Способ получения вакцины против клещевого энцефалита

 

Изобретение относится к микробиологической промьйпленности, в частности к производству вакцинных препаратов . Цель изобретения - повьшение иммуногенности и выхода целевого продукта за счет использования для выращивания вируса иной культуры клеток . Сущность способа сводится к тому , что вирус .клещевого энцефалита выращивают в культуре клеток почечной ткани зеленых мартышек, сбор вируса осуществляют многократно с интервалом в 2-3 дня, затем вируссодержащую жидкость инактивируют, фильтруют и сорбируют на носителе. При необходимости вакцину высушивают. 1 табл. оо 4 СО СП

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК (59 4 А 61 K 39/12

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Cr4

4 сО

Qi 3

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3860499/28-13 (22) 20.02.85 (46) 07.11.87. Бюл. У 41 (71) Институт полиомиелита и вирусных энцефалитов АМН СССР (72) M.П. Чумаков, С.Г. Рубин, Л.И. Авдеева, И.В. Семашко, Я.А. Сальников, Л.И. Мартьянова и А.В. Гагарина (53) 615.372 (088.8) (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ . КЛЕЩЕВОГО ЭНЦЕФАЛИТА (57) Изобретение относится к микробиологической промышленности, в част„„SU„„1349757 А1 ности к производству вакцинных препаратов. Цель изобретения — повышение иммуногенности и выхода целевого продукта за счет использования для выращивания вируса иной культуры клеток. Сущность способа сводится к тому, что вирус .клещевого энцефалита выращивают в культуре клеток почечной ткани зеленых мартышек, сбор вируса осуществляют многократно с интервалом в 2-3 дня, затем вируссодержащую жидкость инактивируют, фильтруют и сорбируют на носи еле. При необходимости вакцину высушивают. табл.

1 134975

Изобретение относится к микробиологической промышленности, в частности к производству вакцинных препаратов.

Целью изобретения является повьппение иммуногенности и выхода целевого продукта за счет использования для выращивания вируса иной культуры клеток. 10

Пример 1. Рекомендованный для производства инактивированной вакцины штамм вируса клещевого энцефалита (КЭ), штамм Софьин, используют для заражения однослойных, стационар- 15 ных первичных культур клеток трипсиниэированной ткани почек зеленых мартьппек (культуры КПЗМ) со средой 199 без сыворотки. Культуральную жидкость (КЖ) из зараженных сосудов с клетками КПЗМ многократно — на 3,5, 7,9 и 11 дни после заражения сливают и заменяют свежей порцией среды поддержки (без сыворотки), каждый сбор КЖ, содержащей вирус КЭ, после отбора ко- 25 нтрольных проб в тот же день подвергают центрифугированию (30 мин при

3000, 4 С), затем частичной очистке с помощью микрофильтрации через фильт- рующие пластины с диаметром пор з0 .450 нм (в тангенциальном потдке) и инактивируют формалином 1: 2000 при

32ОС в течение 72 ч. Отдельные партии вакцины далее сохраняют при 4 С до окончания биоконтроля и объедине35 ния в серию вакцины.

После получения удовлетворительных данных биоконтроля — на титры вируса

КЭ в исходных сливах IGK на микробную стерильность и отсутствие посто- 4С ронних патогенов (в сливах КЖ, до начала контакта с формалином), а также по окончании опытов на полноту инактивации вируса КЭ в вакцине проводят объединение соответствующих партий вакцины в серию и заключительное стерилизующее фильтрование вакцины через каскад мембранных фильтров с диаметром пор от 1200-800-450 до

300 нм.

Готовая серия инактивированной культуральной вакцины КЭ из вируса, выращенного в культурах КПЗМ, перед выпуском для применения может быть под- 5с вергнута, при желании, сорбированию на гидроокиси алюминия (0,2 A1(OH) )

3 или высушена с подходящим наполнителем.

7 2

Пример 2. Вакцина из КПЗМ серии У 1/6329/1/4000/37 С.

Первый сбор вируса из зараженной культуры почечной ткани зеленой мартышки Р 6329 с титром 10 в 1 мл

8,1 обрабатывают формалином 1:4000 при

37 С в течение 3 сут с последующим хранением при 4 С 10 сут.

Содержание белка по Несслеру в серии Ф 1 131 мкг/мл. Для определения МИД берут четыре трехкратных разведейия вакцины (1:3, 1:10, 1:30 и 1:90). К этим разведениям добавляют квасцы до 0,2Х А1(ОН) в качестве

3 адъюванта. Вакцину вводят четырем группам по 10 мышей на разведение подкожно по 0,5 мл трехкратно. Затем через неделю после третьей инъекции вводят живой вирус КЭ (штамм Абсеттаров) 200 летальных доз, учет результатов опыта через 14 дней после заражения вирусом КЭ. 50 -ная защита вакцинированных мышей соответствует разведению исходной вакцины и 1

1:41,7. Из этих данных следует, что

1 МИД для серии Ф 1 равна 0,024 мп (3, 14 мкг белка). Для одной прививочной дозы вакцины в объеме 0 5 мл обычно рекомендуется 30 МИД антигена, что составляет в данном случае

0,48 мл исходной цельной вакцины. Содержание белка в прививочной дозе вакцины У 1 63 мкг. Следовательно, на 1 мг белка в вакцине Ф 1 приходится антигена 318 МИД . В 1 л вакцины серии Р 1 в КПЗМ содержится 2083 прививочные дозы.

