Способ определения чувствительности форм хвойных пород деревьев к воздействию ростстимулирующего препарата

 

Изобретение относится к области биологии и может быть использовано в лесном хозяйстве. Цель - повышение точности определения за счет возможности выявления генетически чувствительных форм. Для реализации способа хвою сеянцев сосны, семена которых перед посевом были замочены в растворе стимулятора роста растений, растирают в экстрагирующем буфере, выделяя водорастворимые белки. Эти белки подвергают электрофорезу в полиакриламидном геле, полученные спектры окрашивают на малатдегидрогеназу и малик-энзим, подсчитывают количество полос зимограмм и сравнивают с аналогичными данными, полученными в контроле, при этом форму относят к чувствительной, если количество полос достоверно возрастает по сравнению с контролем. 2 табл.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСН ИХ

РЕСПУБЛИН (19) (11) 702 5 А1

1 1) 4 А 01 С 7/00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н А BTOPCHOMY СВИДЕТЕИЬСТВУ

ГОсудАРстВенный нОмитет

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМ

ПРИ ГННТ СССР (21) 4179185/30-13 (22) 08.12.86 (46) 07.04.89, Бюп. 1) 13 (71) Институт химической физики

АН СССР и Лаборатория лесоведения

АН СССР (72) К.Д.Вишневецкая, Л.M.Апашева, В.А.Духарев, Ю.В.Кузнецов и Л,Д.Смирнов (53) 581. 192 ° 7 (088.8) (56) Авторское свидетельство СССР

N 1253509, кл. А 01 N 63/00, 1985 ° (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ ФОРМ ХВОЙНЫХ ПОРОД ДЕРЕВЬЕВ

К ВОЗДЕЙСТВИЮ РОСТСТИМУЛИРУ10111ЕГО ПРЕПАРАТА (57) Изобретение относится к области биологии и может быть использовано

Изобретение относится к области биологии и может быть использовано в лесном хозяйстве.

Целью изобретения является повышение точности определения за счет возможности выявления генетически чувствительных форм.

Хвою сеянцев сосны второго года, семена которых замочены перед посевом в течение 24 ч в растворе стимулятора роста растений, растирают в экстрагирующем буфере.

Затем проводят гель-электрофорез экстракта. Полученные гелевые пластины окрашивают на малатдегидрогеназу и малик-энзим, После инкубирования в лесном хозяйстве. Цель - повышение точности определения за счет возможности выявления генетически чувствительных форм. Для реализации способа хвою сеянцев сосны, семена которых перед посевом были замочены в растворе стимулятора роста растений, растирают в экстрагирующем буфере, выделяя водорастворимые белки. Эти белки подвергают электрофорезу в полиакриламидном геле, полученные спектры окрашивают на малатдегидрогеназу и малик-энзим, подсчитывают количество полос зимограмм и сравнивают с аналогичными данными, полученными в контроле, при этом форму относят к чувствительной, если количество полос достоверно возрастает по сравнению с контролем. 2 табл.

С:: в растворе краски на геле подсчитывают количество изоферментных полос, Пример 1. 200 мг хвои сеянцев сосны 2 года, семена которых перед посевом замочены в течение 24 ч в растворе дигидрохлорида 2-метил-4диметиламинометил-5-оксибензимидазола (препарат БИО-40) в концентрациях

1 (вариант I) и О, 1 (вариант II) мг/л, мелко режут, растирают в ступке на холоде (при t=-5 С) в 1,5 хп экстрагирующего буфера на основе трис-НС1 (рН 8,0) с добавлением аскорбиновой кислоты, цистеина, сахарозы, Твин-80, Затем экстракт центрифугируют при 10000 g в течение 30 мин.

1470235

Г Г

3,9 3,9 3,9

5,4 6,0 7,6

4,1 4,8 3,2

Малатдегидрогеказа

Малик-. энзим

2,7 2,7

3,6 5,8

2,4 3,0

2,5

4,0

2,3

Т а б л и ц а 2

Вес зоны охвоДлина хвои, мм

Вес корня, r

Количе- Количе- Вес

Диаметр ствола ство ство придаточных побегов придаточных у корневой шейки, мм ения, .г почек

