Способ определения аминопроизводных ксантеновых красителей в их изотиоцианатах

 

Изобретение относится к анализу органических веществ и предназначено для определения 4(5) аминопрризводных родаминов в соответствующих изотиоцианатах. Целью является повышение чувствительности. В качестве растворителя используют бинарную смесь диметилформамид/бензол в qooT- ношении 1:1. Измерения флуоресценции бесцветной лактонной формы аминородаминов проводят при , 490 им. Длина волны возбуждающего света 320 нм. 1 табл.S сл

СОЮЗ СОВЕТСМИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19) (11) А1 (51) 4 G 01 N 21 64

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А BTOPCHOMY СВИДЕ П":ЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 4166608/23-25 (22) 24.12.86 (46) 07.07.88. Бюл. Р 25 (71) Всесоюзный научно-исследовательский институт химических реактивов и особо чистых химических веществ (72) Н.В.Абросимова, .А;Г.Степанова, И.А.Красавин, Н.А.Родионова и В.Н,Глушко (53) 543.426 (088.8) (56) Авторское свидетельство СССР

В 911254, кл. С 01 N 21/64, 1979.

Степанова А.Г., Абросимова Н.В.

Люминесцентное определение примеси аминофлуоресцеина во флуоресцентном красителе изотиоцианате флуоресцеина. — ЖАХ, 1982, т. 37, вып. 2, с. 311-314. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АМИНОПРОИЗВОДНЫХ КСАНТЕНОВЫХ КРАСИТЕЛЕЙ В ИХ

ИЗОТИОЦИАНАТАХ (57) Изобретение относится к анализу органических веществ и предназначено для определения 4(5) аминопроизводных родаминов в соответствующих изотиоцианатах. Целью является повышение чувствительности. В качестве растворителя используют бинарную ,смесь диметилформамид/бензол в соотношении 1:1. Измерения флуоресценции бесцветной лактонной формы аминородаминов проводят при М(,„ = 490 нм. Длина волны возбуждающего света

= 320 нм. 1 табл.

1408317. ранее приготовленных растворов в цилиндрах, прибавляют по 1,5 мп бензола и перемешивают. Растворы поочеред5 но помещают в кварцевую кювету и измеряют интенсивности флуоресценции на спектрофпуориметре при Яфл.

= 490 нм и rl< -" 320 нм, используя в качестве холостой пробы ДМФА. Количество примеси аминородамина вычисляют по формуле

p(I cn ?кол 50 100Х

С (*op ? „с„) 3

Изобретение относится к анализу органических веществ пюминесцентным, способом и предназначено для определения аминопроизводных родаминов, а именно тетраэтип-4-аминородамина ! (4-ТЭАР) в тетраэтип-4-чзотиоциана те родамина. (4-РИТЦ), тетраэтил-5-., аминороцамина (5-ТЭЛР) в тетраэтил5-изотиоцианате родамина(5-PHTU) цикло-4-аминородамина (4-ЦАР) в 4 изотиоцианате циклородамина (4-HIlP) и цикло-S-аминородамина (5-UAP) в

5"иэотиоцианате циклородамина (5-ИЦР).

Целью изобретения является повышение чувствительности определения.

При определении в качестве растворителя используют бинарную смесь диметипформамида (ДМФА) и бенэола в соотношении 1:1.

В зависимости от качества красителя навеску растворяют в ДМФА таким образом, что полностью переводят краситель в лактонную форму, для чего 25

ДМФА добавляют постепенно до полного обесцвечивания раствора. С целью увеличения квантового выхода люминесцен, ции аминопроизводной в полученный раствор красителя добавляют бенэол в

|количестве, равном использованному количеству ДМФА, т.е. соотношение, ДМФА :бензоп должно быть равным 1:1, Увеличение в смеси количества ДМФА до

1 5 сопровождается уменьшением чувствительности определения в 1,3 раза из-за уменьшения квантового выхода, люминесценции. При увеличении содер жания бенэола до 1,5 также наблюда, ется уменьшение чувствительности оп редепения в 1,2 раза из-за разбавления анализируемого раствора.

Способ осуществляют следующим образом.

