Способ получения пептидов

 

Изобретение касается пептидов, в частности соединений общей ф-лы H-tyR-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-ThR-AsN- -SeR-TyR-ARg-Lys- R j-Leu-Gly-GlN-Leu- -Seh-Ala-ARg-Lys-Leu-Leu-GlN-Asp-Ile- -Met-Rjg-ARg-GlN-Gly-Glu-Glu-ARg- . -AsN-GlN-Gly-GlN-Gly-Ala-R -Val-ARg- -Ley-Y, где Y - OH или NH,; R,, j Val или He; - SeR или AsN,- ,- ARg или Lys, которые обладают способностью прокотировать выделение гормона роста, что может быть использовано в ветеринарии. Цель - создание новых более доступных и менее токсичных пептидов. Их синтез ведут из замещенного группой Вое лейцина, который связывают с метилбензгидриламиновой смолой (МБГАС) или хлорметилированной смолой (из расче-га 1 ммоль аминокислоты на 1 г смолы) в среде хлористого метилена и/или диметилформамида. Затем удаляют Вос-группу и к полученному Leu-полимеру присоединяют аминокислоты в необходимой последовательности. Получают пептидную смолу общей ф-лы X,-TyR(X2,)-Ala- -Asp(X3)-Ala-Ile-Phe-ThR(Xj-AsN-SeR (X5-)-TyR(X2)-ARg(X5)-Lys(,X)-R 5-Leu- -Gly-GlN-Leu-SeR(X4)-Ala-ARg(Xy)- -Lys(Xb)-Leu-Leu-GlN-Asp(X,)-Ile-Met- -Rj(Xd)-ARg(X5)-GlN-Glu-GlN-Gly(X3)- -ARg(X5)-AsN-GlN-Glu(X3)-GlN-Gly- -Ala-R4, (Xy) или Xg - Val-ARgXXs)- Leu-X , где .R ,j , Rje R4, CM. ше, X, - Бос, Хг - 2,6-дихлорбензил, Х,- бензиловый эфир, бензил, тозил, Xg- хлорбензилоксикарбонил; -ОСНд-хлорметилированная смола или NH-МБГАС. В этой смоле отщепляют защитные группы и полимерный носитель С помощью в хлористом метилене с последующей обработкой HF в при сутствии анизола и/или метилзтилсульфида при (-20)-0°С. Новые пептиды в сравнении с природным пептидом РФГРТ(1-44)Ш обеспечивают 70%-ную активность при малой токсичности, причем указанный способ позволяет получать пептиды, вьщеляющие гормоны роста состава, характерного для определенного вида животных. СО см

СОЮЗ СО8ЕТСКИХ

СОЩУР ЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК

0Ю (11>

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н ПАТЕНТ

ГОСУДАРСТ8ЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ГО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ ИОТКРЫТИЙ (21) 3790663/23-04 (22) 27. 07. 84 (31) 527292; 541167; 585814 (32) 29, 08. 83; 12. 10. 83; 02. 03.84 (33) US (46) 07.09.88. Бюл. ¹ 33 (71) Дэе Салк Институт фор Биолоджикал Стадиз (US) (72) Питер Болен (СН),.Поль Эрнест

Бразо (СА), Фредерик Стефан Э ш, Николас Чай-Ван Линг, Вильям Бьюз

Веренберг и Роджер Ч,"рльз Луис Гуйллемин (US) (53) 547. 964.407 (088.8) (56) Химия полипептидов./Под редакцией П. Катсояниса, M. Мир, 1977; гл. XVI с. 368.

Патент США №- 3904594, кл. С 07 С 103/52, опублик. 1975.

