Штамм viвriо сноlеrае еlтоr, используемый для получения спонтанного фага 123

 

Изобретение относится к области микробиологии и может быть использовано в лабораторной диагностике для дифференциации эпидемического и неэпидемического штаммов холерных вибрионов эльтор. Цель изобретения - новый штамм Vibrio cholerae eltor 123 - продуцент умеренного фага 123, вирулентные мутанты которого пригодны для дифференциации эпидемических и неэпидемических холерных вибрионов эльтор. Штамм депонирован в коллекции института Микроб под номером КМ-16 (123). Вирулентные мутанты фага 123 обладают высокой специфичностью, лизируют только неэпидемические штаммы холерных вибрионов эльтор.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СООИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

Ai (19) (И) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ASTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ 1

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

Г10 ДЕЛАН ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 4122419/28-13 (22) 23.09,86 (46) 15.02,88. Бюп. 1(6 (71) Всесоюзный научно-исследовательский противочумный институт "Микроб" и Туркменская противочумная станция (72) Н.М. Остроумова, В.М. Развых, В.П. Mopos, И.В. Грачева, Г.И. Коровкина и Н.П. Коннов (53) 576.858(088.8) (56) Инструктивно-методические указания по лабораторной диагностике холеры, М., 1984, с. 44-47. (54) ШТАММ VIBRIO CHOLERAE .ELTOR, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ СПОНТАННО ГО

ФАГА 123 (11 4 С 12 N 7/00 У! (С 12 N 7/00

С 12 R 1:63, С 12 R 1:91) (») Изобретение относится к области микробиологии и может быть использовано в лабораторной диагностике для дифференциации эпидемического и неэпидемического штаммов холерных вибрионов эльтор. Цель изобретения — новый штамм Vibrio cholerae eltor 123продуцент умеренного фага 123, вирулентные мутанты которого пригодны для дифференциации эпидемических и неэпидемических холерных вибрионов эльтор, Штамм депонирован в коллекции института "Микроб" под номером КМ-16 (123).

Вирулентные мутанты фага 123 обладают высокой специфичностью, лизируют только неэпидемические штаммы холерных вибрионов эльтор.

1373729

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано в лабораторной диагностике для дифференциации эпидемических и неэпидеми" ческих штаммов холерных вибрионов эльтор °

Цель изобретения — новый штамм

Vibrio cholerae eltor 1?3 — продуцент умеренного фага 123, вирулентные мутанты которого пригодны для дифференциации эпидемических и неэпидемических холерных вибрионов эльтор.

Штамм депонирован в коллекции Института "Микроб" под номером КМ-16 (123), Культурально-морфологические признаки. Подвижные, слегка изогнутые палочки 1,5-3 мкм в длину и 0,20 5 мкм в ширину, с одним полярно расположенным жгутиком, спор H капсул не образует, грамотрицательны.

На твердых питательных средах (агар Мартена, агар Хоттингера, ще- 25 лочной мясо-пептонный агар рН 7,6+

+0,2) образуют через 18 ч выращивания при 37+1 С круглые, диаметром

3,0+0,5 мм полупрозрачные колоннии с голубоватым оттенком, ровным краем, слегка уплотненным центром.

На жидких средах (бульон Иартена, 1 .-ная пептонная вода, бульон Хоттингера рН 7,8+0,2) образуют равномерную муть и нежную пленку на поверхности через 6 ч выращивания при

37+1 С.

Физиологические признаки. Тест на оксидазу положителен, Разлагает до кислоты без газа маннозу, сахарозу, глю. козу, маннит, не разлагает арабинозу, 40 инозит,лактозу, глюкозу на среде ХьюЛейфсона окисляет и ферментирует. Образует декарбоксилазы лизина и орнитина, не образует дигидролазу аргинина. Ферментирует крахмал и желатин, 45

Не растет при повышенной концентрации хлористого натрия (7-10 ).

Гемолизирует эритроциты барана по

Грейгу.

Серологические свойства. Агглюти- 50 нируется до титра холерными сыворотками 0 и Огава, не агглютинируется холерными сыворотками RO и Инаба.

+0,2 и выРащивают пРи 37+1 С в течение 20+2 ч, затем фильтруют через фарфоровые бактериальные фильтры марки Ф-5, Полученный фильтрат наносят дорожкой на газон, приготовленный методом агаровых слоев, специального индикаторного штамма Ч. eltor 692 (К,И. — 11). Для этого индикаторный штамм выращивают 3 ч в, бульоне Мартена, 0,2 мл бульонной культуры вносят в 5,0 мл 0,7 .-ного расплавленного о (45 С) arapa Мартена, перемешивают и выпивают на 2%-ную агаровую пластину в чашке Петри. После застывания верхнего слоя на его поверхность наносят пипеткой каплю фильтрата и дают стечь в виде дорожки. После инкубирования при (37+ 1"С в течение 20+2 ч на месте нанесения фильтрата обнаруживают негативные колонии умеренного фага 123 и его вирулентные мутанты.

Платиновой иглой уколом в центр прозрачной негативной колонии фаг переносят в 10 пробирок с 1,0 мл бульона Мартена рН 7,6+0,2, туда же вносят 0,2 мл бульонной (трехчасового роста) культуры штамма-ментора

V, eltor 692 и 0,5 мл 0,7 -ного агара

Мартена. Содержимое каждой. пробирки перемешивают и выливают на отдельную пластинку агара Мартена в чашке

Петри и дают застыть. После выращивания посевов в течение 20+2 ч в каждую чашку заливают по 10 мл бульо на Иартена и шпателем перемешивают с верхним агаровым слоем, жидкую часть переносят во флакон и фильтруют, как указано вьппе.

Полученный фильтрат вирулентного мутанта размножают в жидкой среде (бульон Мартена рН 7,6+0,2). К

100,0 мл бульона добавляют 5,0 мл фильтрата и 1,0 мл бульонной (трехчасовой) культуры штамма 692, инкубируют при 37+1 С в течение 2,0+0,5 до просветления, обеззараживают фильтрацией через бактериологические свечи фильтры, как указано вьппе, после контроля на стерильность используют по назначению.

Пример, Для обнаружения спон55 таиной продукции умеренного фага 123 и его вирулентных мутантов штамм

123 засевают в бульон Иартена рН 7,6+

Вирулентные мутанты фага 123 обладают высокой специфичностью, они лизируют только неэпидемические штам. мы и не лиэируют эпидемические штаммы холерных вибрионов эльтор. Их при1373729

Составитель В. Белофастов

Те хред Л. Олийнык (Корректор А.Тяско

Редактор M. Недолуженко

Тираж 520

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д,4/5

Заказ 536/20

Подписное

Производственно-полиграфическое предприятие, r.ужгород, ул.Проектная,4 менение на практике облегчает задачу эпидемических расследований при плановых обследованиях водоемов, территорий угрожаемых по холере.

Формула изобретения

Штамм Vibrio cholerae eltor КМ-16 (123), используемый для получения спонтанного фага 123,