Способ выявления возбудителя при гнойно-воспалительных процессах

 

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано при бактериологической диагностике гнойно-воспалительных заболеваний.- Цель изобретения - повышение точноети дифференциации зтиологически значимых микроорганизмов от микроорганизмов-ассоциантов. Для осуществления способа исследуемый материал высевают на питательные среды, вьщеляют чистые культуры. Отбирают грамотрицательные микроорганизмы и определяют у них антКлизоцимную активность. Если уровень последней достигает 6 мкг и вьше, данный микроорганизм оценивают как возбудитель.: Далее идентифицируют культуры, определяют вид микроорганизма и назначают соответствующрв лечение заболевания. 1 табл. а (Л с

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

„„SU„„1449587 А 1 (51) 4 С 12 g 1/04

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

IlO ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМ 8,. р g:., ПРИ ГКНТ СССР ":42Е ",,ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ

К А ВТОРСНОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4262793i 28-13 (22) 16.06.87 (46) 07.01.89. Бюл. № 1 (71) Оренбургский государственный медицинский институт

- (72) Л.С.Зыкова, С.И.Керашева, О,Л,Чернова, О.В.Бухарин, Д.Г.Дерябин, А.П.Луда и Б,Я.Усвяцов (53) 576.8.093. 1 (088.8) (56) Унификация лабораторных методов исследования: Сборник. - M,: Медицина, 1980, с.70-85. (54) СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ ВОЗБУДИТЕЛЯ

ПРИ ГНОЙНО-ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ПРОЦЕССАХ (57) Изобретение относится к области медицины и может быть использовано при бактериологической диагностике гнойно-воспалительных заболеваний:

Цель изобретения — повышение точнос ти дифференциации этиологически значимых микроорганизмов от микроорга« низмов-ассоциантов. Для осуществления способа исследуемый материал высевают на питательные среды, выделяют чистые культуры. Отбирают грамотрицательные микроорганизмы и определяют у них антйлизоцимную активность.

Если уровень последней достигает

6 мкг и выше, данный микроорганизм оценивают как возбудитель..Далее иден. тифицируют культуры, определяют вид микроорганизма и назначают соответстф вующее лечение заболевания; 1 табл.

1449587

Изобретение относится к медицине и может быть использовано при бактер ологической диагностик:е гнойновоспалительных заболеваний.

Цель изобретения — повышение то:-сНС>сти дифференциации этиологически значимых микроорганизмов от микроорганизмов-ассоциантов.

Пример 1,. При бактериологи.= ч ском исследовании мочи у больной м тодом количественных разведений о наружены колонии двух типов: колои первого тип" >2 количестве

4 микр,кл./мл мочи, колонии второтипа в количестве 5 10 микр.кл./мл чи. Низкие показатели бактериурии позволяют подтвердить участие выденных микроорганизмоь H развитии елонефрита. Через 18 ч !ia скошен- 20 м агаре получают чистые культуры колоний обоих тинов. При микроскоровании обе культуры грямотрицальные палочки. На этом =тапе устя-вления этиологически зlia÷èìoãо . 25 н

1 т н кроорганизмя применяют метод опред ления у культур антилизоцимной акТ1свности. Из суточных агаровых кульс тур исследуемых микробов первого и второго типов готовят взвеси ня ф >сффтном буфере рН 6.,2 с оптической п> отностью 0,05, определяемой на

ФфК-56N. К 1 мл каждой .::робы исследуемой микробной взвеси добавляют и 1 мл раствора лизоцима в концен, ) > т ации 20 мкг/мл, так что конечная к нцентряция лизоцимя в пробе состав-Jl ет 0 мкг /мл. Смес» !2brli»a!o Y

1 v npH 37 С и з" òåì центрифугируют п1 и 6000 об/мин 5 мин и отделяют над- 40

ОЮадочную жидкость. K 0...6 мл надосадс>чной жидкости из каждой пробы добавляют по 0,4 мл фосфатного буфера и по 2 мл взвеси индикаторной культ ры микрококка, предварительно подB.tpãíóòcгО холодовому шоку", Пробы пс>мещают в термостят,. выдерживают

1Й мин при 37 С и затем определяют ойтическую плотность. По калибровоч-: нс>й кривой определяют остаточный лизс>цим в пробах..

В пробе культуры первого типа кон-. цйнтрация остаточного лизоцима

7 мкг, т.е. ее антилизоцимная актигнс>сть равна 3 мкг (10-7=3), а в про.>5 бс> культуры второго типа остаточный лйзоцим не определялся, т.е. ее антилизоцимная активность равна i0 мкг.

