Способ выделения паразитов из малых прудовиков для лабораторных исследований по н.ф.запорожцу

 

Изобретение относится к зоологии и паразитологии, а также к медико-биологическим моделям - лабораторным препаратам, и может быть использовано как наглядное пбсобие в учебно-методической и научно-исследовательской работе. Целью изобретения является выделение церкарий, ние адолескарий и вьшедение фасциоп при сохранении жизнеспособности ули- .ток. Малых прудовиков помещают в « раствор, содержащий 0,04-0,06% уксусной кислоты и 0,0002-0,0004% нитрита натрия. Вьдерживают в течение 9-12 ч. Получают церкаг ии. Улиток из раствора удаляют. Церкарий в растворе вьщерживают в течение 18-60 ч, Получают из церкарий адсшескарии, Раствор удаляют. В сосуд с адопескариями вносят фильтрат тканей печени. К последнему добавляют 4-10% натуральной желчи крупного рогатого скота . Адолескарий инкубируют более 1 ч при температуре 35-40 С. Получают живых фасциол из адолескарий. Малые прудовики остаются жизнеспособными. i (f

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

° y-.q

:" Р

"г,»

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

flQ ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21 ) 4041 290/30-1 5 (22) 24.03.86 (46) 15.03.89. Бюп. Ф 10 (71) Винницкий филиал Украинской сельскохозяйственной академии (72) Н.Ф.Запорожец (53) 594:576.8.094(088.8) (56),Котельников Г.А. Гельминтологические исследования животных и окружающей среды, M. Колос, 1984,с.162. (54) СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ ПАРАЗИТОВ ИЗ

МАЛЫХ ПРУДОВИКОВ ДЛЯ ЛАБОРАТОРНЫХ

ИССЛЕДОВАНИИ ПО Н.Ф.ЗАПОРОЖЦУ (57) Изобретение относится к зоологии и паразитологии, а также к медико-биологическим моделям - лабораторным препаратам, и может быть использовано как наглядное пособие в учебно-методической и научно-исследова1

Изобретение относится к зоологии и паразитологии, а также к медико- биологическим моделям - лаборатор ным препаратам, и может быть использовано как наглядное .пособие в учебно-методической и научно-исследовательской работе.

Цель изобретения - выделение церкарий, получение адолескарий и выведение фасциол при сохранении жизнеспособности улиток.

Способ заключается в том, что малых прудовиков помещают в двухкомпонентный раствор (состоит из уксусной кислоты при концентрациях 0,04-0,06Х и нитрита,натрия при концентрациях

„„SU„„1464991 А1 511 4 А 01 К 67/00, А 61 В 10/00 тельской работе. Целью изобретения является выделение церкарий, получение адолескарий и выведение фасциол при сохранении жизнеспособности ули.ток. Малых прудавиков помещают в раствор, содержащий 0,04-0,06Х уксусной кислоты и 0,0002-0,0004Х нитрита натрия. Вьдерживают в течение

9-12 ч. Получают церкарии. Улиток из раствора удаляют. Церкарии в растворе вьдерживают в течение 18-60 ч.

Получают иэ церкарий адолескарии.

Раствор удаляют. В сосуд с адалескариями вносят фильтрат тканей печени.

К последнему добавляют 4-10Ж натуральной желчи крупного рогатого скота. Адолескарии инкубируют более 1 ч о при температуре 35-40 С. Получают живых фасциол из адолескарий. Малые прудовики остаются жизнеспособными.

0 0002-0 0004X) и вьдерживают в течение 9-12 ч. Получают церкарии из организма улиток. Улитки с раствора CO удаляют, а церкарии в растворе вьдер- 1© живают на протяжении 18-60 ч. После о этого времени получают из церкарий адолескарий на внутренней поверхности сосуда (они прочно приклеиваются к поверхности сосуда) . Раствор удаляют. В сосуд с адолескариями вносят

3 смесь двух биологических жидкостей, вначале после измельчения тканей печени крупного рогатого скота и последующего отжимания печеночного фарша через 4 слоя марли и фильтрования полученной биологической жидкости

1464991 через обеэзоленный бумажный фильтр— получают сок. К последнему добавляют

4-10% натуральной желчи крупного рогатого скота. В итоге получают смесь

5 двух биологических жидкостей, которую используют согласно способу, помещают в термостат и инкубируют в течео ние не менее 1 ч при 35-40 С. После этого получают живых фасциол из адолескарий.

