Способ получения олигофуростанозидов
Изобретение относится к биотехнологии, касается способа получения олигофуростанозидов. Цель изобретения увеличение выхода целевого продукта и ускорение способа. Для этого лиофильно высушенные клетки культуры ткани Dioscorea deltoidea экстрагируют водой в соотношении 1 10 20 2 3 ч. Осадок отделяют центрифугированием, экстракцию повторяют. К объединенному надосадку добавляют сульфат аммония до полного насыщения и выдерживают 30 мин, что приводит к осаждению как высоко-, так и низкомолекулярных гликозидов. Полученный осадок обрабатывают 5 6 раз 96%-ным этанолом, осадок отделяют, промывают этанолом, надосадочную жидкость упаривают до конца в роторном испарителе. В остатке олигофуростанозиды с чистотой 65% Полученный препарат повторно обрабатывают несколькими порциями 96%-ного этанола, отделяют осадок, упаривают. Чистота препарата 80% Выход олигофуростанозидов 50% от теоретического.
Изобретение относится к биотехнологии, а именно к способом получения олигофуростанозидов. Цель изобретения увеличение выхода целевого продукта и ускорение способа. Способ осуществляют следующим образом. Лиофильновысушенные клетки культуры ткани Dioscorea deltoidea экстрагируют водой в соотношении 1:10-20 в течение 2-3 ч. При соотношении, меньшем чем 1:10, не происходит полного выделения гликозидов, а соотношение, большее чем 1:20, не приводит к дальнейшему увеличению количества гликозидов в экстракте. Осадок отделяют центрифугированием, экстракцию повторяют. К объединенной надосадочной жидкости добавляют сульфат аммония до полного насыщения и выдерживают 30 мин. При этом неожиданно оказалось, что метод высаливания, широко используемый для выделения белков, являющихся высокомолекулярными соединениями, приводит и к осаждению низкомолекулярных гликозидов. Полученный осадок обрабатывают 5-6 раз 96%-ным этанолом, осадок отделяют, промывают этанолом. Надосадочную жидкость упаривают до конца в роторном испарителе, в остатке олигофуростанозиды. Чистота полученного препарата 65% Полученный препарат повторно обрабатывают несколькими порциями 96%-ного этанола, отделяют осадок, упаривают. Чистота препарата 80% Выход олигофуростанозидов составляет 50% от теоретического. Для работы использована культура клеток Dioscorea deltoidea Wall, штамм ИФР-ДМ-0,5, продуцирующая стероидные сапонины с агликоном диосгенином. Штамм депонирован в специальной коллекции культур клеток растений Всесоюзной коллекции клеточных культур в ИФР под N 6. П р и м е р 1. 5 г лиофильновысушенных клеток культуры ткани Dioscorea deltoidea экстрагируют 50 мл воды при постоянном перемешивании в течение 2 ч, центрифугируют 15 мин при 5000 об/мин. Осадок экстрагируют повторно 50 мл воды и центрифугируют в тех же условиях. Содержание олигофуростанозидов в объединенной вытяжке, определяемое по цветной реакции с реактивом Эрлиха, равно 350 мг. К объединенной вытяжке (100 мл) добавляют сульфат аммония до полного насыщения (71 г). Выдерживают 30 мин, затем центрифугируют 15 мин при 7000 об/мин. Осадок обрабатывают 96%-ным этанолом 6 раз по 15 мл и фильтруют в воронке Бюхнера с отсасыванием. Осадок на фильтре промывают этанолом (20 мл). Фильтрат отгоняют досуха в роторном испарителе. Выход фуростаноловых гликозидов в остатке составляет 250 мг. Чистота полученного препарата олигофуростанозидов составляет около 65% Осадок фуростаноловых гликозидов повторно обрабатывают 96%-ным этанолом (10 мл), фильтруют, упаривают. Выход олигофуростанозидов после вторичной обработки равен 210 мг (60% от теоретического). Чистота препарата составляет 80% П р и м е р 2. 5 л лиофилизированных клеток культуры ткани Dioscorea deltoidea дважды экстрагируют 100 мл воды, центрифугируют. Содержание олигофуростанозидов в суммарном экстракте равно 350 мг. Высаливание проводят, добавляя в экстракт объемом 200 мл 142 г сульфата аммония, центрифугируют. Дальнейшую обработку осадка проводят так же, как и в примере 1. Содержание фуростаноловых гликозидов составляет 295 мг, чистота препарата равна 62% Повторная обработка осадка 96%-ным этанолом повышает чистоту препарата до 78% Выход олигофуростанозидов равен 230 мг (65% от теоретического).
Формула изобретения
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ОЛИГОФУРОСТАНОЗИДОВ путем экстракции растительного сырья Dioscorea deltoidea с последующим выделением целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью увеличения выхода целевого продукта и ускорения способа, используют в виде культуры клеток штамм ИФР-ДМ-0,5, экстракцию проводят водой в соотношении 1 (10 20), к экстракту добавляют сульфат аммония до полного насыщения, осадок обрабатывают этанолом и из него выделяют целевой продукт.MM4A Досрочное прекращение действия патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе
Номер и год публикации бюллетеня: 23-2002
Извещение опубликовано: 20.08.2002