Патент США № 4292313, кл. С 07 С 103/52, опублик. 198 1. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПЕПТИДОВ (57) Изобретение касается пептидов, в частности соединений общей ф-лы

Н-TyR-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-ThR-AsN-SeR-TyR-ARg-Lys- R, -Leu-Gly-G1N-Leu-Seh-Аlа-ARg-Lys-Leu-Leu-G1N-Asp-Ile-Met-R -ARg-G1N-Gly-Glu-Glu-ARgtS

-AsN-GlN-Gly-G1N-Gly-Ala-R -Чаl-ARg4t

-Ley-Y, где Y — ОН или NHz; R, — Val или Ile; Rze — SeR или. AsN; R4(— ARg или Lys, которые обладают способностью промотировать выделение гормона роста, что может быть использовано в ветеринарии. 1(ель — создание новых более доступных и менее токсич(59 4 С 07 К 7/10 А 61 К 37/02 ных пептидов. Их синтез ведут из замещенного группой Вос лейцина, который связывают с метилбензгидриламиновой смолой (11БГАС) или хлорметилированной смолой (из расче-.а 1 ммоль аминокчслоты на 1 г смолы) в среде хлористого метилена и/или диметилформамида. Затем удаляют Вос-группу и к полученному Leu-полимеру присоединяют аминокислоты в необходимой последовательности. Получают пептидную смолу общей ф"лы Х,-ТУК(Х ) -Аlа-Asp(Х )-Ala-I1е-Phe-ThR(X )-AsN-SeR (Х )-TyR(Xz)-ARg (Xs) -1.уз(Х )-R,>-Leu-

-Gly-G1N-Leu-SeR(Xq) /la-ARg(X )-1.уз(Х )-Leu-Leu-G1N-Asp(X )-Пе-MetRzь(Х4) АКИ(Х ) GIN Glu С1М Сlу(Хз)

-ARg (Х ) -AsN-G1N-Glu (Х >) -G1N-Gly-Ala-Rq> (Х ) или Х вЂ” Val-ARg(X )Leu-Х., где R, К ви R4,,см. вы-ше, Х, — В ос, Х вЂ” 2, б-дихлорбензил, X — - бензиловый эфир, Х4- бензил, Х— тозил, Хб- хлорбенэилоксикарбонил;

Х вЂ” -ОСН -хлорметилированная смола или ИН-MБГAС, В этой смоле отщепляют защитные группы и полимерный носитель с помощью CF>COOH в хлористом метилеve с последующей обраббткой НР в при», сутствии анизола и/или метилэтилсульфида при (-20)-0 С. Новые пептиды в сравнении с природным пептидом

РФГРТ(1-44)NHz обеспечивают 707"ную активность при малой токсичности, причем указанный способ позволяет получать пептиды, выделяющие гормоны роста состава, характерного для опре деленного вида животных.

142 3000

Изобретение относится к способ", получения пептидов — новых биологически активных соединений, которые могут найти применение в ветеринарии.

Цель изобретения — повышение доступности соединений пептидной природы, малотоксичных и обладающих свойством стимулировать высвобождение гормона роста гипофизом.

Пример 1. Синтез свиного

ГРФ (1-44) ОН формулы:

Н-,:Тир-Ала-Асп-.Ала-Иле-Фе-Тгр-Асн-Сер-Тир-Арг-Лиз-Вал-Лей-Гли-Глн-.Пей-Сер-Ала-Арг-Лиз-Лей-Лей-Глн-Асп-Иле-Мет-Сер-Арг-Глн-Глу-Гли-Гли-Арг-Асн — Глн-Глу-Глн-Гли-Ала-Арг-Вал-Арг-Лей-ОН проводят ступенчато, используя синтезатор пептидов Бекман

990 на хлорметилированной смоле, выпускаемой фирмой 1.аЪ.Systems Iac9 содержащий 0,9 мэкв Cl/г. Осуществляют присоединение БОК-Лей к смоле, 2э при этом замещается приблизительно (0„22 ммоль Лей на 1 r смолы. Все раствс1рители9 которые при этом используются, тщательно дегазируют путем барботирования инертным газом, предпочтительно гелием, чтобы быть увеЗО ренным в отсутствии кислорода, который может приводить к нежелательному окислению серы в Мет — остатке.