1,52 О, 73

1,82 0,65

1,24 0,59

1,66 0,43

1,49 0,43

2,46 0,39

3,0 1,46

2,4 1,62

1,6 1,17

1,4 . 1, 36

0,8 0,83

2,6 1,42

1,8

2,3

2,2

3,1 70,7 1,0

3,1 80,3 1,2

2,8 93,9 2,2

2,8 103,2 3,2

2,7 107,3 2,6

4,2 109 6 1,8

22 659 24

2,1 73„8 2,8

27 81 9 16

145,2

176,8

164,8

159,6

160 О

210,6

100,6

105, 1

121, 2

Контроль

Контроль

Контроль

К экстракту добавляют 0,3 мл 60%ного раствора сахарозы, содержащего бромфенол, Экстракт подвергают вертикальному электрофорезу в полиакрил5 амидном геле с целью идентификации изоферментов. Первые 2 ч электрофорез проводят при напряжении 140 В, затем его повышают до 300 В, Для получения специфического окрашивания на малатдегидрогеназу гель инкубируют с малатом натрия, НАДФ, трис-НС1 (pH 8,0) на малик-энзим — с малатом натрия, НАД, трис-НС1 (рН 8,0), После получения специфического окрашивания под" считывают количество изоферментных полос. Контролем служит хвоя сеянцев сосны, замоченных перед посевом в воде в течение 24.ч, а затем высеянных на опытные делянки.

Среднее, число изоферментных полос в хвое экспериментальных групп сеянцев сосны приведено в табл.1.

Таблица1 25

Фермент Семья Вариант обработки препаратом

Контроль I II

Семья Вариант Высота обработки растенияэ мм

У сеянцев семьи 2 (особенно -при обработке семян препаратом в концентрации 0,1 мг/л) обнаружены самые значительные изменения изоферментного спектра хвои сеянцев в сравнении со спектром контрольных сеянцев. Так, например, среднее число изоферментных полос малик-энзима и малатдегидрогеназы в 1,2-2,0 раза выше, чем в контроле, что объясняется появлением новых зон активности ферментов.

При сравнительном анализе числа изоферментных полос малик-энзима и малатдегидрогенахы в хвое сеянцев семьи 2 с семьями 1 и 3 выявляются аналогичные закономерности.

Пример 2. Семена сосны после замачивания в течение 24 ч в растворе препарата БИО-40 в концентрациях 1 (вариант I) и 0,1 (вариант II) мг/л и высевают на опытные делянки, Контролем служат семена сосны, замоченные в воде, Экспериментальные исследования проводят на семьях полусибов. Измерение основных морфологических показателей проводят у двухлетних сеянцев сосны. Ошибка эксперимента не превышает 5%.

Результаты влияния дигидрохлорида

2-метил-4-диметиламинометил-5-оксибензимидазола на морфологические параметры двулетних сеянцев сосны приведены в табл,2, 1

1470235

Составитель А.Сизов

Редактор Н.Бобкова Техред Л.Сердюкова Корректор С.Черни

Заказ 1413/2 Тираж 618 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r.Óæãîðoä, ул. Гагарина, 101

Результаты свидетельствуют о наличии стимуляционного эффекта препарата, но величина его варьируется в разных семьях. Наиболее эффективен стимулятор роста для сеянцев семьи 2, особенно в варианте I. Так, например, в этом варианте высота растений составляет 1321, а диаметр ствола 144Х по отношению к контролю.

У сеянцев той же семьи 2 (при обработке препаратом в концентрации

О, 1 мг/л) обнаружены самые значительные изменения изоферментного спектра хвои сеянцев в сравнении со спектром контрольных сеянцев, а также аналогичные изменения у контрольных сеянцев семьи 2 по сравнению с контрольГ ными сеянцами из других семей, Таким образом, сеянцы сосны, наи20 более отзывчивые на действие стимулятора роста, имеют следующую структуру спектра изоферментных полос (в хвое); не менее 7 полос у малатдегид- » рогеназы и не менее 5 полос у маликэнэима, Формула изобретения

Способ определения чувствительности форм хвойных пород деревьев к воздействию ростстимулирующего препарата, включающий предпосевную обработку семян раствором ростстимулятора, отличающийся тем, что, с целью повышения точности определения за счет возможности выявления генетически чувствительных форм, из сеянцев на ранних этапах их развития выделяют водорастворимые белки, которые подвергают электрофорезу . в полиакриламидном геле, полученные спектры окрапывают на малатдегидрогеназу и малик-энзим, подсчитывают количество полос зимограмм и сравнивают с аналогичными данными, полученными в контроле, при этом форму относят к чувствительной, если количество полос достоверно возрастает по сравнению с контролем.