Способ приготовления вакцины против клещевого или японского энцефалита из вирусной суспензии

 

Изобретение относится к микробиологии, в частности к производству вакцинных препаратов. Способ приготовления вакцины против клещевого или японского энцефалита из вирусной суспензии включает несколько стадий. Инактивацию вирусной суспензии осуществляют раствором формальдегида. Затем очищают ее от клеточной ДНК сульфатом бария или каолином и инактивируют свободный формальдегид. Полученную вирусную суспензию повторно очищают от клеточной ДНК и других примесей протамин сульфатом с последующим ее центрифугированием и/или хроматографированием. Ресуспендированный осадок после центрифугирования или соответствующую хроматографическую фракцию стандартизируют по содержанию вирусного антигена и ДНК и используют для приготовления вакцины. Технический результат заключается в снижении риска заражения персонала и снижении содержания клеточной ДНК в вакцине. 1 з.п.ф-лы.

Изобретение относится к микробиологии, в частности к производству вакцинных препаратов.

Согласно требованию ВОЗ содержание клеточной ДНК в вакцинах, приготовленных на основе вирусных сборов, в частности, с перевиваемых клеточных линий жестко лимитировано величиной 100 пг на дозу для исключения потенциальной возможности ее онкогенного и трансформирующего действия.

Известен способ приготовления вакцины против клещевого или японского энцефалита из вирусной суспензии, включающий очистку вирусной суспензии от клеточной ДНК и других примесей протамин сульфатом с последующим ее хроматографированием или центрифугированием (авт.св. СССР N 1532050, кл. A 61 R 39/00, 1988).

Использование известного способа связано с риском заражения персонала, так как приготовление вакцины осуществляется от начала и до конца с живым вирусом. При этом содержание в вакцине клеточной ДНК, хотя и соответствует требованию ВОЗ, но достаточно высоко.

Технический результат от использования предлагаемого способа заключается в том, что уже на начальном этапе приготовления вакцины активность вируса подавляется, это приводит к минимизации риска заражения персонала, и, кроме того, в снижении содержания в вакцине клеточной ДНК.

Технический результат достигается тем, что в способе приготовления вакцины против клещевого или японского энцефалита из вирусной суспензии, включающем очистку вирусной суспензии от клеточной ДНК и других примесей протамин сульфатом с последующим ее центрифугированием и/или хроматографированием, перед очисткой вирусной суспензии от клеточной ДНК и других примесей протамин сульфатом ее инактивируют раствором формальдегида, после чего инактивируют свободный формальдегид.

Кроме того, перед очисткой вирусной суспензии от клеточной ДНК и других примесей протамин сульфатом ее очищают от клеточной ДНК сульфатом бария и каолином.

Способ осуществляют следующим образом.

Вирусную суспензию, полученную в пермессивной для данного вируса и разрешенной для вакцинного производства культуре клеток, инактивируют 0,02%-ным раствором формальдегида, осветляют центрифугированием при 10 тыс.·g в течение 30 мин или фильтрацией, используя мембраны с диаметром пор 200 нм. Далее вирусную суспензию очищают от клеточной ДНК сульфатом бария или каолином в виде 10%-ной водной суспензии, добавляя их до конечной концентрации соответственно 4 - 8 мг/мл и 1 - 2 мг/мл. После этого вирусную суспензию концентрируют в 20 - 100 раз на мембранах с диаметром пор 50 нм или менее, либо с порогом отсечения 300 - 1000 кД. Свободный формальдегид инактивируют, связывая его трис-буфером в концентрации 0,004 моль/л. Затем очищают вирусную суспензию от клеточной ДНК и других примесей, в том числе возможных крупноразмерных вирусов - контаминантов, протамин сульфатом в конечной концентрации 3 - 5 мг/мл. После инкубации при 4^oC в течение 30 мин преципитат удаляют центрифугированием при 10 тыс.·g в течение 30 мин, а надосадок (остаток клеточной ДНК и другие примеси, а также протамин сульфат) - ультрацентрифугированием через слой 15% сахарозы при 75 тыс.·g в течение 3 ч или с помощью хроматографии на сорбентах. В материале, содержащем инактивированный вирус (ресуспендированный осадок после центрифугирования или соответствующая хроматографическая фракция), определяют содержание белка и клеточной ДНК. После стандартизации по содержанию вирусного антигена и ДНК и прохождения соответствующих биологических и химических контролей этот материал используют для приготовления серии вирусной вакцины.

Формула изобретения

1. Способ приготовления вакцины против клещевого или японского энцефалита из вирусной суспензии, включающий очистку вирусной суспензии от клеточной ДНК и других примесей протамин сульфатом с последующим ее центрифугированием и/или хроматографированием, отличающийся тем, что перед очисткой вирусной суспензии от клеточной ДНК и других примесей протамин сульфатом ее инактивируют раствором формальдегида, после чего инактивируют свободный формальдегид.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что перед очисткой вирусной суспензии от клеточной ДНК и других примесей протамин сульфатом ее очищают от клеточной ДНК сульфатом бария или каолином.