Способ консервирования гемолимфы насекомых

 

Изобретение относится к биологии ,в частности, к энтомологии, и может быть использовано при цитоморфологических, иммунохимических и других вопросах функции и биохимии гемолимфы насекомых. Цель способа - удлинение срока хранения гемоцитов и предотвращение их слипания - достигается путем добавления к известному консерванту гемолимфы насекомых, содержащему раствор натрия серноватистокислого пятиводного (0,02-3,0 М), стрептоцида растворимого (0,02-0,26 М) и трилона Б (этилендиаминтетрауксусной кислоты динатриевой соли дигидрата (0,03-0,22 М), после чего в консервант вводят гемолимфу насекомого в соотношении (1:1)-(4:1). 1 табл.

Соаэ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (51)4 А 01 N 1/02

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

3ЖЯйМ

AkTEHTh5

Е, )БЛ !ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

К А BTOPGKOIVIY СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4387403/30-15 (22) 10.12.87 (46) 30,07,89. Бюл. 1"- 28 (71) Институт зоологии и паразитологии АН ЛитССР (72) Ю.М.Ширвинскас, Я.И.Жукаускене и П,А.Заянчкаускас (53) 578.68 (088,8) (56) Авторское свидетельство СССР

-У 1009374, кл. А 01 N 1/02, 1981 ° (54) СПОСОБ КОНСЕРВИРОВАНИЯ ГЕМОЛИМФЪ| НАСЕКОМЫХ (57) Изобретение относится к биологии, в частности к энтомологии, и может быть использовано при цитоморИзобретение относится к биологии, в частности к энтамологии, и может быть использовано при изучении цитоморфологических, иммунохимических и других вопросов функции и биохимии гемолимфы насекомых.

Цель изобретения — предотвращение слипания гемоцитов и удлинение срока их хранения.

Пример. Вариант 1, Берут

0,05М раствор полиэтиленгликоля в

0,15 М растворе хлористого натрия и закапывают его на предметные стекла по одной (r 0,03 мп), по две (.0,06 мп), по три (н0,09 мп),по четыре (О, 12 мп) капли и к ним добавляют по одной капле гемолимфы насекомых, например гемолимфы гусениц большой или малой пчелиных огневок.

Полученную смесь перемешивают стеклянной палочкой и наблюдают под

„„SU„„1496741 А 1

2 фологических . иммунохимических и других вопросах функции и биохимии гемолимфы. насекомых. Цель изобретения — удлинение срока хранения гемоцитов и предотврашение их слипания— достигается путем добавпения к известному консерванту гемолимфы насекомых, содержащему раствор натрия серноватистокислого пятиводного (0,02-3,0 М), стрептоцида растворимого (0,02-0,26 М) и трилона Б (этилендиаминтетрауксусной кислоты динатриевой соли дигидрата (0,03-0,22 М), после чего в консервант вводят гемолимфу насекомого в соотношении (1:1)-(4:1). 1 табл. микроскопом за поведением гемоцитов.

Вариант 2. В мерный 50-миллилитровый цилиндр вливают 20 мл 0,08 M раствора натрия серноватистокислого пятиводного. Туда же вливают 0,5 мп

0,29 M раствора трилона Б и 2,5 мп

0,35 M раствора стрептоцида растворимого и до 40.-миллилитровой отмет-. 4 ки добавляют дистиллированной воды. 0

Получают раствор, содержащий 0,04 М натрия серноватистокислого пятиводного, 0,02 стрептоцида растворимого и

0,003 M трилона Б, Раствор закапывают на предметные стекла по одной, две, три и четыре капли, что составляет около 0,03-0,12 мп, и к ним добавляют по одной капле гемолимфы насекомых, перемешивают стеклянной палочкой и микроскопируют. В готовой смеси с гемолимфой концентрация нат3 1496741 рия серноватистокислого пятиводного<: составляет 0,02-0,03 М, стрептоцида растворимого — 0,01-0,016 M и трилона

Б — 0,0015-0,0024 М, Вариант 3. В мерньп1 50-миллилитровый цилиндр вливают 20 мл 0,08 М раствора натрия серноватнстокислого пятиводного, Туда же вливают 0,92 мл