Пример 3. Вакцина из КПЗМ серии Р 2/6329/1/2000/32 С.

Часть первого сбора вируса из зараженной культуры почечной ткани зеленой мартышки У 6329 с титром вируса 10 в 1 мл обрабатывают форма-.

8,4 лином 1:2000 при 32 С в течение 3 сут с последующим хранением при 4 С

10 сут.

Содержание белка по Несслеру в серии Р 2 131 мкг/мп. Определение МИД на мышах проводят аналогично примеру Р 2. 50Х-ная защита мышей, вакцинированных серией Ф 2, соответствует разведению исходной вакцины 1:64,6.

Следовательно одна МИД50 вакцины серии Р 2 равна 0,155 мл. Для одной прививочной дозы вакцины в объеме

0,5 мл обычно берут 20 КЩ, что составляет в данном случае 0,31 мл неразведенной вакцины серии N- 2. В та1349757 4

Этому количеству вакцины соответствует 36,9 мкг белка. На 1 мг белка в серии Р 3 вакцины приходится. 542 МИД р

В 1 л вакцины серии Р 3 содержится

4065 прививочных доз °

Сравнительные данные по чистоте, иммуногенности и продуктивности при-. ведены в таблице.

Белок в

0,5 мл вак цины мкг

Количество Цена одной прививочных прививочной доз в 1 л дозы вакцины

Вакцина

Антиген (МИД„

0;5 мл) Известная неконцентрированная, неочищенная, из вируса на клетках куриного эмбриона (1960-1986 r.) Индекс реа) зистентнос212-500 ти 5,0-7,0 1000

10 коп. очишенная, концентрированная (хроматография), из вируса на клетках куриного эмбриона (1983-1986 г) 40 (после 25кратной концентрации) 28-38 (сред.32) 10-25

2 руб. 92 коп.

Предлагаемая (неконцентрированная, неочищенная, из вируса на КПЗМ) 21-62 д)

2000-6000 10 коп. (41,5) (среди.3500) (возможно) 30-60 а) В прививочной дозе этой неконцентрированной, неочищенной вакцины из виру-. са на клетках куриного эмбриона в 1 мл содержится 420-1000 мкг белка. б) В 1 мп очищенной концентрированной вакцины содержится 22-51 мкг белка. в) Возможные колебания зависят от метода определения белка по Несслеру или по Лоури в различных сериях препарата. г) Иммуногенность определялась только по методу вычисления индекса резистивности. Вакцина имела удовлетворительную иммуногенность при индексе, равном

6,0-8,0. д) По содержанию антигена, выращенного в единицах МИД, вакцина из КПЗМ -не менее иммуногенна, чем очищенная концентрированная вакцина. ком количестве вакцины N - 2 содержится 40,6 мкг белка. Следовательно, на

1 мг белка в серии N - 2 приходится

492 МИД . В 1 л вакцины N - 2 содержится 3225 прививочных доз.

Пример 4. Вакцина из КПЗМ серии У 3/6329/3/2000/32 C.

Третий сбор вируса из зараженной культуры почечной ткани зеленой марВ,З тышки Ф 6329 с титром вируса 10 в

1 мл обрабатывают формалином 1:2000 при 32"С в течение 3 сут с последующим хранением при 4 С 10 сут. Содержание белка по Несслеру в серии Ф 3

150 мкг/мл. Определение МИД, на мышах проводят аналогично примеру N - 2.

50Х-ная защита мышей, вакцинированных серией 9 3, соответствует разведению исходной вакцины 1:81,3. Следователь- 20 но, 1 МИД в объеме 0,5 мл равна

5А

0,0123 мп цельной вакцины Ф 3, а в

20 МИД однои прививочнои дозы

5о . 0,246 мл неразведенной вакцины N 3.

Формула изобретения

Способ получения вакцины против клещевого энцефалита путем выращивания вируса в культуре ткани, сбора вируса, инактивации его формалином с последующим фильтрованием, сорбцией и/или высушиванием, о т л и ч а— ю шийся тем, что, с целью повышения иммуногенности и выхода целевого продукта, выращивание вируса осуществляют в культуре клеток почечной ткани зеленых мартышек, а сбор вируса осуществляют многократно с интервалом в 2-3 дня.