После снятия защиты и нейтрализации пептидную цепь строят шаг за 35 шагом на смоле. Связывание точно проводят в соответствии со схемой, приведенной в таблице. Для реакции связывания 1 MMQJIb

Вос-защищенной аминокислоты в хло- 40 ристом метилене используется на 1 r смолы плюс 1 экв 0,5 М дициклогексилкарбодегимида (ДЦКИ) в хлористом ме-1 тилене или 30%-ный ДМФ в хлористом метилене в течение 2 ч. Когда Apr 45 связан, используют смесь 10%-ного

ДМФ ":- хлористого метилена, Бензил (Бэл) используют в качестве защитной группы гидроксильной боковой цепи Сер и Trp. 2-хлорбензилоксикар- „.-:* бонил (2С1-Z) используют в качестве защитной группы боковой цепи Лнз.

Тозил (Tos) используют для защиты гуанидино-группы Apr и карбоксильная группа Глу или Асп защищена, как бен=-,:-, .зиповый эфир. Фенольная гидроксиль.ная группа Тир защищена 2,6-дихлорбензилом. В конце синтеза получают пептидную смолу следующего состава:

К, Тир (Х ) -Ала-Асп (Х )-Ала ИГ)е—-Фе-Trp (X4) Асн-Сер (Х ) -Тир (Х ) -Арг(Х6) -Лиз (Хт ) -Вал-Лей-Гли-Гл н-Лей-Сер (X ) -Ала-Арг (Х ) -Лиз (Х q) -Лей-Лей-Глн-Асп (Х >) -Иле-Мет-Сер (Х z ) -Apr(Х ) -Глн- Глн-Гли-Глу (Хз) -Apr (X 6)—

-Асн-Гли-Глу(Х ) -Глн-Гли — Ала-Арг (Х )—

-Вал-Арг (Х ) -Лей-Х» где Х, — Вок.

Х вЂ” 2,б-дихлорбензил, Х вЂ” бензиловый эфир;

Х4 Бэл

Х вЂ” Тос, Х. — 2С1-Z

Xs — -О-.СН -бензолполистирол смолистый носитель.

После окончания остаток Тир связывают со смолой, Вос-группу удаляют

45%-ной трифторуксусной кислотой в хлористом метилене (ТФУ в СН С1 ).

Для расщепления и снятия защиты с ос:тавшейся защищенной системы пептицсмола, пептид обрабатывают 1,5 йп анизола, 0,25 мп метилэтилсульфида и

10 мп фтористого водорода (HF) на

1 r пептид-смола при -20 С за полчао са и при О С за полчаса. После удаления HF при высоком вакууме остаток смола-пептид промывают попеременно сухим диэтиловым эфиром и хлороформом, и пептид затем экстрагируют дегазированной 2 н. водной уксусной кислотой. При лнофилизации уксуснокислого экстракта получают белый пушистый материал.

Расщепленный, лишенный защиты, пептид затем растворяют в 30%-ной уксусной кислоте и подвергают мелкозернистой гель-фильтрации, используя фильтр Сефадекс G-50.

Затем пептид дополнительно очищают с помощью CM-32 карбоксиметилцеллюлозной катионообменной хроматографии (1,8 х 18 см, V,„, 50 мп), ис.. альзуя вогнутый градиент, вызываемый введением по каплям 1 л 0,4 М NH40Àö9 рН 6 5 в смешивающую колбу, содержащую 400 мл 0,01 М NH ÎAö9 рН 4,5.

Окончательн ю очистку проводят9 используч распределительную хроматографию на Сефадексе G 50 с мелкозернистым носителем (Pharmacia) с н-БуОН".