0,29 М раствора трилона Б и 5 мл

0,35 М раствора стрептоцида растворимого и до 40-миллилитров ой отметки доливают дистиллированной водой, Получают раствор, содержащий 0,04 М натрия серноватистокислого пятивод-, ного, 0,04 M стрептоцида растворимого и 0,007 M трилона Б, Раствор закапывают на предметные стекла по одной, две, три и четыре капли, что составляет около 0,03-0,12 мл, к ним добав-20 ляют по одной капле.гемолимфы насекомых, перемешивают стеклянной палочкой и микроскопируют, В готовой смеси с гемолимфой концентрация натрия серноватпстокислого пятиводного состав- 25 ляет 0,02-0,03 М, стрептоцида растворимого — 0,02-0,03 М и трилона Б—

0,0035-0,006 М.

Вариант 4. В мерный 50-миллилитровый цилиндр вливают 20 мл 0,08 М раствора натрия серноватистокислого пятпводного. Туда же вливают 0,92 мл

0,29 М раствора трилона Б и 10 мл

О, 35 М раствора стрептоцида растворимого и до 40-миллилитровой отметки 5 доливают дистиллированной водой. Полу чают раствор, содержащий 0,04 М натрия серноватистокислого пятиводного, 0,09 М стрептоцида растворимого и

0,007 M трилона Б, Раствор закапыва- 4О ют на предметные стекла по одной, две, три и четыре капли, что составляет .около 0,03-0,12 мл, и к ним добавляют .по одной капле гемолимфы насекомых, перемешивают стеклянной палочкой и микроскопируют. В готовой смеси с гемолимфой концентрация натрия серноватистокислого пятиводного составляет 0,02-0,03 М, стрептоцида растворимого — 0,045-0,07 М и трилона Б — 0,0035-0,006 М, 50

Вариант 5, В стеклянную колбу вливают 20 мл 0,08 М раствора натрия серноватистокислого пятиводного. Туда же вливают 10 мл 0,29.раствора трило4 на Б и 10 мл 0,35 М раствора стрептоцида растворимого. Получают раствор, содержащий 0,04 M натрия серноватистокислого пятиводного, 0,09 М стрептоцида растворимого и 0,07 M трилона Б. Раствор закапывают на предметное стекло по одной, две, три и четыре капли, что составляет около 0,03-0,12 мл, и к ним добавляют по одной капле гемолимфы насекомых, перемешивают стеклянной палочкой и микроскопируют. В готовой смеси с гемолимфой концентрация натрия серноватистокислого пятиводного составляет 0,02-0,03 М, стрептоцида растворимого — 0,045-0,07 М и трилона Б — 0,035-. 0,06 М.

Данные опытов по изучению влияния в вариантах приведенных растворов на слипание гемоцитов гемолимфы гусениц большой пчелиной огневки приведены в таблице. г

Из приведенных в таблице данных видно, что полиэтиленгликоль .в физиологическом растворе, приготовленный и использованный по известной методике, к сохранению гемоцитов совершенно не пригоден, так как дает 100Х их слипание, в то время, как предложенный консервант в каждом варианте применения снижает процент слипания гемоцитов не свьппе 30Х, что делает возможным их изучение под микроскопом.

Формула из о бр ет е ния

Способ консервирования гемолимфы насекомых путем ее введения в раствор консерванта, содержащего натрий серноватистокислый пятиводный в концентрации 0,02-3,0 М; о т л и ч а юшийся тем, что, с целью предотвращения слипания гемоцитов и удлинения срока их хранения, перед введением гемолимфы в консервант вводят стрептоцид растворимый в концентрации 0,02-0,26 M и этилендиаминтетрауксусной кислоты динатриевой соли дигидрата в концентрации 0,003-0,22 М, а введение гемолимфы в раствор консерванта осуществляют в соотношении (1: 1)-(1:4) . I 496 741

Количество испытываемого раствора, 1 1 1

0,06 0,09 О, 12 О, 15

0,03

Количество добавляемой гемолимфы к раствору, мл

1 L 1

003 003 003 003 003

Составитель Ю,Мамаев

Техред М.Яндык Корр ект ор Н. Кор оль

Редактор M.Áàíäóðà

Заказ 4351/5 Тираж 421 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина, 101

Варианты выполне ния способа

15-20

2-5

1-3

2-20

5-10

5-1 О

0-3

10-15

1-,5

1-3

0-2

5-10

10-20

1-2

0-3

3-6

10-30

3-10

2-6

4-27