Пример 1. 2 малых прудовика выдерживают в двухкомпонентном растворе, состоящем из 0,04% уксусной кислоты и 0,0002% нитрита натрия, в течение 10,5 ч. Полученные церкарии в 5 чашках Петри в указанном раствоо р е вьд ерживают 3 9 ч при 18, С . В контроле церкарий от улиток не вьделено, а в опыте их выделено 75. Из этих церкарий получено 62 адолескарии.

Улитки остались живыми.

Пример 2. 2 улитки опьгга выдерживают в двухкомпонентном растворе, состоящем из 0,05% уксусной кисло- 25 ты и 0,0003% нитрита натрия. 2 малых прудовика вьдерживают в дистиллированной воде (контроль) . В контроле от улиток церкарий не получено, а в опыте их выделено 550. Из этого коли- 80 честна получено 490 адолескарий,.

Улитки остались живыми.

Пример 3. 2 малых прудовика (опыт) выдерживают в двухкомпонентном растворе, который состоит из 0,06%

ЗВ уксусной кислоты и 0,0004% нитрита натрия ° В опыте выделено 125 церкарий (улитки остались живыми) и получено из них 104 адолескарии, а в контроле соответственно О и О.

Пример 4, Улитки вьдерживают о в течение 9 ч при 18 С в двухкомпонентном растворе — О, 05% уксусной кислоты и 0,0003% нитрита натрия (опыт), а в контроле улитки — малый 45 прудовик — в воде. В опыте от улиток выделено 450 церкарий, из которых через 39 ч получено 420 адолескарий, а в контроле (улитки выдерживают в воде в течение .12,5 ч) О и О соответственно.

Пример 5. 2 малых прудовика выдерживают в двухкомпонентном растворе в течение 10,5 ч, а в контролев воде 12,5 ч. В опьгге получено 600 церкарий и 530 адолескарий, а в контроле соответственно О и О.

Пример 6. 2 малых прудовика

B двухкомпонентном растворе вьдерживают 12 ч. В опыте выделено 100 церкарий и получено 92 адолескарии. В контроле О и О соответственно.

Пример 7. Готовят 10 л двухкомпонентного раствора, который состоит из 0,05% уксусной кислоты и

0,0003% нитрита натрия. Верут 2 банки, емкость каждой 0,5 л, нумеруют их. В первую наливают 100 мл дистиллированной воды, а во вторую (опыт)—

100 мл указанного раствора. В оба сосуда помещают по 2 малых прудовика на 10,5 ч при 18 С. Получают церкарии (улитки после этого из сосудов удаляют), которые вьдерживают в двухкомпонентном растворе 18 ч. В контроле от улиток церкарий не вьделено, а в опыте их выделено 550. Из этого количества церкарий получено 510 адолескарий. Улитки остались живыми.

Пример 8. Аналогичен примеру 7, но здесь церкарии в двухкомпонентном растворе вьдерживают 39 ч.

В опыте вьделено от улиток 600 церкарий и получено 530 адолескарий, а в контроле соответственно О и О.

Пример 9. Аналогичен примеру 7, но здесь церкарии в двухкомпонентном растворе выдерживают 60.ч.

В опыте от 2 малых прудовиков выделено 600 церкарий, из которых получено 520 адолескарий, в контроле О и О соответственно.

Пример 10. Адолескарии в опыте инкубируют при 35 С (а в условном о контроле — 34 С) в составе смеси биологических жидкостей (7% желчь, в соке из печени) в течение 1 ч. В опыте из 92 адолескарий получено 51 фасциола, что составляет выход фасциол 55%, а в контроле соответственно 100 29 и 29.

Пример 11. Адолескарии инкубируют при 37,5 С (опыт), а в контроле (согласно примера 10) — при о

34 С. Из 106 адолескарий получено

102 фасциолы, выход которых составляет 96%, а в контроле 100,29 и 29 соответственно.

