Штамм бактерий lастовасillus асidорнilus, используемый для приготовления бакпрепаратов для нормализации микрофлоры при нарушении микробиоценоза влагалища

 

Изобретение относится к микробиологической промышленности и может быть использовано для получения препаратов - зубиотиков, используемых для нормализации микробиоценоза влагалища. Цель изобретения - создание штамма бактерий LACTOBACILLUS ACIDOPHILUS, обладающего антибиотикоустойчивостью и выраженными адгезивными свойствами. Штамм получен путем селекции, депонирован в Центральном Музее промышленных микроорганизмов под номером ЦМПМ В-3324. Штамм L.ACIDOPHILUS в виде свечей используют для лечения нарушений микробиоценоза влагалища. 2 табл.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СООИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19) (11) А1

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А BTOPCKOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ женшины.

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И OTHPbfTHRM

ПРИ ГКНТ СССР (21) 3922963/28-13 (22) 28.06.85 (46) 07,07,89. Бюл, Р 25 (71) 2-й Московский государственный медицинский институт им,Н.И,Пирогова (72) В,М,Коршунов, Н,Н,Володин, Л,И.Кафарская, Н,П,Иванова и Б.В.Пинегин (53) 615.371 (088.8) (56) Ленцнер А.А,, Миксельсаар М,3., Кирх Р.А. Лактофлора близнецов и экспериментальньж животных одного ромета, — Актуальные вопросы иммунодиагностики и иммунорегуляции, Материалы Ч научной конференции по проблеме клинической иммунологии, Таллин, 1982, с ° 210.

Изобретение относится к микробиологической промышленности и может быть использовано для получения препаратов — эубиотиков, используемых для нормализации микробиоценоза влагалища.

Целью изобретения является новый штамм, обладающий антибиотикоустойчивостью и выраженными адгезивными свОйствами, Штамм Lactobacillus acidophilus получен иэ исходного штамма L,acidophilus ВР-27 путем селекции, Исходный штамм L.acidoðhilus ВР-27 выделен из влагалища здоровой взрослой (5И 4 С 12 N 1/20, А 61 К 35/74//

//(С 12 N 1/20, С 12 R 1:23) 2 (54) ШТАММ БАКТЕРИЙ LACTOBACILLUS

ACIDOPHILUS, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ БАКПРЕПАРАТОВ ДЛЯ НОРМАЛИЗАЦИИ МИКРОФЛОРЫ ПРИ НАРУШЕНИИ

МИКРОБИОЦЕНОЗА ВЛАГАЛИЩА (57) Изобретение относится к микробиологической промьппленности и может быть использовано для получения препаратов — эубиотиков, используемых для нормализации микробиоценоэа влагалища. Цель изобретения — создание штамма бактерий Lactobacillus acidophilus обладающего антибиотикоустойчивостью и выраженными адгезивными свойствами, Штамм получен путем селекции, депонирован в Центральном

Музее промьппленных микроорганизмов под номером ЦМПМ В-3324, Штамм L,acidophilus в виде свечей используют для лечения нарушений микробиоценоза влагалища. 2 табл, Штамм Lactobacillus acidophilus депонирован в Центральном Музее промьштпенных микроорганизмов института ВНИИгенетика" под номером ЦМПМ

В-3324 и характеризуется следующими признаками °

Культурально-морфологические свойства. Длинные и тонкие неспорообраэующие клетки окрашиваются грамположительно. В чистой культуре клетки располагаются бессистемно. В жидкой селективной среде MPC растет диффуэно, Характерен придонный рост, вся среда при этом остается прозрачной, иногда бактерии распределяются по стенкам пробирки.

1491884

На плотной среде MPC образует колонии S-типа, круглые с ровными краями, гомогенные, -непрозрачные, пигмента не образуют; профиль колоний выпуклый, без блеска, легко снимаются петлей с поверхности плотной среды.

Штамм может расти на следующих средах: обезжиренное молоко - на вто- 10 рые сутки после посева молоко свертывается, с образованием плотного сгустка и отделением сыворотки; на жидкой синтетической среде Н.Наепеl количество жизнеспособных клеток 15 при этом достигает 10 -10 в 1 мл;

5 6 первые пассажи штамма дают обильный придонный рост на жидкой среде Блаурокка для бифидобактерий; в последующих пересевах рост штамма может 20 истощаться; в полужидком (0,77.) агаре Блаурокка (при посеве в пробирки с 9 мл среды) образует слегка выпуклые дисковидные колонии.

Физиолого-биохимические признаки, Оптимум роста при 37,5-38,0 С, оптио мум рН 6,2-6,4, анаэроб.

Каталазы не образует. . Сбраживает сахарозу, мальтозу, галактозу, фруктозу, лактозу, раффинозу; че сбраживает ликсозу, ксилозу, маннит, рамнозу, дульцит, цитруллин, рибозу, сорбит.

Кислотообразование при выращивании в обезжиренном молоке 92 (по 35

Тернеру), Устойчивость к антибиотикам и антагонистические свойства приведены в табл. 1.

