Способ определения антител к бактериальным гемолизинам

 

Изобретение относится к иммунологии . Цель изобретения - более раннее определение антител. К взвеси клеток добавляют полужидкий агар и взвесь эритроцитов, чувствительных к лизирунщему действию бактериального гемолизина. После застьшания агара и инкубации в термостате на поверхность агара наливают раствор бактериального гемолизина. Чашки инкубируют до четкого выявления зон задержки гемолиза. С помощью стереоскопического микроскопа подсчитьшают количество непрозрачных зон задержки гемолиза с расположенной в центре лимфоидной .. клеткой,

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИН (19) (И) А1 (я) 4 С 01 Н 33/49 фО7CP< ) о рг,, t I

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ н двтореном СвидкткльСтвм (21 ) 382 597 5/28-1 4 (22) 17. 12. 84 (46) 30. 05. 88. Бюл. У 20 (7 1) Курский государственный медицинский институт (72) Л.М. Закарян и Л.П. Чалая (53) 615.375(088.8) (56) Выгодчиков Г.В. Микробиология и иммунология стафнлококковых заболеваний. М.: Медгиз, 1950. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИТЕЛ К

БАКТЕ РИАЛЬНЫМ ГЕМОЛИЗИНАМ (57) Изобретение относится к иммунологии. Цель изобретения - более раннее определение антител. К взвеси клеток добавляют полужидкий агар и взвесь эритроцитов, чувствительных к лизирующему действию бактериального гемолизина. После застывания агара и инкубации в термостате на поверхность агара наливают раствор бактериального гемолизина. Чашки инкубируют до четкого выявления зон задержки гемолиза.

С помощью стереоскопического микроскопа подсчитывают количество непрозрачных зон задержки гемолиза с расположенной в центре лимфоидной клеткой.

1399685

БНИИПИ Заказ 2662/46 Тираж 847 Подписное

Произв.-полигр. пр-тие,, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологическим исследованиям, и может быть использовано для оценки имунного ответа на бактериальные гемолизины на ранних этапах иммуногенеза.

Целью изобретения является более раннее опрецеление антител путем оп.ределения количества клеток, продуци- 1О рующих антитала против бактериальных гемолизинов.

Способ осуществляют следУющим образом.

Приготовляется в определенной кон- 15 центрации взвесь клеток, к которой добавляется растопленный полужидкий агар и взвесь эритроцитов, чувстви:тельных к лизирующему действию взято го в опыт бактериального гомолизина. 20 .Например, для стафилококкового аль. фа-гемолизина — кроличьи эритроциты.

Полученная смесь наливается в чашки

Петри. После застывания агара и инкубации в термостате на поверхность агара наливается раствор бактериального гемолизина в концентрации, необходимой для того, чтобы вызвать гемолиз эритроцитов в агаре. Чашки инкубируются в термостате до полного 30 гемолиза и затем при комнатной температуре до четкого выявления зон задержки гемолиза. С помощью стереоскопического микроскопа при боковом

3S освещении на прозрачном фоне подсчитывается количество непрозрачных зон задержки гемолиза с расположенной в центре лимфоидной клеткой.

Пример. Агар Дифко в концентрации 1,4 готовили на фосфатном буфере рН 7,2, стерилизовали и разливали в стерильные колбы. До опыта хранили в холодильнике. Перед опытом растапливали на водяной бане. Для приготовления взвеси эритроцитов у кроли15 ка из краевой вены уха брали кровь в стерильный флакон со стеклянными бусами и дефибринировали путем встряхивания, трижды отмывали 0,9 -ным раствором хлорида натрия и готовили

50-ную взвесь на среде 199.

Мышей умерщвляли под эфирным наркозом, извлекали селезенку, часть ее измельчали,с помощью гомогенизатора в среде 199. Взвесь процеживали через четыре слоя капрона в силиконированную пробирку. Клетки дважды отмывали средой 199 по 1 мл, центрифугировали при 1000 об/мин в течение 5 мин. Подсчитывали лейкоциты в камере Горяева.

Готовили рабочее разведение 2 ° 10 в мл °

В пробирку с рабочим разведением лейкоцитов добавляли 0,5 мл 50 -ной взвеси эритроцитов кролика и 1,5 мл агара при 42 С. Полученную взвесь вью ливапи в подогретые до 37 С чашки

Петри. Чашки помещали в термостат и инкубировали при 37 С в течение 1,5 ч.

На поверхность агара наливали 3 мл раствора стафилококкового альфа-гемолизина в концентрации 0,5 Lh/ìë.

Стафилококковый токсин был получен из ИЭМ АМН СССР ич. Н.Ф. Гамалея.

После добавления токсина чашки инкубировали в термостате при 37 С в течение часа и оставляли при комнатной температуре до следующего дня. С помощью стереоскопического микроскопа при боковом освещении с окулярами х12,5 и объективом х2 подсчитывали число непрозрачных зон задержки гемолиза с расположенной в центре лимфоидной клеткой.

Таким образом, предложенный способ может быть использован для оценки иммунного ответа на бактериальные гемолизины. Применение методики повысит информативность исследований, так как позволит определить количество клеток, продуцирующих антигемолизины, т. е. оценить иммунный ответ более все- сторонне и на более ранней фазе иммуногенеза. 3а счет того, что оценивается не только конечная, но и более ранняя фаза иммуногенеза, повышается точность оценки, так как появляется возможность оценки динамики процесса.

Формула изобретения

Способо определения антител к бактериальным гемолизинам путем проведения реакции нейтрализации гемолизинов антителами, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью более раннего определения, реакцию нейтрализации проводят путем смешивания лимфоидных клеток, продуцирующих антитела с эритроцитами в агаровом геле, инкубации, внесения на поверхность arapa бактериального гемолизина с последующим учетом количества клеток, образующих зоны локальной задержки гемолиза.