Способ количественного определения гиббереллинов
Класс $2C, Д„
42 3oе,Що ) о1 1о„ 1, ll г
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ!
1одпасна» группа .Ч 178
Г. С. Муромцев и М Н, Нестюк
СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ
ГИББЕРЕЛЛИНОВ
Заявлено !4 ноября !959 г. за № 643903, 93 в Комитет во пелам изобретении открытий при Совете Министров СССР
Опубликовано в «Бюллетене изобретений» № !6 за !960 г
Гиббереллины — мощные cTHivlóëÿòoðû роста и развития растений — находят все более широкое применение в практикс сельского хозяйства. Применение гиббереллинов обеспечивает высокие прибавки урожая на винограде, томатах, цитрусовых и других высокоцснных культурах. Известны биологические, хроматографичсские и флуорометрическис методы количественного определения гибберсллинов
Найден новый способ количественного определения гиббереллинов, заключающийся в том, что, с целью повышения точности анализа, о содержании гиббереллинов в исходном веществе судят по интенсивности окраски их с фосфорно-вольфрамо-молибденовым комплексом, которая фиксируется колориметрическим методом.
Сущность описанного метода состоит в том, что в сильно солянокислой среде разведенные растворы гибберелловой кислоты дают характерное зеленое окрашиванне с фосфорно-вольфрамо-молибдсновым комплексом (фенольный реактив Фолина — Чнокальто); последний был ранее предложен для определения аминокислот тирозина и триптофана.
Интенсивность окрашивания прямо пропорциональна концентрации гибберелловой кислоты., что указывает на возможность ее количественного определения.
Испытапныс в отдельности фосфорно-вольфрамовый, фосфорно-молибдс!ювый и вольфрамово-молибдсновый компоненты реактива педали окрашивания с гибберелловой кислотой. Без добавления концентрированной соляной кислоты или при добавлении соляной кислоты, разведенной вдвое, зеленая окраска не развивается; не идет реакция и в щелочIIo"f среде, как это имеет место при определении фснольных соединений н вышеупомянутых аминокислот с реактивом Фолина.
Приготовление реактива. Смесь, состоящую из 100 г вольфрамовокислого натрия, 25 г молибденовокислого натрия, 700 ил дистиллированной воды, 50 лл 85%-ной ортофосфорной кислоты и 100 мл концент¹ 131133 рированной соляной кислоты, кипятят с обратным холодильником в течение 10 час, дают ей остыть и доводят водой до 1 л. Реактив вначале желтый, по мере кипячения становится оливково-зеленоватым (окраска реактива B значительной степени зависит от чистоты исходных реактивов, особенно фосфорной кислоты). Для определения гибберелловой кислоты можно использовать и зеленоватый реактив, в этом случае контрольное определение с водой будет иметь светло-желтовато-зеленую окраску; реактив желтого цвета дает с водой зеленовато-желтую окраску.
Ход определения. К 1,0 мл исследуемого раствора прибавляют
0,5 мл реактива Фолина, затем после тщательного перемешивания прибавляют 2,5 мл концентрированной соляной кислоты и смесь вновь перемешивают; время начала реакции отмечается с момента приливания реактива Фолина. Постепенно развивается зеленая окраска, которая измеряется точно через 15 мин на электрофотоколориметре с красным светофильтром в кюветах шириной 10 мм, В контрольное определение вместо исследуемого раствора приливают равный объем воды; контроль берется в двойном количестве по сравнению с опытом (2,0 мл воды+
+ 1,0 мл реактива Фолина --5 мл концентрированной соляной кислоты).
Описанный метод дает возможность определить от 10 до 200 1 гиб» берелловой кислоты в 1 мл исследуемого раствора (в кюветах шириной
10 мм). Лучше работать с концентрациями 10 — 80;/мл, так как в этих пределах получаемая экстинция укладывается в размеры шкалы правого барабаня электрофотоколориметра. Концентрации выше 80 /мд дают интенсивную изумрудно-зеленую окраску, которая промеряется лишь на левом барабане прибора. Концентрации ниже 10; /мл уже нс вполне соответствуют закону Ламберта-Бера.
Предмет изооретения
Техред А. Л. Сосина
Корректор Г. Голубятникова
Редактор H. И. Мосин
Зак. 6480 Цена 25 коп. Ти|раж 800
Поди. к печ. 20Л |-60 г. Формат бум. 70Х108 /ы Объем 0,17 п. л.
Информационно-издательский отдел Комитета по делам изобретений и открытий прп Совете Министров СССР, Москва, Центр, М. Черкасский пер., д 2/6
Тнп:: рафик Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР
Москва, Петровка, 14.
Способ количественного определения гиббереллинов, отл и ч а;ощи и с я тем, что, с целью повышения точности анализа, о содержании гиббереллинов в исходном веществе судят по интенсивности окраски их, с фосфорно-вольфрамо-молибденовым комплексом, которая фиксируется колориметрическим методом.
