Способ получения вещества, восстанавливающего функцию миокарда
Изобретение предназначено для кардиологии. Измельченные сердца животных обрабатывают два раза ацетоном и помещают в реактор с уксусной кислотой. Затем в раствор добавляют хлористый цинк и после окончания экстракции субстрат центрифугируют. Надосадочную жидкость декантируют и перемешивают с ацетоном. Высушенный осадок измельчают и растворяют в дистиллированной воде. Производят фильтрирование. К фильтрату добавляют уксусную кислоту и устанавливают pH 4,5. Раствор стерильно фильтруют разливают в флаконы и лиофилизируют. Выход активного вещества составляет 0,127 кг. 1 табл.
Изобретение относится к медицинской промышленности, в частности к выделению вещества, восстанавливающего функцию миокарда, из органов животных. П р и м е р 1. Берут сердца свиней, освобождают от жира и связок. Измельчают, получают 10 кг сырья, которое помещают в ацетон на 24 ч, сливают ацетон и вновь заливают ацетоном на 48-72 ч. Ацетон берут с температурой -2оС. Ацетон сливают, а измельченное сырье помещают в реактор с охлаждением и мешалкой в раствор 5%-ной уксусной кислоты (5 частей на 1 часть сырья). К раствору добавляют хлористый цинк из расчета 0,5 г на 1 л. Экстракцию проводят в течение 24 ч при постоянном перемешивании. По окончании экстракции субстрат центрифугируют 20 мин при 3000 об/мин. Надосадочную жидкость декантируют, к ней добавляют 3 объема ацетона на 1 объем экстракта с температурой 0оС, перемешивают. Формирование осадка 20 ч. Высушенный осадок (порошок в количестве 0,8 кг) измельчают и растворяют в 5 л дистиллированной воды при 20оС. Водную экстракцию проводят 2 ч при непрерывном перемешивании. Удаляют фильтрованием балластные вещества. В фильтрате устанавливают рН 4,5, добавляя уксусную кислоту. Стерильно фильтруют через пластины EKS, разливают в флаконы, лиофилизируют, получают в каждом флаконе по 12 мг лиофилизированного порошка. Выход активного вещества из исходного сырья 0,127 кг. Биологическую активность вещества, выделенного из сердца, изучают на экспериментальной модели острого инфаркта миокарда. Инфаркт миокарда вызывают введением раствора изадрина, который представляет собой адренергическое вещество, стимулирующее В1-В2 адренорецепторы. Развитие инфаркта миокарда оценивают по гибели (летальности) животных, а также путем определения активности ферментов в сыворотке крови, характеризующих интенсивность процессов обмена в сердечной мышце; лактатдегидрогеназы (ЛДГ) КФ 1.1.1.27; изофермента ЛДГ 1; креатинфосфокиназы (КФК) КФ 2.7.32. При развитии острого инфаркта миокарда часть животных погибает в течение 1 сут, а в сыворотке крови резко увеличивается активность ЛДГ, ЛДГ-1, КФК. Эксперимент проведен на 125 крысах-самцах с массой тела 180-200 г, 100 животным дважды с интервалом 24 ч внутримышечно вводят изадрин в дозе 80 мг/кг, растворенный в 0,5 мл 0,9%-ного раствора хлорида натрия. Этих животных делят на 2 группы. Первую группу (контрольную) составляют 28 крыс, которым вводят по 0,5 мл 0,9%-ного раствора хлорида натрия. Вторую группу составляют 30 крыс, которым через 1 ч после каждой инъекции изадрина дважды внутримышечно вводят вещество из сердца в дозе 1 мг/кг, растворенное в 0,5 мл 0,9%-ного раствора хлорида натрия. Через 4 ч после второй инъекции вещества из сердца у животных из хвостовой вены берут кровь, отделяют сыворотку и в ней определяют активность ферментов ЛДГ, ЛДГ-1, КФК. В течение 1 сут после двух инъекций изадрина подсчитывают количество погибших крыс во всех группах. У 25 здоровых крыс определяют нормальные показатели активности ферментов. Результаты исследования представлены в таблице. Из данных таблицы следует, что двукратное введение изадрина животным контрольной группы (введение физиологического раствора) приводит к значительному достоверному увеличению активности ферментов в сыворотке крови и большой гибели животных. Применение вещества из сердца у животных на фоне введения изадрина приводит к достоверному снижению активности ферментов и летальности животных по сравнению с контрольной группой.
Формула изобретения
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ВЕЩЕСТВА, ВОССТАНАВЛИВАЮЩЕГО ФУНКЦИЮ МИОКАРДА, включающий двухкратную обработку измельченных сердец животных или жмыха сердец после выделения цитохрома "С" ацетоном при 0 5oС последовательно в течение 12 36 ч и 48 72 ч с последующей экстракцией 4 6%-ной уксусной кислотой в течение 12 36 ч в присутствии 0,5 г/л хлористого цинка, отделением образовавшегося осадка, обработкой надосадочной жидкости 2 4 объемами ацетона при 0 5oС, отделением осадка целевого продукта, растворением его в воде, фильтрованием и лиофилизацией.РИСУНКИ
Рисунок 1, Рисунок 2MM4A - Досрочное прекращение действия патента СССР или патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе
Дата прекращения действия патента: 29.10.2003
Извещение опубликовано: 10.07.2008 БИ: 19/2008
