Способ получения культуры протея в о-форме
Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано при производстве вакцинных препаратов. Цель изобретения - повышение выхода целевого продукта и стабилизации его свойств. Исходную культуру протея в Н-форме засевают в мясопептонный бульон, в который вносят 4-6% додецилсульфата натрия. Посевы инкубируют в течение 28-30 дней при комнатной температуре. Выделяют клоны, растущие в виде О-волонии. Стабильность приобретенных свойств сохраняется культурой протея в течение 5 лет (срок наблюдения). Частота возникновения мутантов повышается по сравнению с известными способами.
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК
А1 (д1) 4 С 12 N 12 N 1/20, С 12 R 1:37) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К А ВТОРСК0МУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
178, 1419, культивируют посевы в течение 28 дней при комнатной температуре, Затем по 0,1 мл бульонной культуры сеют на чашки Петри с 1,5Х мясопептонным агаром (рН 7,2-7,4) о и ставят в термостат при 37 С на
48 ч, Все 28-дневные бульонные культуры без додецилсульфата натрия (контроль) при посеве на 1,5% мясопептонный агар растут в виде Н-формы, а большинство культур, выросших в мясопептонном бульоне с 5Х-ной концентрацией додецилсульфата натрия на чашках Петри с 1,5%-ным мясопептонньм агаром, растут в виде изолированных
О-клонов. В дальнейшем от каждого штамма берут по 100 изолированных
ГОСУДАРСТВЕННЬ1Й НОМИТЕТ
ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И OTHPblTHSIM
ПРИ ГКНТ СССР (21) 4361024/28-13 (22) 27.11 ° 87 (46) 23,07.89. Бюл, Р 27 (71) Башкирский государственный медицинский институт им. 15-летия ВЛКСМ и Уфимский научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И.Иечникова (72) З.Г.Габидуллин, В.М.Бондаренко, И.Б,Ишкильдин и В.И.Тимербулатов .(53) 576.8.093.1 (088.8) (56) 11ЛЗИ, 1940, Н: 9, с. 58-64.
Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано при производстве вакцинных препаратов, Цель изобретения — повышение выхода целевого продукта и стабилизации его свойств, Пример, Дозецилсульфат натрия (Sds) добавляют в стерильный мясопептонный бульон (МПБ) (рН ?,27,4) в концентрации 5%.
Полученную смесь разливают в пробирки по 8 мл, кипятят трехкр тно по 30 мин, сеют Н-формы протея. Для опыта берут 9 роящихся диких штаммов вульгарного и мирабильного протея:
290, 2731, 29, 1481, 737, 610, 1858, „„Я0„„1495370 (54) СПОСОБ ГК ЛУЧГНИЯ КУЛЬТУРЫ ПРОТЕЯ В О- РОРИЕ (57 . Изобретение QTHocHTcR к микробйологии и может быть использовано при производстве вакцинных препаратов, Цель изобретения — повышение выхода целевого продукта и стабилизации его свойств. Исходную культуру протея в Н-форме засевают в мясопептонный бульон, в которой вносят
4-6Х додецилсульфаTÿ натрия, Посевы инкубируют в течение 28-30 дней при комнатной температуре. Выделяют клоны, растущие в виде О-волонии. Стабильность приобретенных свойств сохраняется культурой протея в течение
5 лет (срок наблюдения), Частота возникновения мутантов повышается.по сравнению с известным способом, Формула и з о б р е т е н и я
Способ получения культуры протея
35 в О-форме путем выращивания культуры протея в Н-форме в жидкой питательной среде в присутствии мутагена с последующим отбором клонов, о т л и ч а— ю шийся тем, что, с целью повы40 щения выхода целевого продукта и стабилизации его свойств, выращивание осуществляют в течение 28-30 дней в присутствии додецилсульфата натрия в концентрации 4 — 6% к объему среды.
Составитель Г.Смирнова
Редактор Н,Рогулич Техред М.1 идык
Корректор Y..Øàðîøè
Заказ 4216/25 Тираж 500 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5
Производственно-издательский комбинат "Патент", г.Ужгород, ул . Гагарина, 101
3 1495370
О-клонов и в течение 8 мес их периодически пересевают по Шукевичу (через каждые 15 дней). i е клоны, которые растут в виде О-колонии, трехкратно пересевают в нативный мясопептонный бульон, каждый раз проверяя роение на скошенном 1,5 -ном мясопептонном агаре по 1 !укевичу.
Результаты исследований показали, что 93-95 клонов штаммов КФ 1858, 178,737,1419,610 после 2-3-кратного посева по Щукевичу превращаются в
Н-формы, 24 — .после 9-10-кратного, а оставшиеся 7 клонов реверсируются в ползучие формы только после 3-кратного культивирования в нативном мясопептонном бульоне. У культур N -¹ 290, 29 и 273 1 9-10 клонов после 4-5кратного посева на скошенный мясопеп- gp тонный агар по Щукевичу 15-17 посФ ле 9-10-кратного посева по Щукевйчу превращаются в исходные Н-формы, Трехкратное культивирование оставшихся изолированных клонов в мясопептон- 25 ном бульоне показало, что у штамма
ФР 290 и 29 28-29% соответственно остаются в виде стабильных О-форм, у штамма У 273 1 26 . клонов остаются в виде стабильных О-клонов. Дальнейшие наблюдения показали, что большинство клонов стабильно остаются изолированными и не реверсируются в исходные Н-формы.
Таким образом, культивирование
Н-формы протея в течение 29 дней в мясопептонном бульоне, содержащем
5 . концентрации додецилсульфата натрия, приводит к образованию стабильных О-форм клонов этого микроорганизма, Далее изучена скорость их размножения, Дпя этого 2 млрд суспенэии суточной агаровой культуры сеют по
10 млн микр,.кл. в пробирки, содержащие 8 мл МПБ, ставят в термостат на о
8 ч при 37 С и определяют оптическую плотность по стандарту мутности.
Клетки стабильной О-формы протея обладают значительно пониженной скоростью размножения по сравнению с исходной Н-формой культуры.
При переходе Н-формы протея в стабильную О-форму одновременно с утратой их способности к роению происходит и изменение рибосомальных признаков, в частности снижается активность фермента гемолиэина, утрачивается устойчивость. к антибиотикам, ослабляется вирулентность..Стабильность свойств сохраняется в течение 5 лет (срок наблюдения).
Таким образом, использование способа позволяет получать стабильную
О-форму протея. Чувствительность к широко применяемым в практике антибиотикам, авирулентность, не способность продуцировать гемолизин, пониженная скорость размножения дает основание рекомендовать полученные стабильно нероящиеся клоны в качестве живого вакцинного штамма для профилактики протейной инфекции.
