Штамм полиовируса типа п,используемый для исследования объектов окружающей среды

 

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИН

ai) 4 С 12 N 7/00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ "-.

М А BTOPCHOMY СВИД=ТЕПЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 4143138/28-13 (22) 16,06.86 (46) 30.06.88. Бюл. Ф 24 (71) Молдавский научно-исследовательский институт гигиены и эпидемиологии (72) К.И.Спыну и В.П.Вуткарев (53) 576.858 (088.8) (56) Авторское свидетельство СССР

В 1352945, кл. С 12 N 7/00,06.01.86, (54) ШТАММ ПОЛИОВИРУСА ТИПА П, ИС- .

ПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ ОБЪЕКТОВ

ОКРУЖАКЩЕЙ СРЕДЫ (57) Изобретение относится к медиÄÄSUÄÄ 1406158 А1 цинской вирусологии и может быть использовано при оценке биогенного загрязнения энтеровирусами объектов внешней среды. Цель изобретения— повышение длительности выживания маркированного вируса в объектах окружающей среды. Штамм полиовируса получен иэ вакционного вируса полиомиелита путем последовательных пассажей при нарастающем температурном режиме от

37 до 42оС. Депонирован под номером

ГКВ 1935. В пробах воды маркированный вирус обнаруживается до 75 дней.

1406158

Изобретение относится к медицинс-, кой вирусологии и может быть использовано при оценке биогенного загрязнения энтеровирусами объектов внешней среды, в частности для изучения длительности выживаемости кишечных вирусов в водных объектах, воздухе, пищевых продуктах.

Цель изобретения — повышение дли t0 тельности выживания маркированного вируса в объектах окружающей среды.

Штамм получен из вакцинного . вируса полиомиелита Р-712 ck.2ав, который культивируют в фибробластах эмбриона человека в серии последовательных пассажей (в количестве 26), при нарастающем температурном режиме от 37 до 42 С, а затем для закрепления полученного варианта проводят 25 пас- 20 о сажей в культуре клеток при 42 С.

Штамм — нгорячий вариант полиовируса типа П депонирован под номером

ГКВ 1935 и хранится в коллекции Института вирусологии им. Д.И.Ивановского AMH СССР.

Штамм — "горячий" вариант полиовируса типа П характеризуется следующими признаками.

Морфологические признаки. Структу- 30 ра типична для энтеровирусов. По цанным электронно-микроскопических исследований вирионы имеют сферическую форму с диаметром 20 †2 нм.

Физико-химические свойства. Устой35 чив к 20,0 -ному эфиру в течение

18 ч, размножается в присутствии

50 мкг/мл 5 бром-2-дезоксиуридина, устойчив при рН 3,0-6,0; плавучая плотность в растворах хлорида цезия равна 1,34 г/см, коэффициент седиментании 150-165, задерживается при фильтрации на поверхности миллипоровых фильтров типа с диаметром пор

0,22 рм, 45

Культуральные свойства, Штамм характеризуется высокими показателями репродукционной активности в культуре клеток, в том числе в ФЭЧ. Уровень размножения полученного варианта вируса в культуре клеток составляет

6,5-7,0 1g ЦПД /мл. Температурный о режим культивирования 42 С обеспечивает максимальный выход вирусных частиц "горячего" варианта, тогда как энтеровирусы, в том числе исходный штамм P-712 ck 2ав, не способны репродуцироваться при этой температуре.

Стабильность биологических свойств.

Стабильность биологических свойств показана при 25-кратном пассировании полученного штамма в культуре клеток

ФЭЧ при 42 С.

Антигенные свойства. Изучение антигенной структуры в реакции диффузионной преципитации в геле с помощью штаммоспецифических сывороток к полиовирусам показало сходство со штаммом P-712 ck 2ав (вакцинный штамм вируса полиомиелита).

Патогенные свойства. Штамм горячий вариант полиовируса типа П является безопасным для человека, не патогенным для мышей при внутримозговом, внутримышечном, внутрибрюшинном и подкожном введении. Специфичность горячего варианта полиовируса показана в реакции нейтрализации на культуре клеток фибробластов эмбриона человека (ФЭЧ) при 42 С с использованием иммунной кроличьей сыворотки, полученной к этому варианту вируса полиомиелита, которая в разведении

1:32 ингибирует 1000 ЦПД мл вируса. о

Пример. Получение и использование горячего варианта штамма полиовируса типа П.

Горячий вариант вируса полиомиелита типа П, прошедший контроль на стерильность, биологическую активность, безвредность для белых мышей, разводили в 10 на питательных средах (среда 199, Игла, 0,5 -ный гидролизат лактальбумина на растворе

Хенкса, содержащих антибиотики-пенициллин 200,0 ЕД/мл, стрептомицин

100,0 мкг/мл). Затем маркированный вирус накапливали в культуре ФЭЧ при

42 С.

Для выращивания указанной первичHo — трипсинизированной культуры используют среду 199 с 10,0 сыворотки крупного рогатого скота. Вирус вносят на монослой клеток ФЭЧ после удаления среды из расчета 0,2 мл на

250000 клеток и после часового контакта культуру заливают средой 199 и инкубируют при 42 С в течение 6 о дней до наступления деструктивных изменений клеток.

Вирусосодержащий материал подвергают 3-кратному замораживанию и оттаиванию в смеси сухого льда со спиртом. Собранную жидкость центрифугируют 20 мин при 4000 об/мин для удаления клеточного дентрита. Затем мате1406158

Формула изобретения

Составитель Г.Смирнова

Техред А.Кравчук Корректор И. Эрдейи

Редактор Н.Швыдкая

Заказ 3157/23 Тираж 520 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

ll3035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 риал проверяют на присутствие цитопатогенного вируса путем титрования его в культуре клеток при 42 С. Титр вируса составляет 6,5 18 ЦПД /мл.

Подготовленный и проконтролированный на стерильность и биологическую активность маркированный вирус вносили в водопроводную воду. Вносимое количество "горячего" варианта полис- ið вируса типа П позволяет искусственно создать концентрацию 5,0 18 ЦПД /мл. 0 а

Воду выдерживают при 25 С. Через определенные интервалы времени (2,4, 6,8,10,12,24 ч, 2,4,6,10,15,30,45, 60,70,75,80,85,90 сут) производят отбор проб воды в объеме 1,0 мл.

Выделение индикаторного вируса проводят В ФЭЧ при температурном ре 20 о жиме 42 С. Количественный подсчет вируса осуществляют по методу РидаМенча при такой же температуре.

Анализ полученных результатов позволяет установить, что титр горячеro варианта вируса полиомиелита эа

5 ч снижается на 0,3 18 ЦПД /мп, что указывает на его период полужизни..

Обнаружение маркированного вируса в пробах воды до 75-го дня после его внесения в воде указывает на длительность его выживания в водопроводной воде при 25 С.

Возможность использования штамма полиовируса типа П при исследовании объектов внешней среды определяется его высокой репродуктивностью в культуре клеток при 42 С, .тогда как известный штамм размножается в культуре клеток только при 22 С. Кроме того, данный штамм можно в отличие от холодного варианта использовать круглый год в жарких районах.

Штамм поливируса типа П, ГКВ 1935, используемый для исследования объектов окружающей среды.