31ОН . Пиридин. 0 9 2% н. NHфОАЦ (1 . 1 . /) астворительной системой. Хроматографические фракции тщательно контролируют тонкослойной хроматографией (т.с.х) и только те фракции, которые

1423000 оказывались существенно чистыми, отбирают.

Пептид свиной ГРФ (1-44) NH (с Д (С=1, в 17-ной уксусной кислоте)

64,2 «+ +1, выход 395,2 мг (из 6 г смолы получено 9,5 r пептидной смолы и 395,2 мг пептида).

Синтез повторяют, используя МБГА смолу, чтобы получить тот же пептид, имеющий амидированный С-край.

Пептид свиной ГРФ (1-44)ОН:(<) (5=1 в 17.-ной уксусной кислоте)

66,2+1, выход 704,4 мг (из б г смолы получено 9,80 г пептидной смолы) .

Пример 2. Синтез бычьего ГРФ (1-44) формулы Н-Тир-Ала-Асп-Ала-ИлеФен-Тре-Асн-Сер-Тир-Арг-Лиз-Вал-ЛейГли-Глн-Лей-Сер-Ала-Арг-Лиз-Лей-ЛейГлн-Асп-Иле-Мет-Асí-Apr-Глн-Глн-ГлиГлу-Арг-Асн-Глн-Глу-Глн-Гли-Лла-ЛизВал-Арг-Лей-NH проводят постадийно с применением пептидного сингезатора

Бекмана 990 и 6 г смолы МБГА. Реакцию сочетании Вос-Лей с молекулой этой смолы проводят в течение 2 ч в хлористом метилене с использованием трехкратного избытка Вос-Лей и СС в качестве активирующего агента, в результате чего происходит замещение приблизительно C 2-0,6 ммоль Лей на каждый 1 r смолы, связанной амидной связью с аминогруппами смолы

МБГА. Все используемые растворителя тщательно удаляют барботированием инертным газом, предпочтительнее гелием, с целью обеспечить отсутствие кислорода, который мог бы вызвать нежелательное окисление серы в Мет-остатке.

После удаления защитных групп и нейтрализации на молекуле смолы шаг за шагом строят пептидную цепь. Операции сочетания, удаления защитных групп и нейтрализации проводят как . описано в примере 1.

Для реакции сочетания используют по 1 мюль Вос-защищенной аминокислоты в хлористом метилене на каждый

1 r смолы плюс по 1 экв 0,5-М DCC1 в хлористом метилене или 307 ДМФ в хлористом метилене, продолжительность реакции 2 ч. В реакции сочетания аргинина используют смесь 107

ДМФ с хлористым метиленом. В качестве группы, запрещающей боковую гидроксильную группу цепи в молекулах серина и треонина, используют бензин.

Для боковой цепи лиз:-.на в качестве защитной группы используют 2-.лорбензилоксикарбонил. Тозил используют в качестве защитной группы гуанидиновой группы аргинина, а кар. 5 боксильные группы глутаминовой и аспарагиновой кислот защищают в виде BZ1-эфира. Фенольную гидроксильн ю груп. у тирозина защищают 2,6-дихлорбензилом. По завершении синтеза пол,.чают продукт следующего соста .а:

Х -Тир(Х )-Ала-Асп(Х )-Лла-ИлеФен-Тре(Х4)-Лмн-Сер(Х )-Тир (Х )Apr(Х )-Лиз(Х )-Вал-Лей-Гли-Глн-ЛейСер(Х ) -Ала-Лрг(Хe)-Лиз(Х7) -Лей-Лей

Глн-Асп(Х )-Иле-Мет-Асп-Асн-Арг(Xe)—

Глн-Глн-Гли-Глу (Х ) -Арг (Xe) -Лсн-ГлнГлу (Х ) -Глн-Гли-Ала-Лиз (Х. ) -Вал-Ар г(Х ) -Лей-Н-МБГА-полистирольный поли6

20 мерный субстрат, где Х, — Вос;

X — 2,б-дихлорбензил;

Х вЂ” бензиловый эфир

Х4 В21

25 Х вЂ” В-1, Х вЂ” Tos"

6 Ф

2Cl-z.

