Способ исследования белковых фракций микроэлектрофорезом

Авторы патента:

G01N27/26 - путем определения электрохимических параметров; путем электролиза или электрофореза (определение коррозионной стойкости G01N 17/00; путем разделения на составные части с использованием адсорбции, абсорбции или подобных процессов или с использованием ионного обмена, например хроматографии G01N 30/00; иммуноэлектрофорез G01N 33/561; электрохимические процессы и аппараты вообще B01J; стандартные элементы H01M 6/28)

№ 146086

l(JIRCC 421 3pg

ceca

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Подписная группа М 173

В. А. Вайчювенас

СПОСОБ ИССЛЕДОВАНИЯ БЕЛКОВЪ|Х ФРАКЦИЙ

МИКРОЭЛЕКТРОФОРЕЗОМ

Заявлено 5 июня 1961 г. за М 733599/31-16 в Комитет по делам изобретений и открв1тий при Совете Министров СССР

Опубликовано в «Бюллетене изобретений» Хе 7 за 1962 г.

Предлагаемый способ исследования белковых фракций микроэлекгрофорезом является модификацией одного из методов электрофореза на опорной среде, например на агар-агаровом геле.

Предлагаемый способ по сравнению с известными позволяет увеличить число одновременно проводимых исследований и уменьшить количество сыворотки на одно исследование, причем непрозрачный фон на фильтровальной бумаге заменяется прозрачным фоном агар-агара и время электрофореза уменьшается до 2 час. Особенность способа за ключается в том, что на стеклянной пластинке с агаром посредством гребенки со строго одинаковыми размерами зубьев делают ряды желобков, в которые градуированной пипеткой вносят различные исследуемые жидкости, подключают электрический ток и по окончании процесса обрабатывают пластинку известными способами.

Исследование белковых фракций микроэлектрофорезом на агаровом геле может быть осуществлено на известном аппарате, схема которого изображена на фиг. 1, вид в плане; на фиг. 2 вЂ” тот же аппарат, разрез А-А на фиг. 1; на фиг, 3 вЂ” схема гребенки для выполнения желобков на поверхности агарового геля; на фиг. 4 вЂ” схема рабочего положения гребенки при выполнении желобков.

На чистую, высушенную, с обезжиренной поверхностью стеклянную пластинку 1, находящуюся в горизонтальном положении, наливают подогретый до температуры 80 и охлажденный до 50 вЂ” 60 профильтрованный 1%-ный раствор агар-агара в буферном (веронало-мединаловом, баратном) растворе, рН которого равна 8,6, ионная сила 0.08 вЂ” О,1, а оптимальное количество вЂ” 80 мл раствора для получения толшины слоя в

1,75 мм. Пластинку 1 с агар-агаром прикрывают кристаллизаторным колпаком и охлаждают при комнатной температуре в течение 1 час.

После охлаждения берут гребенку 2 (из пластмассы), устанавливают ее зубьями, имеющими одинаковый размер, под углом 90 к поверх№ 14б08б ности слоя 3 агара и слегка нажимают до упора в стеклянную пластинку. Через 30 вЂ” 40 сек гребенку снимают и повторяют эту же операцию в следующем ряду слоя агара. Таким образом получают 16 желобков 4 в одном ряду, соответственно числу зубьев гребенки, а всего 48 желобков в трех рядах, причем каждый желобок имеет следующие размеры: глубину 1,75 мм, ширину 1 мм и длину 4,5 м,я; расстояние между рядами желобков составляет 75 мм

Подготовленную к работе пластинку 1 с агаром устанавливают на столик 5 аппарата в горизонтальном положении. На края пластины (на агаровый гель) накладывают четырехслойные салфетки б из предварительно пропитанной буферным раствором фильтровальной бумаги, посредством которых агар-агаровый слой соединяется с буферным раствором 7, заполняющим кюветы 8, в которых за перегородками 9 находятся анодный электрод 10 и катодный электрод 11. В каждой кювете находится по 900 мл буферного раствора. Градуированной пипеткой в каждый желобок 4 вносят различные исследуемые жидкости, например сыворотку или плазму крови, по 0,0015 вЂ” 0,002 мл (оптимальное количество белка составляет 0,1 миллиграмма).

После заполнения всех желобков 4 аппарат закрывают крышкой 12. снабженной по краям резиновой прокладкой для герметичности образуемой B аппарате камеры, подключают выравненный электрический ток и ведут электрофорез в течение 2 час при комнатной температуре (18вЂ”

20"). По окончании процесса пластинку 1 отделяют от буферного раствора (после отключения тока салфетки 6 снимаются), извлекают ее из аппарата и обрабатывают обычными способами. Окраску электрофорсграмм производят известными красителями, используемыми для окрашивания на фильтровальной бумаге. Расшифровку электрофореграмм проводят на микрофотометрах типа МФ-2 или МФ-4. Таким образом можно одновременно проводить 48 опытов (исследований) на обычных аппаратах, предназначенных для электрофореза на фильтровальной бум are.

