в течение 15-20 мин 4%-ный раствор глютарового альдегида на 0,5 М фосфатном буфере. Через 15 мин вводят взвесь туши в 4%-ном растворе глютарового альдегида на 0,5 М фосфатном буфере до появления окрашенного раствора в дренирующей канюле. Орган извлекают, прецизионно забирают из интересующего участка материал для электронно-микроскопического исследования. с S (Л с: ю QD 00 СД ОО О

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН д ц с G 01 N 1/06, 33/483

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н А ВТОРСКОЬГФ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

IlO ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3846055/28-14 (22) 16. 01. 85 (46) 23.03.87. Бюл. № 11 (75) В.И. Зеляк, Б.В. Шутка, Н.П. Збирак и К.А. Диамантопуло (53) 611-118 (088.8) (56) Mitchel J., Evaus Н. An indian

ink/gelatin peifusion technigue for

the demonstration of intracerebral

blood capillaries Ъу light and electron microscopy.: Med. Lab. Sci., 1978, v. 35, № 4, р. 393-395.

„„SU,» 1298580 А 1 (54) СПОСОБ ПОДГОТОВКИ ТКАНИ К ЭЛЕКТРОННО-МИКРОСКОПИЧЕСКОМУ ИССЛЕДОВАНИЮ (57) Для повышения качества подготовки ткани животному чепез канюлю, вставленную в грудную аорту, промывают сосудистое русло гепаринизированным раствором до появления чистого раствора в канюле, дренирующей нижнюю полую вену, температура раствора 3637 С. Вводят в течение 15-20 мий

4Х-ный раствор глютарового альдегида .на 0,5 M фосфатном буфере. Через

15 мин вводят взвесь туши в 47-ном растворе глютарового альдегида на

0,5 М фосфатном буфере до появления окрашенного раствора в дренирующей

t канюле. Орган извлекают, прецизионно забирают из интересующего участка ма- „, териал для электронно-микроскопического исследования.

Формула изобретения

Составитель А. Агуреев

Редактор И. Горная Техред Н.Глущенко Корректор О. Луговая

Заказ 879/43

Тираж 777 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий, 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, r. Ужгород, ул. Проектная,4

1 129

Изобретение относится к экспериментальной медицине и может быть использовано при изучении структур паренхиматозных органов °

Цель изобретения — повышение качества исследуемого объекта, достигается за счет сохранения естественного соотношения тканевых структур при фиксации в два этапа, при этом второй этап совмещен с контрастированием.

Пример 1. Животному, находящемуся под наркозом, через канюлю, вставленную в грудную аорту,промывают сосудистое русло гепаринизированным раствором до появления чистого раствора в канюле, дренирующей нижнюю полую вену (или в отвопящем сосуде от органа, если объектом исследования является один орган).Промывающий раствор содержит, вес. :

NaC1 7,4 — 7,8

КС1 0,3 — 0,4

0,5 М трис-НС1 40,0 — 42,0

Новокаин 1,0-1,5

Дистиллированная вода Остальное

К приготовленному раствору добавляют 1000-1100 NE гепарина. Температура раствора 36-37 С.

После промывки сосудистого русла проводят предварительную фиксацию (первый этап) тканевых элементов микроциркуляторного русла и прилегающей ткани путем введения тем же способом в течение 15 мин 4 -ного раствора глютарового альдегида на 0,5 M фосфатном буфере из расчета 50 мл на

1 кг массы животного. Фиксирующий раствор содержит, мл:

25%-ный глютаровый альдегид 1бО

Фосфатный буфер. 840

Через 15 мин предварительной фиксации проводят дофиксацию (второй этап) тканевых элементов микроциркуляторного русла и прилегающих тканей с одновременной инъекцией сосудистоо русла. С этой целью через встав8580 2 ленную канюлю вводят взвесь китайской туши в 4 .-ном растворе глютарового альдегида. При этом инъецируемая смесь содержит, мл;

25 -ный глютаровый альдегид 150

Фосфатный буфер 0,5 М 800

Тушь 50

Введение осуществляют до появления

f0 окрашенного раствора в дренирующей канюле. После этого извлекают орган, выделяют соответствующие участки и готовят криостатические срезы толщиной 150-200 мкм, при малом увеличе-!

5 нии светового микроскопа фотографируют интересующий участок и прецизионно из него забирают материал для последующего электронно-микроскопического исследования.

Пример 2. Способ осуществляют как описано в примере 1, при этом предварительную фиксацию проводят в течение 20 мин.

Способ позволяет благодаря предварительной фиксации in vivo сосудистого русла и прилегающей ткани лучше сохранить в препарате естественные соотношения в тканевых структурах.

Способ подготовки ткани к элек35 тронно-микроскопическому исследованию, включающий внутрисосудистую фиксацию ткани путем перфузии буферным раетвором глутарового альдегида с последующим контрастированием взве40 сью китайской туши, о т л и ч а юшийся тем, что, с целью повышения качества подготовки за счет сохранения естественного соотношения тканевых структур, ткань предвари45 тельно перфузируют в течение 1520 мин фиксирующим раствором, а Монтрастирование взвесью китайской туши проводят в фиксирующем растворе до насыщения ткани красителем.