Штамм фага бактерий вида yersinia еnтеrоliтiса для получения антифаговой сыворотки 1 типа

 

Изобретение относится к медицинской вирусологии и микробиологии, а именно к классификации вирулентных фагов кишечных иерсиний. Целью изобретения является новый штамм вирулентного бактериофага И2, который может быть использован для получения высокоактивной сыворотки для дифференциации родственных фагов кишечных иерсиний. Штамм J. enteroQolitica вьщелен из объектов окружающей среды. Депонирован в коллекции бактериофагов Тбилисского НИИ вакцин и сывороток под номером Ф-130. (Л

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК (5ц 4 С 12 М 7/00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

00 ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21), 4130104/28-13 (22) 08.10.86 (46) 30.06.88. Бюл. У 24 (71) Тбилисский научно-исследовательский институт вакцины и сывороток (72) Ж.С.Капанадзе, Т.Л.Чолокашвипи, Т.Г.Чанишвили, М.А.Дарсавелидзе, Г.В.10щенко и В.И.Дунаев (53) 576.858.9(088.8) (56) Жугова Т.Ч.- В кн. Актуальные .вопросы бактериофагии и прикладной иммунологии. Мат. Всес. семинара.

Тбилиси, 1984, с. 45-47.

Микробиология, эпидемиология и иммунобиология, 1979, Ф 4.

„.SU„„1406157 А 1 (54) ШТАММ ФАГА БАКТЕРИЙ ВИДА JKRS ILIA ENTER0C0LITICA ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИФАГОВОЙ СЫВОРОТКИ I ТИПА (57) Изобретение относится к медицинСкой вирусологии и микробиологии, а именно к классификации вирулентных фагов кишечных иерсиний. Целью изобретения является новый штамм вирулентного бактериофага И2, который может быть использован для получения высокоактивной сыворотки для дифференциации родственных фагов кишечных иерсиний. Штамм J. entего|.„о1itiса выделен из объектов окружающей среды.

Депонирован в коллекции бактериофагов Тбилисского НИИ вакцин и сыворо- Ж ток под номером Ф-130.! 406157

Изобретение относится к медицинской вирусологии и микробиологии, а именно к классификации вирулентных фагов кишечных иерсиний.

Целью изобретения является штамм вирулентного бактериофага И-2 (ф-130)

J. entегоcolitica, предназначенный для получения высокоактивной антифаговой сыворотки для дифференциации. 10 родственных фагов кишечных иерсиний.

Фаг И-2 получен иэ сточных вод.

Штамм хранится в коллекции бактериофагов Тбилисского НИИ вакцин и сывороток под номером Ф-130.и характе- 15 ризуется следующими признаками. !!орфологические признаки. Корпускулы фага И-2 имеют гексогональную головку размером 700 х 700 А, соединенную с отростком сложного строения, 20 заканчивающегося базальной пластинкой. Длина отростка 1000 + 20 А, ширина 175 + 20 А.

Биологические свойства. На агаре

Хоттингера при посеве двуслойн ме- 25 тодом величина негативных пятен равна О, 1 мм в диаметре, колонии прозрачные, край ровный.

Титр фага, определенный по лити% ческому действию, равен и х 10 БОЕ/ 30

/мл — и х 10s БОЕ/мл.

В бульоне Хоттингера при посевной

6 дозе и х 10 микробных клеток на 1 мл среды, множественности 0,1, инкубации при 24 С в течение 4-5 ч фаг на- 35 капливается в количестве до и х х 10 БОЕ/мл.

Фаг термостабилен. Инактивация на. чинается при 50 С. Полное разрушение ь нуклеотида происходит при 65 С в те- 40 чение 1 ч.

Спектр действия. Фаг И-2 лизирует

47,2 штаммов J. entегоcolitica и не лизирует остальные штаммы Jersinia, а также штаммы семейства Entегоbacte" g5

riaceae.

Антигенные свойства. При иммунизации кроликов фагом И-2 с адъювантом

Фрейнда образуются специфические антитела. Полученная антисыворотка ней- 50 тралиэует фаг с константой нейтрализации 262.

Пример. Колбу с бульоном Хоттингера засевают соответствующей . о культурой и выращивают при 24 С на качалке. По достижении концентрации клеток 2-.5 х 10 кл/мл культуру заражают фагом с множественностью 0,1.

Через 4 ч аэрации лизат обрабатывают хлороформом, оставляют на ночь прн о

4-8 С и последовательно центрифугируют вначале 30 мин при 3000 об/мин, затем 1 ч при 20000 g.

Для получения антисыворотки 1 мл смеси, содержащей 0 5 мл фага с кон<( центрацией 2 10 корпускул, и 1,5 мл полного адъюванта Фрейнда вводят внутримышечно в задние лапки кролика. Через 30 дней кроликов иммунизируют повторно внутривенным введением той же дозы фага без адъюванта. Сыворотку готовят из крови, взятой на

40-й день от начала иммунизации, и испытывают в разведении 1: 103 и 1:200.

Для постановки реакции нейтрализации по методу Адамса фаг разводят питательным бульоном до титра 1 х х 10 частиц/мл. 0,1 мл такого бактет риофага добавляют к 0,9 мл соответствующего разведения сыворотки. Через 10-минутные интервалы к 0,1 мл смеси фаг-сыворотка добавляют 9,9 мл бульона для прекращения реакции, О, мл полученного разведения высевают в чашки методом агаровых слоев . Одновременно ставят Гессывороточный контроль .

При постановке реакции нейтрализации клонированных фагов кишечных иерсиний (21 клон) с антифаговой сывороткой к фагу И-2 были получены ре-, зультаты от 3-5 опытов. Константы нейтрализации вирулентных клонов фагов J. entегоcolitica антифаговой сывороткой к фагу И-2 следующие: И-1

101; И-2 262; И-3 О, И-4 О, И-5 О, И-6 О; И-7 О; И-8 О; И-9 37, И-10 О;

И-11 О, И-12 О; И-13 О; И-14 О; И-15

О; И-16 О; И-17 О; У-1 Î; У-2 О;

У-4 О; У-5 О; У-6 О, причем вирулентные фаги J. entегоcolitica, обозначенные через букву И и соответствующий порядковый номер, выделены в Тбилисском НИИВСе. Вирулентные фаги

J. entегоcolitica, обозначенные через букву У и соответствующий порядковый номер, выделены в Уфимском НИИВСе.

Константа нейтрализации сыворотки с гомологичным фагом (К) составляет

262, с фагом И-1 — 101, с фагом И-9—

37, что позволяет объединить в один серотип — "1", Остальные фаги не инактивируются данной антифаговой сывороткой.

Формула изобретения

Штамм фага бактерий вида Jersinia

entегоcolitica ТНИИВС !! Ф-130 для получения антифаговой сыворотки I типа.