Пс> предлагаемому способу оценки вторяя культура оценена кяк истинный возбудитель пиелонефритa, первого типа — как представитель транзиторной микрофлоры. На следующие .сутки при исследовании биохимических свойств культура второго типа идентифицирова"На как Ргoteus miral>ilis, а первого .Нпа — la«Kscherichia col i. В последующем этиологическая роль протея подтверждена повторностью его выделения иэ мочи больной и в РПГЛ с парными сыворотками, а контаминация мочи эшерихиями докязяня Отрицятельным результатом РПГА и отсутствием выделения F,.coli. при трехкратном бактериологическом исследовании лочл, Пример 2. Из ожоговой раны больного при первом бактериологическом исследовании выдепены двя ассоциантя — вульгарный протей с антилизоцимной активностью 10 мкг и конценс » трацуц и в 10 кое/мл и к-,тшечная па» лочкя с янтилизоцииной яктивнО стью

1 мкг и iñ oí öeí òðaöèeé 10 кое /мп, При послецующем трехкратном бактериологическом исследовя:нии с интервалом в 5 дней протей определен во . всех исследованиях. Концентрация кишечной -:алочки в исследуемом материале быс-..ро уменьшалась >: при третьем псследовя.1ни этот вид бактерий не определ -.лся. Следовательно. возбудителем данного гнойно "восп;-..чительного процесса является штамм в1-:льгарного протея.

П р и и е р 3. Из ожоговой раны

60льного при бйктепиологическом ис" следОвании выделены д =.я яссоциянтя мирябипьный протей с антилизоцимной активностью 9 мкг и клебсиелла пневмонии с антнлизоцимной активностью

3 мкг„ При. последующих бактериологических исследованиях концентрация клебсиелл уменьшается. В тс же время бактериальная обсемененность очага протеем нарйстает, дости1 нув к третьему дню 10 кое/мл по сравнению с исходной величиной 10 кое/мл. Это подтверждает этиологическую роль мирабельного протея.

Сравнительная характеристика ме";.одов выявления истинного возбудителя гнойно-воспалительных заболеваний представлена в таблице.

Способ может быть использован для дифференциации возбудителя .от существующей микрофлоры при стафилококковом бяктерионосительстве.

1449587 фе кции — пр отей, эшерихии, псевдомонады и др.

18

607. + 10,9

78K + з,8

907. + 6,7

Пиелонефритыэшерихии

50

967 + 2,7

Пример 4. У больного сахарным диабетом со слизистой носа при лосеве на желточно-солевой агар методом серийных разведений обнаружены колонии двух типов: первого типа — круглые, выпуклые с палевым пигментом и ареолом лецитовителлазной активности в количестве 10 кое/тампон, второго

4 типа — круглые беспигментные, без ареола лецитовителлазы в количестве

10 кое/тампон, Через, 18 ч инкубации на скошенном arape получены чистые культуры первого и второго типов. Из суточных агаровых культур готовят взвеси на фосфатном буфере (pH 6,2) с оптической плотностью 0 05. 1 мл каждой пробы микробной взвеси смеши- ° вают с 1 мл раствора лизоцима в концентрации 20 мг/мл. Смеси инкубируют в термостате 1 ч и затем отделяют надосадочную жидкость, содержащую неинактивированный лизоцим, центрифугированием в течение 5 мин при

6000 об/мин. К 0,6 мл надосадочной жидкости из каждой пробы добавляют по 0,4 мл фосфатного буфера и по 2 мл взвеси индикаторной культуры микрококка (оптической плотности 1,2). После инкубации в течение 10 мин при о 37 С определяют оптическую плотность проб на ФЭК-56И в кювете шириной

5,0$ мм при зеленом светофильтре.

Остаточный лизоцим в пробах определяют по калибровочной кривой.

По результатам исследования обнаружено, что концентрация остаточного лизоцима в пробе культуры первого типа 6 мкг, т.е. антилизоцимная ак" тивность культуры первого типа 4мкг, а в пробе культуры второго типа концентрация остаточного лизоцима 7 мкг, т.е. ее антилизоцимная активность

3 мкг. При изучении свойств выделен-. ных культур (плазмокоагулаза, анаэробная ферментация маннита и др,) культура первого типа идентифициро- " вана как золотистый стафилококк, а второго типа — как эпидермальный ста5 филококк. Таким образом, культура первого типа (золотистый стафилококк) расценена как истинный, резидентный, носительский штамм, а эпидермальный стафилококк — как представитель по1О сторонней микрофлоры. Резидентный ха" рактер бактерионосительства золотистого стафилококка был подтвержден многократными повторными высевами со слизистой носа идентичных стафилокок1 ков (фаготип 3 С), при этом титр бактериальной обсемененности возрастал, достигая 10 -10 кое/тампон.

Таким образом, использование способа позволит повысить точность дифференциации возбудителя, что в свою очередь позволит выбрать эффективные лечебные препараты и ускорить выздоровление больных, кроме того, использование способа позволит отдифферен25 цировать возбудитель от сопутствующей микрофлоры при стафилококковом бактерионосительстве, что позволит проводить .целенаправленную санацию бактерионосителей.

ЗО

Формула изобретения

Способ выявления возбудителя при гнойно-воспалительных процессах путем

35 просева исследуемого материала на питательные среды с последующим выделением и идентификацией чистых культур, отличающийся тем, что, с целью повышения точности дифференци4 ации этиологически значимых микроорганизмов от микроорганизмов-ассоциантов, у выделенных грамотрицательных микроорганизмов определяют антилизоцимную активность и выявляют возбудитель при уровне антилизоцимной

45 активности 6 мкг и выше.