Питательная среда для накопления адгезивных антигенов к-99 еsснеriснiа coli

 

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано для накопления адгезивных антигенов К-99 эшерихи. Цель изобретения - повышение выхода биомассы и специфической активности целевого продукта. Для получения адгезивных антигенов культуру E.COLI выращивают на питательной среде, содержащей (г/л): гидролизат казеина 1,5-2,0

80-100 фильтрата культуральной жидкости пекарских дрожжей, полученной после 3-4-часового подращивания в водной среде при массовом соотношении дрожжей, глюкозы и NACL 10-15:1:1 в 100 мл воды, глюкозу 10-15

KH<SB POS="POST">2</SB>PO<SB POS="POST">4</SB> 1,35-1,38

NA<SB POS="POST">2</SB>HPO<SB POS="POST">4</SB> 1,0-1,1

очищенный агар-агар 26-30

остальное - водопроводная вода (рН среды 7,2-7,4). Специфичность антигена проверяют в реакциях агглютинации и маннозо-резистентной агглютинации с помощью электронной микроскопии.

СООЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

„.SU,» 1472495

6И,ИН

1 1;с г,;

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21 ) 4211979/28-13 (22) 17.03.87 (46} 15.04.89. Вюл. Р 14 (» ) Украинский научно-исследовательский ветеринарный институт (72) Е.Г.Павлов, Л.К.Волынец, О.П.Степанюк и К.P.Ñåìêî (53) 576.8.093.1(088.8) (56) J . "Infect. immunology", 1976, l3 р. 1369-1377, (54) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ НАКОПЛЕНИЯ АДГЕЗИВНЫХ АНТИГЕНОВ К-99 ESCEIF.BXCHXA СОЪ.Х (57) Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано для накопления адгезивных антигенов

К-99 эшерихий. Цель изобретения — по.вьппение выхода биомассы и специфи1 .Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано при изготовлении диагностических препаратов и производстве вакцин.

Цель изобретения — повьппение выхода биомассы и специфической активности целевого продукта.

Питательную среду готовят следующим образом.

Взвешивают компоненты среды, вносят их в колбу, наливают водопроводную воду до 1 л, помещают в водяную баню до момента расплавления агаранара. Устанавливают рН среды 7,2,7,4. Стерилизуют при 0,5 ати в течение 20 мин.

Фильтрат культуральной жидкости пекарских дрожжей, входящих в состав среды н качестве стимулятора ческой активности целевого продукта.

Для получения адгезинных антигенон культуру К, coli ныращпвают па питательной среде, содержащей (г/л) гидролизат казеи 1,5-2,0; 80-100 фильтрата культу-ральнойю жидкости пекарских дрожжей, полученной после

3-4-часового подращинания в водной среде при массовом соотношении дрожжей, гхпокозы и NaC1 10-15:1:l н

100 мл воды, глюкозу 10-15, КН РО

1,35-1,38 » Na HP0.< 1,0-1,1; очищенный агар-агар 26-30; остальное - водопроводная вода (pH среды 7,2-7,4).

Специфичность антигена проводят в реакциях агглютинации и маннозо-резисЖ тентной агглютинации с помощью электронной микроскопии.

2 роста, получают следующим образом.

100-150 r пекарских,трожжеи смешивают с 1 л водопроводной воды, подогревают до 23-25 С, к смеси добавляют 1 0 Г глюкозы и 1 0 Г xJIopHcTOI о натрия. Дрожжи подращинают в этой среде 3-4 ч и затем фильтруют через ватномарлевый фильтр. Полученный о фильтрат стерилизуют при 100 С в течение 20 мин и затем вводят н среду.

Использование питательной среды иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. Готовят среду, как описано, при этом компоненты среды берут B следующих количествах, г/л: гидролизат казеина 1,5; фосфорнокислый калий однозамещенный 1,35; фосфорнокислый натрий двузамещенный

1,0; глюкоза 10; очищенный агар-агар

3 147249

2б; фильтрат культуральной жидкости пекарских дрожжей, полученный описанным способом, 80 мл; вода водопроводная до 1 л.

Стимуляцию роста и увеличение на5 копления адгезивных антигенов определяют по плотности микробных тел в

1 мл смыва с агаровой среды при культивировании штаммов Е. coli с нали" чием пилей адгезии К-99. При культивировании штаммов Е. со11 на указанном варианте среды плотность микробных тел в 1 мл составляет 1,5l,б млрд.

Пример 2. Для культивирования продуцента используют питательную среду следующего состава, г/л: гидролиэат казеина 1,75; фосфорнокислый калий однозамещенный 1,36; фосфорнокислый натрий двуэамещенный 1,05; глюкоза 12,5; очищенный агар-агар 28; фильтрат культуральной жидкости пекарских дрожжей 90; вода водопроводная до 1 л. 25

Плотность микробных тел в 1 мл составляет 1,4-1,7 млрд.

Пример 3, Для культивирова" ния продуцента адгезивных антигенов используют питательную среду следу- 30 ющего состава, г/л: гидролизат казеина 2; калий фосфорнокислый однозамещенный 1,38; натрий фосфорнокислый двузамещенный 1,1; глюкоза 15; очищенный агар-агар 30; фильтрат культуральной жидкости пекарских дрож35 жей 100; вода водопроводная до 1 л.

Плотность микробных тел в 1 мл составляет 1,6-1,7.

При культивировании аналогичных штаммов Е. coli на известной среде накопление микробных клеток не превьппало 500 млн./мл.

Пример 4. Для изучения специфичности адгезивных антигенов

К-99 культивируют 54 штамма на опыт45 ной (предлагаемой ) и контрольной (известной) средах, с последующим использованием тестов определения специфичности в реакции маннозорезистентной гемагглютинации (РМГА), реакции агглютинапии (PA), исследования под электронным микроскопом

5 4 (ЭМ) на предмет обнаружения пилей адгезии. Результаты исследования показывают, что культивирование Е. coli в опытной среде способствует накоплению адгеэивнъ х антигенов, которые по сравнению с антигенами, полученными на контрольной среде, более специфичны в РМГА на 13, в PA—

20,4 ., в ЭМ вЂ” ll l, Таким образом, использование питательной среды позволяет повысить выход биомассы микроорганизмов, специфичность адгезивных антигенов

К-99, а также удешевить производство этих антигенов за счет замены дорогостоящих компонентов среды.

Формула из обретения

80-100

10,0-15,0

Питательная среда для накопления адгеэивных антигенов К-99 Escherichia coli содержащая источник азота, глюкозу, минеральные соли, уплотнитель и воду, отличающаяся тем, что, с целью повьппения выхода биомассы и специфической активности целевого продукта, она дополнительно содержит фильтрат культуральной жидкости пекарских дрожжей, полученной после 3-4-часового подращивания в водной среде при массовом соотношении дрожжей, глюкозы и хлористого. натрия (100-15Й):10:10 в 1 л воды, в качестве источника азота она содержит гидролизат казеина., в качестве минеральных солей — фосфорнокислый однозамещенный калий и фосфорнокислый двузамещенный натрий, в качестве уплотнителя — очищенный агар-агар при следующем количественном соотношении компонентов, г/л:

Гидролиэат казеина 1,5-2,0

Фильтрат культуральной жидкости пекар" ских дрожжей

Глюкоза

Фосфорнокислый однозамещенный калий 1 35-1,38

Фосфорнокислый двузамещенный натрий 1,0-1,1

Очищенный агар-агар 26,0-30,0

Водопроводная вода Остальное.