По заключению ордена Ленина Института гематологии и переливания крови предлагаемый способ может быть рекомендован для внедрения в практику биохимических исследований

Предмет изобретения

Способ исследования белковых фракций микроэлектрофорезом на агаровом геле, отличающийся тем, что, с целью увеличения числа одновременных опытов, на стеклянной пластинке с агаром гребенкой со строго одинаковыми размерами зубьев делают ряды желобков, в которые градуированной пипеткой вносят различные исследуемые жидкости, подключают ток и по окончании процесса обрабатывают пластинку известными приемами.

Прибор для определения коррозионной активности почвы // 104121

Способ электрохимического определения активности твердых окислителей и восстановителей // 61738

Способ определения прочности сцепления серебряного слоя зеркала со стеклом // 61472

Способ определения прочности сцепления серебряного слоя зеркал со стеклом // 61141

Устройство для сигнализации о появлении кислоты, щелочи или солей в воде // 36223

Прибор для испытания нефти // 15607

Способ определения нитрит-иона в растворе // 2105296

Изобретение относится к электрохимическим методам анализа с использованием ионоселективных электродов и может быть использовано для повышения чувствительности и селективности способа

Способ определения мышьяка (iii) // 2105297

Изобретение относится к электроаналитической химии, а именно к способу определения мышьяка (III), включающему концентрирование мышьяка на поверхности стеклоуглеродного электрода в растворе кислоты с последующей регистрацией аналитического сигнала, при этом концентрирование мышьяка (III) проводят на поверхности стеклоуглеродного электрода, покрытого золотом, в растворе до 3,0 M в интервале потенциалов -0,40-(-0,45)B в течение 1-10 мин с последующей регистрацией производной анодного тока по времени при линейной развертке потенциала

Способ измерения потенциала рабочего электрода электрохимической ячейки под током // 2106620

Изобретение относится к области электрохимии, электрохимических процессов и технологий в части измерения потенциала электродов под током, а именно к способу измерения потенциала рабочего электрода электрохимической ячейки под током, основанному на прерывании электрического тока, пропускаемого между рабочим и вспомогательным электродами, и измерении текущего потенциала рабочего электрода, при этом процесс измерения текущего потенциала Eизм рабочего электрода производят относительно электрода сравнения непрерывно по времени t, затем по измеренным значениям потенциала рассчитывают первую производную от зависимости изменения текущего потенциала рабочего электрода от времени: (t)=Eизм

Способ получения активированных кислого и щелочного растворов // 2108300

Изобретение относится к способу получения активированных кислого и щелочного растворов, включающему электрохимическое разделение водного раствора электролита, при этом электрохимическому разделению подвергают мочу животных и/или человека

Способ адсорбционного концентрирования необратимо адсорбирующихся на металлах соединений // 2114424

Изобретение относится к адсорбции компонентов, а именно к способу адсорбционного концентрирования необратимо адсорбирующихся на металлах соединений путем наложения электрического поля в электрохимической ячейке, при этом перед концентрированием проводят адсорбцию на жидкометаллическом электроде из раствора, содержащего адсорбируемые соединения, при интенсивном перемешивании и потенциале электрода, обеспечивающем необратимую адсорбцию, а концентрирование после отстаивания осуществляют путем сокращения поверхности электрода с необратимо адсорбируемыми соединениями при переводе электрода из ячейки в капилляр. Изобретение относится к анализу материалов с помощью оптических методов путем адсорбции компонентов

Способ определения потенциала поверхности // 2119157

Изобретение относится к области аналитической химии, а именно к области аналитической электрохимии, и может быть использовано при определении свойств грунтов, горных пород, строительных материалов, а также свойств поверхностей раздела фаз

Полупроводниковый материал для адсорбционных сенсоров низкомолекулярных органических соединений и способ его изготовления // 2119695

Изобретение относится к составу полупроводниковых материалов, используемых в адсорбционных сенсорах для обнаружения и количественной оценки концентрации низкомолекулярных органических соединений, преимущественно кетонов в выдыхаемом людьми воздухе, и к технологии изготовления таких полупроводниковых материалов

Электрохимический датчик концентрации водорода в газовых и жидких средах // 2120624

Способ определения содержания нефтепродуктов в воде // 2126965

Устройство для анализа воды // 2132049