После конечного сочетания остатка тирозина с молекулой смолы Вос-группу удаляют с использованием 457-ного

ТГФ в хлористом метилене с получением

19,4 r системы пептид-смола. С целью отщепления и удаления блокирующих групп от защищенной системы пептидсмола 10 г этой последней обрабаты35

Ch вают 10 мл анизола,2,5 мл метилэтилсульфида и 90 мл фтористого водорода при температаре -20 С в течение поо лучаса и при температуре 0 С в тече40 ние также получаса. После удаления фтористого водорода в глубоком ваку уме смоло-пептидный остаток промывают попеременно сухим диэтиловым эфиром и хлороформом, а затем пептид экстрагируют дегазированным водным

2 н. раствором уксусной кислоты. В результате лиофилизации уксуснокислотного экстракта получают белый рыхлый материал.

Далее отщепленный и освобожденный от защитных групп пептид растворяют в 307-ной уксусной кислоте и подвергают фильтрованию с использованием тонкодисперсного геля Сефадекс С-50.

Затем пептид подвергают дальнейшей очистке катионообменной хроматографией с использованием карбоксиметил.целлюлозы СМ-32 (1,8 х 18 см; объем слоя 50 мл) с применением вогнутого

423000

3 ä

40 1 д0

5 .1 градиента,который создают прикапыванием 1 л 0,4 М раствора ацетата аммония с величиной рН, равной 6,5, в:,.смесительную колбу, в которой содержится 400 мп 0,01М раствора азота аммония при величине рН,- равной 4,5.

Конечную очистку проводят с применением распределительной хроматографической обработки на тонкодисперсной подложке Сефадекс С-50 (Pharmacia) с помощью растворительной смеси н-бутанола с этанолом, пиридином и 0,2% н. уксусной кислотой в соотношении 4:1:

: 1 :7. Хроматографические фракции тщательно проверяют тонкослойным жидкостным хроматографическим аналиJ зом, объединяя только те фракции, котсфые характеризуются существенной степенью чистоты., Выход бычьего ГРФ (1-44) NH 261 мг (из 3 г смолы),fgJ" (C=1, в

17,-ной уксусной кислоте) -64,0+1., Используя. хлорметилированную смолу1, получают бычий ГРФ (1-44) ОН с вьгходом 128 мг (из 1 г смолы), (оЛд (С11, в 1%-ной уксусной кислоте

-64, 0+1.

Пример 3. Синтез овечьего

ГРФ (1-44) NH формулы:

Н-Тир-Ала-Асп-Ала-Иле-Фе-Тр-Асн-СерТир-Apr-Лиз-Иле-Лей-Гли-Гли-Лей-СерАла-Арг-Лиз-Лей †Л-Глн-Асп-Иле-МетАсп-Арг-Глн-Глн-Гли-Глу-Арг-Асн-ГлнГлу — Глн-Гли — Ала-Лиз-Вал-Apr-Лей-NH.о проводят ступенчато, используя син-:eçàòîð марки Бекман 990 и МБГА смолу, как указывалось в примере 2. В

:;. нце синтеза получают пептидную сМо лу следующего состава:

Х, -Тир (Хг ) — Ала-Асп (Х ) -Ала-Иле-ФеТгр(Х4)-Асн-Сер (Х5)-Тир(Х ) — Арг(Хб)—

Лиз (Хг ) -Иле-Лей-Гли-Глн-Лей-Сер (X<)Ала-Арг (Х ) -Лиз (Х ) -Лей-Лей-Глн-Асп(Х ) -Иле-Мет-Асн-Арг (Х ) -Глн-Глн-ГлиГлу (Х ) -Арг (Хд)-Асн-Глн-Глу (Х >) -ГлнГли-. ла-Лиз (Хг) — Вал-Арг (Х ) -Лей-Х, где X< — Бок, Х вЂ” 2,6-дихлорбензил, X — сложный бензиловый эфир;