Навеску анализируемого образца 45 изотиоцианата родамина помещают в мерную колбу и растворяют в ДМФА. В три цилиндра вместимостью 15 мп помещают по 3 мл раствора образца. Затем во второй и третий цилиндры прибавляют 0,5 и 1,0 мл раствора, содержащего

0,5 мкг/мл определяемого аминородамина, Если растворы окрашены, то в третий цилиндр добавляют по 0,5 мп ДМФА до полного исчезновения окраски. Отмечают количество добавленного ДМФА и добавляют такое же количество в третий и второй цилиндры. В три пробирки отбирают по 1,5 мл раствора из где С вЂ” навеска испытуемого образца, г;

g - добавка определяемого амина, г;

Т„ „ — интенсивность флуоресценции раствора испытуемого образца;

I „ — интенсивность флуоресценции раствора испытуемого образца с добавкой; — интенсивность флуоресценции холостой пробы.

Время определения 15-20 мин.

Результаты определения аминопроизводных ряда красителей предлагаемым способом приведены в таблице. Правильность определения аминопроизводных подтверждейа методом "введенонайдено" .

Пример i. Определение 4-ЦАР в 4-ИЦР.

0,025 r 4-ИЦР взвешивают с точностью до 0,0002 r помещают в мерную

I колбу вместимостью 50 мп и растворяют в ДМФА. Готовят раствор 4-ЦАР

0,1 мг/мп в ДМФА. В три мерных цилиндра вместимостью 15 мл помещают по

3 мл раствора исследуемого образца, затем во второй и третий цилиндры добавляют соответственно 0,5 и 1,0 мл раствора аминородамина. Если раство- . ры окрашены, в третий цилиндр добавляют ДМФА порциями по 0,5 мл, тщательно перемешивая после каждой добавки, до полного исчезновения окраски. Отмечают добавленное количество ДМФА. Затем в первый и второй цилиндры добавляют отмеренное количество ДМФА и тщательно перемешивают. В три пробирки помещают по !,5 мп каждого из полученных в цилиндрах растворов, добавляют по 1,5 мл бензола и перемешивают ° Растворы поочередно помещают в кварцевую кювету и измеряют интенсивность флуоресценции, используя в .<ачестве холостой пробы ДМФА, при Яч л = 490 нм и Явозю = 320 нм. Ко7 4 этим задача оценки качества нарабатываемых красителей по содержанию в них люминесцирующих примесей приобретает особую важность.

Таким образом, способ позволяет, лимитируя содержание этих примесей, получить красители гарантированного качества и исключить возможность появления некачественного продукта путем повышения чувствительности определения до 0,01-0,02Х.

3 140831 личество примеси вычисляют по приведейной формуле

С = 0,025 r, g - 3,0 10 r, I

143, Ixow l, К 2,9Х.

Пример 2. Определение 2-ТЭАР в 4-РИТЦ.

Определение проводят по примеру 1, используя в качестве добавки раствор

4-ТЭАР. С = 0,025 г, g = 3>0-10 г, ива 144, дев 185, I õ îë l °

10, 2.

Укаэанные иэотиоцианаты ксантено вых красителей используются в качестве люминесцентных метчиков белка, при 15 этом изотиоцианаты, взаимодействуя с белком, образуют люминесцирующие соединения, по интенсивности свечения которых судят о количестве белка. При наличии в указанных красителях амино- 20 производных, создающих люминесцирующий фон, определение меченого белка становится невозможным. При получении красителей в промышленных условиях контролировать его качество 25 практически невозможно и вопрос о его пригодности выясняется только при использовании потребителем. В связи с

Формула изобретения

Сйособ определения аминопроиэводных ксантеновых красителей в их изотиоцианатах, включающий добавление в анализируемый раствор растворителя, возбуждение и регистрацию люминесценции полученного раствора, о т л и— ч а ю шийся тем, что, с целью повышения чувствительности определения, в качестве растворителя используют смесь диметилформамида и бензола в соотношении 1:l, возбуждение проводят при длине волны 2 320 нм, а регистрацию — при g 490 нм.

МинимаяьКраситель

Введе Найдено но, Х всего,Х

Примесь Содержание примеси, Х ное определенное количество, Х

4-РИТЦ 4-ТЭАР

30 6,0

3,0 7,1

3,1

0,01

4,2

3,0 13,2 О, 02

5-РИТ2 5-ТЭАР

10,2

0,03

4-ЦАР

4-ИЦР

5-ИЦР

3,0 6,1

3,0 8,5

2,9

5-ЦАР

5,7

0,02

Составитель О.Бадтиева

Редактор И.Николайчук Техред М.Дидык Корректор И.МУска

Заказ 3304/46 Тираж 847 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4