Способ количественного определения иммуноглобулинов в сыворотке крови человека

 

Изобретение относится к иммунологии . Цель изобретения - ускорение способа. Моноспецифическую антисыворотку и исследуемый образец вносят в реакционную систему с сернокислым кадмием и подвергают спектрофотометрии. Затем определяют величину экстинции преципитата. Время проведения реакции сокращается до 1 ч. 2 ил. 00 О5 со СП

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН

„„SU„„1363075 А1

С511 4 С 01 N 33/53

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

1 hajj л, фр, J"

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3942295/28-14 (22) 30.07.85 (46) 30,12.87.Бюл. Р 48 (71) Киргизский государственный медицинский институт (72) Е.В.Бененсон и Е.Г.Цай ,(53) 612. 015 (088. 8) (56) Манчини. Иммунологические методы, М.: Мир, 1979; с. 41-42. (54) СПОСОБ KOjlHW СТВЕ ННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИММУНОГЛОБУЛИНОВ В СЫВОРОТКЕ

КРОВИ ЧЕЛОВЕКА (57) Изобретение относится к иммунологии. Цель изобретения — ускорение способа. Моноспецифическую антисыворотку и исследуемый образец вносят в реакционную систему с сернокислым кадмием и подвергают спектрофотометрии. Затем определяют величину экстинции преципитата. Время проведения реакции сокращается до 1 ч. 2 ил.

1363075

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии.

Целью изобретения является ускорение способа.

Цель достигает ся проведением иммунопреципитации в жидкой фазе в присутствии О,ОЗЗХ-ного сернокислого кадмия.

Способ осуществляется следующим образом.

Реакцию преципитации проводят в объеме 0,5 мп физиологического раствора, содержащего 0,0337. сернокислого кадмия. Исследуемый образец вносят в реакционную систему в объеме 0,005 мп (при исследовании сыворотки или плазмы крови их следует развести в 2-2,5 раза, спинномозговую жидкость, перитониальные и другие экссудаты исследуют неразведенными). Сухую моноспецифическую антисыворотку против определяемого иммуноглобулина растворяют в 0,5 мп дистиллированной воды и вносят н реакционную систему в объеме 0,02 мп.

Готовят следующие контроли: 0,5 мп

0,0337.-ного раствора сернокислого кадмия (Е„); 0,5 мл 0,0337-ного раствора сернокислого кадмия и 0,005 мл исследуемого образца (Е ), 0,5 мп

0,0337.-ного раствора сернокислого кадмия и 0,02 мл антисыворотки (Е ).

Все пробы и контроли несколько раз встряхивают, выдерживают 1 ч при комнатной температуре и спектрофотометрируют в кювете с длиной оптического хода 0,6 см при длине волны

340 мкм.

Величину экстинции преципитата, характеризующего содержание иммуноглобулина в исследуемом образце (Е „), определяют. следующим образом.

Экстинция опыта Е> складывается из экстинции растворителя Е,, экстинции исследуемого образца (Е < — Е,), экстинции антисыворотки (E — Е ) и экстинции образовавшегося преципитага Ex, или Е = E „+ E - Е + Е + Е„, i отсюда Еx = Еo E Г- F„+ E °

В жидкой преципитирующей системе с избытком антител и при их постоянном количестве величина образунлцегося преципитата линейно зависит от содержания антигена в системе и может быть описана уравнением у ах +

+ b (см).

40 Данные, полученные способом Ман50

5

Таким образом, количественную оценку результатов. определения иммуноглобулийов турбидиметрическим способом проводят как в условных единицах оптической плотности (экстинции1, так и в метрических единицах, при этом предварительно находят с помощью эталонных образцов иммуноглобулинов значения коэффициентов линейной функции а и Ь.

Сравнительные измерения концентрации иммуноглобулинов в эталонных сыворотках способом Манчини и предлагаемым способом дали следующие результаты (фиг. 1-2).

Были использованы эталонные сыворотки, содержащие, мг/мл: А 1,7;.

M 1,3; I 21,76, серия 9, контроль

2545, производства ЦНИИ вакцин и сывороток им И.И.Мечникова;А 1,51;

M 1,10; I 8,82, серия 2, контроль

11 1782, производства Горьковского

НИИЭМ.

Каждую эталонную сыворотку разводили в 2 и 4 раза физиологическим раствором таким образом, что для построения графика использовалось от 4 до 6 точек. Параллельно ставили åакцию радиальной иммунодиффузии по

Манчини с использованием тех же эталонных сывороток.

Величины, полученные предлагаемым способом, хорошо укладываются в линейную зависимость с небольшими отклонениями от ожидаемых значений: для А отклонения от заданных эталоном составили 1,3-7,9Х, для М вЂ” на .

3,87., для.I, — на 5,7Х°. чини, отклоняются от эталонных более значительно: для А — на 5,9- 12,57., для М вЂ” на 5,8-257., для I — на 2,683,7Х.

Время проведения реакции 1 ч вместо 48 ч.

Формула изобретения

Способ количественного определения иммуноглобулинов в сыворотке крови человека путем постановки реак- ции преципитации с моноспецифическими антисыворотками против иммуноглобулинов, -отличающийся тем, что, с целью ускорения способа, реакцию иммунопреципитации проводят в жидкой фазе в присутствии

О,ОЗЗХ- ного сернокислого кадмия.

О, 1

0107

O,DD1

r3P

Фис. и

Составитель А.Агуреев

Редактор И.Рыбченко Техред Л.Серщокова Корректор M.Пожо

Заказ 6398/34 Тираж 776 . Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4