Пример 1, Изучение влияния лактобактерий L.acidophilus на восстановление вагинальной нормофлоры у женщин, Под наблюдением находилось t8 жен- 45 щин в возрасте 23-35 лет с вагинальным дисбактеризом, У всех женщин отмечался резко выраженный дефицит мо" лочнокислой лактофлоры, Количество лактобактерий во влагалище всех обследованных женщин составляло 10

10 кл,/г. В то же время число ста5 филококков и дрожжей достигало 1О

10 кл./r исследуемого материала. ь

У 8 женщин определялись энтеробактерии в количестве 1Π— 10 кл./г иссле5 дуемогo материала °

Все обследованные женщины были разделены на две равные и эквивалентные группы, Женщины первой группы получали ежедневно в течение 10 дней местно штамм Е.асЫорЬ11ыз В-2

Р В-3324 в количестве 1 10 жизнеs способных клеток. Женщинам второй группы не назначали местно лактобак-, терии. У женщин первой группы на 1-й и 2-й дни после завершения курса бактериотерапии отмечалась выраженная нормализация вагинальной микрофлоры, которая сохранялась и в последующие сроки наблюдения. На 7-й день после отмены лактобактерий количество стафилококков составляло 1ОЗ кл./г, энтеробактерий менее 10 кл,/r, дрожжей

10 кл,/г. Лактобактерии, занимая доминирующее положение среди других представителей вагинальной микрофлоры, составляли 10 кл./r и превышали т уровни условно патогенных микроорганизмов в 10 раз.

У женщин второй группы в те же сроки наблюдения сохранялся выраженный вагинальный дисбактериоз: количество энтеробактерий, стафилококков и дрожжей составляло 10 — 10, 10

10 и 10 — 10 кл./г соответственно при значительном дефиците лактофлоры

10 - 10 кл./г, Пример 2. Изучение жизнеспособности лактобактерий L,acidophilus

В-2, В-3324, находящихся в вагинальных свечах.

Получают биомассу суточной культуры лактобактерий, выросших на жидкой среде МРС, содержащую 3 10 жизнеспо

0 собных клеток. Биомассу лактобактерий смешивают с 30 г масла какао и затем в смесь добавляют 2,0 г ланолина, который связывает свободную воду и обеспечивает гомогенность смеси, После этого гомогенную массу раскатывают и выкладывают,-.в специальный металлический дозатор, при помощи которого готовят 30 свечей. Свечи хранят в целлофановых обертках в хоо лодильнике при 4 С на протяжении

10 сут. На 1, 5 и 10-е сут хранения определяют в свечах количество жизнеспособных лактобактерий. Установлено, что на протяжении 10 сут после изготовления свечей число жизнеспособных лактобактерий в каждой свече составляет 1 ° 10 клеток.

Сравнительные данные по адгезивностной способности штамма представлены в табл, 2, 1491884

Продолжение табл.1

Антагонистическая активность

Ми нимал ьные ингибирующие концентрации, мгк/мп

Препарат

Зона звТестштамм держки роста тест10 штамма вокруг колоний лактобактерий, мм

Гентамицин °

S,dublin

С-96

К,Pnevmoniae К 412

vir

P.mirabilis 771

12,0

Динкоми25

t5 0

0,5

Ампиокс

9,0

Ампицил9,0

S. albus

0,5 лин

Таблица 2

30 штамм пакт бактерий оказатели адгеэнвности к клеткам хозяина

4итроциты I rp. Вагикрови нальные э пнте35 оциты

% Ф епень Индекс

re- адгеВнос» знвиос» ндекс адгеТаблица 1 виости

МинимальАнтагонистичес- 40 кая активность

Препарат ные ингибирующие концентрации, мгк/мл

4,9

2,3

t1,8

Зона заТестштамм держки роста тест45 штамма вокруг колоний

9,t 21,8

36,0 лактобактерий, мм

1,7 3,5

19,0

Певиграмон

Полимик55 син

Канамицин

Индекс адгезивности по отношению

1 к эпителиоцитам влагалища определяют следующим образом.

Культуру лактобактерий (В-2) выра5 щивают на жидкой среде МРС в течение

36 ч, центрифугируют t5 мин при

3000 об/мин и трехкратно отмывают в растворе Хэнкса, Эпителиоциты из влагалишного отделяемого отмывают троекратно в среде 199, после чего подсчитывают их концентрацию в единице объема (с помощью камеры Горячева), Смесь лактобактерий и эпителиоцитов в соотношении 100; 1 (в среде 199) инкубируют 30 мин при 37 С.

Для фиксации лактобактерий, взаимодействующих с эпителиоцитами, в смесь добавляют глютаровый альдегид, после чего на предметных .стеклах готовят 20 мазки и окрашивают их по Романовскому-Гимза.

Индекс адгезии определяют как среднее число лактобактерий, прикрепленных к одному эпителиоциту (при подсчете на 100 эпителиоцитов, участвующих в адгезии) в препарате. формула изобретения

Штамм бактерий Ьасtobac.illus ас1.dophilus, ЦМПМ В-3324 (Центральный

Музей промьппленных микроорганизмов института "ВНИИгенетика"), используемый для приготовления бакпрепаратов для нормализации микрофлоры при нарушении микробиоценоза влагалища, 50000

1000 Е.Cali 01 16,5 Исходный (L,асС4оphilus

BP-27

Лолуч енньв1 путем селекции нтамма

L.acidophilus

8-2, Ютамч Ь,fer, aentum (известный) ь

Процент клеток, на которых находились две и более клетки лактобактерий, ьз

Среднее число лактобактерий,взаимодействующих с одной клеткой хозяина