Х вЂ” Б эл, Х вЂ” Бэл

Х вЂ” Тос, Х вЂ” 2Cl-Z " т У

Х вЂ” NF.-МБГА смолистый носитель, Ь

После завершения синтеза остаток пр соединяют со смолой, Бок-группу .даляют 45% ТФУ в СН Clг.Расщепление снятие защиты оставшейся защищенной

cr стемы пептид-смола проводят как указывалось в примере 2. Расщепленный и лишенный защиты пептид растворяют в 30%-ной уксусной кислоте, подвергают мелкозернистой гель-фильтрации с помощью Сефадекс G-50, катионообменной хроматографии и в заключение распределительной хроМатографии, как указывалось в примере 1. Выход овечьего ГРФ (1-44) NH ггг

197 мг (исходя иэ 3 г смолы), сг-)в (C=i, в 1%-ной уксусной кислоте)

-62,0+1.

Синтез повторяют, используя хлорметилированную смолу„чтобы получить такой же пептид, имеющий свободный кислотный С-край, следуя процедуре, описанной в примере 1.

Выход овечьего ГРФ (1-44) ОН

186 мг (исходя из 1 г смолы).(

-64,0+1.

Проведены биологические испытания синтезированных пептидов.

Определена эффективность этих пептидов при освобождении гормона роста в анализах in vitro. Опыты провобрились с гипофизарной клеткой. Исполь1 зуемые культуры включают клетки гипофиза крысы, удаленного предварительно за 4 или 5 дней. Инкубацию с веществом, подлежащим испытанию, проводят в течение 3-4 ч и аликвоты культуральной среды удаляют и абраба=тывают таким образом, чтобы измерить содержание в иммунореактивном ГР с помощью хорошо разрешимого радиоиммуноанализа, Результаты этих сравнительных испытаний показывают, что в эквимолюрных отношениях пептид:

I свиной ГРФ (1 44) NH, где

Вал, R> - Cep; R« — Арг, имеет внутреннюю .биологическую активность природного пептида РФГРГ (1-44) NH .

II бычьей ГРФ (1-44) NH, где л R  Асн; к, — Лиз овечьего ГРФ (1-44) МНг, где R»- Иле;

R — Асн R, — Лиз, имеют активность, составляющую 70% от активности природного пеп -яда РФГРГ (1-44) NH

Способы относятся к малотаксичным веществам.

Испытания пептидов в кислой форме показали, что они обладают близкой биологической активностью.

Проведенные опыты in vivo подтвер— дили, что пептиды, полученные в условиях описываемого способа, могут

1.4 2 10 ) 1

29.08.83 при R, — Val; Rzs- SeR; R4< — ARg.

12.10.83 при К,> — Val; К вЂ” AsN; R4< — Lys.

02.03.84 при R,> — Пе;.К вЂ” АзМ R4< Lys.

СН С1 промывка (2 раза) 0,5

507.-ная трифторуксусная кислота +

+ 57-ный t,2-этандитиол в CHzCIz (1 раэ) 0,5

507-ная трифторуксусная кислота +

+ 57 1,2-этандитиол в СН С1 (< раз) 20

0,5

СН Cl промывка (3 раза)

CH 0H промывка (2 раза) 0,5 быть отнесены к категopuu иалоток сичных соединений.

Предлагаемый способ позволяет получать новые биологически активные соединения — близкие аналоги по структуре и действию к природным соединениям, но более доступные. Синтез таких соединений позволяет получать пептиды .с последовательностью аминокислот фактора, высвобождающего гормон роста, состава, характерного для определенных видов животных.