Пример 12 ° Адолескарии инку бируют в опытном сосуде при 40 С, а в контроле (см.пример 10) — при 34 С.

В опыте из 94 адолескарий получено

73 фасциолы, что составляет 78% выхода, а в контроле соответственно

100,29 и 29.

Пример 13. Чашки . Петри с ацолескариями в смеси биологических

Формула изобретения

5 14649 жидкостей инкубируют 1 ч при 37,5 (опыт), а в контроле 50 мин. В опыте из 110 адолескарий .получено 108 фасциол, что равно 98% выхода, а в контроле соответственно 120,0 и О.

Пример 14. Адолескарии инкубируют в течение 70 мин. а в контроле .50 мин. В контроле из 120 адопескарий получено 0 фасциол, что состав- 10 ляет 0% выхода, а в опыте 120,116 и 97 соответственно.

Пример 15. Адолескарии инкубируют при 37,5 С в течение 1 ч в смеси биологических жидкостей — 4% натуральной желчи крупного рогатого скота в соке печени. В контроле 3% желчи. В опыте из 110 адолескирий получено 89 фасциол, выход составляет 81Х, а в контроле соответствен- -p но 105,0 и О.

Пример 16. Адолескарии инкубируют в смеси биологических жидкостей — 7% натуральной желчи в соке из печени. Остальное - аналогично приме- 25 ру 15. В опыте из 120 адолескарий получено 118 фасциол, что составляет

98Х выхода, а в контроле 105,0 и О . соответственно.

Пример 17. Адолескарии инкубируют в смеси биологических жидкостей — 10% натуральной желчи в соке из печени. Остальное - аналогично примеру 15. В опыте из 120 адолескарий получено 118 фасциол, выход 98Х, а в контроле 105,0 и 0 °

Пример 18. Берут 1 кг печени от крупного рогатого скота, при помощи ножа режут ее на мелкие кусочки, которые дополнительно измельча- 40 ют при помощи мясорубки - получают. фарш из печени. Последний помещают в марлю, состоящую из четырех слоев, и руками тщательно отжимают — получают сок из печени. Далее берут мерный 45 цилиндр, вставляют в него стеклянную воронку, в которую помещают обеззоленный бумажный фильтр, и наливают сок печени. После фильтрования получают прозрачный красноватый сок. Бе- 50 рут 93 мл профильтрованного сока и к нему добавляют 7 мл натуральной свежей желчи крупного рогатого скота, перемешивают стеклянной палочкой. В итоге получают 7% раствор желчи в соке из печени, т.е. получают смесь двух биологических жидкостей. Ее используют для инкубирования адолескарий и получения из последних фасциол согласно способу.

Аналогичным образом готовят и дру" гие концентрации желчи в соке из печени, но при этом к соку добавляют 3 или 10% натуральной желчи согласно способу.

Применение параметров за пределами предлагаемых, или применение растворов уксусной кислоты (0,04-0,06%) и нитрита натрия (0,0002-0,0004%) не сочетанно по два, а раздельно по одному, не сопровождается получением положительного эффекта.

Предлагаемый способ позволяет на

100Х сохранить после экспериментов малых прудовиков жизнеспособными, дает возможность получать от улиток в лабораторных условиях неограниченное количество церкарий, адолескарий и фасциол, причем в нужное время.

Способ выделения паразитов из малых прудовиков для лабораторных исследований, включающий помещение малых прудовиков в раствор, о т л ич а ю шийся тем, что, с целью выделения церкарий, получения адолескарий и выведения фасциол при сохранении жизнеспособности улиток, малых прудовиков помещают в раствор, содержащий 0,04-0,06%. уксусной кислоты и 0,0002-0,0004% нитрита натрия, выдерживают в нем в течение 9-12 ч, выделившиеся церкарии с раствором переносят в другой сосуд и выдерживают в нем в течение 18-60 ч„после чего раствор удаляют, а выделившиеся адолескарии помещают в фильтрат тканей печени крупного рогатого скота, к которому добавляют натуральную желчь крупного рогатого скота при концентрации 4-10Х, и термостатируют о при 35-40 С в течение одного и более часов получения фасциол.