Таким образом, осуществление предлагаемого способа делает доступным синтетические варианты природных гормонов, что позволяет вводить в организм разных животных соответствующие их виду синтетические гормоны для достижения конкретных целей. формула и э о б р е т е н и я

Способ получения пептидов общей формулы I

Н-TyR-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-ThR-AsNSeR-TyR-ARg-Lys-К< -Leu-Cly-G1N-LeuSeR-Alа-ARg-Lys-Leu-Leu-GlN-Asp-I1eMet-К -ARg-G1N-Gly-Glu-Glu-ARg-AsNGlN-Г1у-G1N-G1y-А1а-R„,-Val-ARg-Ley-У, где Y — ОН или ИН

К, — Val или Iie;

Rzs — SeR или AsN;

R4< ARg или 1уэ отличающийся тем, что ,нно,тят во взаимодействие 1 ммоль

Вос-I.eu с 1 r МНУ или хлорметилированной смолы в хлористом метилене, или лиметилформамиде, или их смеси, удаляют Вос- защиту и к полученному

Leu-полимеру присоединяют оставшиеся аминокислоты в последовательности, отвечающей общей формуле I, полученное соединение общей формулы II

Х,-TyR(Xz)-Ala-Asp-(Х )-Аlа-Ile †PheThR(X„)-AsN-SeR(X )-TyR(X ) — ARg(X )Lys (X ) -R, -Leu-G1 у-G1N-Leu-SeR (X )—

Ala-ARg (Х ) -Lys (X )-Leu-Leu-G1N-Asp (Х >) -I le-Met-Rzq (Х <) -ARg (Х ) -G1N-G1NGiy-G1u(X 3) -ARg (Х )-AsN-С1К-Glu (Х )—

G1N-Gly-Ala-R4<(Х, или Х) — Val-ARg (Х ) — Leu-X где Х, — Вос;

Х вЂ” 2,6-дихлорбензил;

Х вЂ” бенэиловый эфир;

Х вЂ” бенэил, Х вЂ” тозил;

25 Х вЂ” хлорбензилоксикарбонил, Х7 — -OCHz- хлорметилированная смола, NHMBI A, деблокируют и отцепляют полимер-носитель с использованием трифторуксусной

g0 кислоты в хлористом метилене с последующей обработкой полученного продукта фтористым водородом в присутствии аниэола, метилэтилсульфида или их смеси при 0 — 20 С. о

Приоритет по признакам:

Продолжение s-абпицы

1423000

1 I

10%-ный триэтиламин (Эr N) в СН С1 нейтрализация (2 раза) 0 5

СН ОН промывка (2 раза) 0 5

10%-ный триэтиламин (ЭтзМ) в СН С1 нейтрализация (2 раза) 0,5

СН ОН промывка (2 раза)

СН С1, промывка (2 раза) 0 5

0,5

4.

Бок-аминокислота (1 ммоль/г смолы) плюс эквивалентное количествоо дициклог ексилкарб одиимида (ДЦК) в CHICLE

120

СН С1 промывка (1 раз) 0 5

50%-ный диметилформамид в СН С1 (промывка.2 раза) 0,5

10%-ный триэтиламин (Эт. N) в СН С1 промывка (1 раз) 0 5

СН ОН промывка (2 раза)

СН С1 промывка (2 раза) 0 5

0,5

25%.-ный ангидрид уксусной кислоты ,в СН Cl (2 мг/л смоль .) 20

СН Cl промывка (2 раза) 0,5

СН ОН промывка (2 раза) 19

0 5 Ф

Для связывания Лсн и Глн, 1„13б M избыток 1-гидроксибензотриазола (ГОБТ) включен на этой стадии.

Составитель В.Волкова

Редактор Н.Гунько Техред Л.Сердюкова Корректор Л.Пилипенко

Заказ 4443/59 Тираж 348 Подписное

ВНИИЛИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб,, д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, r, Ужгород, ул. Проектная, 4 ф