Способ получения стафилококкового бактериофага

 

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к производству медико-биологических препаратов. Цель - повышение выхода бактериофага и его литической активности. Стафилококковые бактерии культивируют в мясо-пептонном бульоне Мартена при постоянном перемешивании и аэрации до концентрации бактерий 1 - 1,7 млрд/мл. Заражение бактерий производят при множественности инфекции 1 фаговая частица на 6 - 7 бактериальных клеток, культивирование ведут в течение 3 - 3,5 ч до максимального просветления фаголизата. Стерилизующую фильтрацию проводят на пористых мембранах. Литическая активность 10^7,61-0,19 (по Аппельману), т.е. 90%.

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к производству медико-биологических препаратов. Цель изобретения повышение выхода бактериофага и его литической активности. П р и м е р Размножение стафилококкового бактериофага проводят в реакторе со смонтированной системой перемешивания и аэрации. Культивирование проводят в мясопептонной питательной среде Мартена с добавлением глюкозы до конечной концентрации 0,4% рН 7,3-7,5. Для размножения стафилофага используют 6-9 производственных штаммов стафилококков. В качестве посевной используют 18-часовые бульонные или 18-часовые агаровые культуры, из которых готовят нативную смесь и засевают в питательную среду до концентрации 2-3˙10⁷ клеток/мл. Культивирование бактерий проводят при постоянном перемешивании со скоростью 150-200 об/мин и аэрации 1,5-2 л воздуха на 1 л среды. В процессе культивирования стафилококков периодически определяют концентрацию микробных клеток по калибровочному графику оптической плотности стафилококков на ФЭКе 56М со светофильтром N 6. График строят с использованием оптического стандарта мутности. После 2,5-3-часового культивирования в экспоненциальной фазе роста, когда оптическая плотность культуральной суспензии достигает 0,6-0,9 ед, что соответствует 1-1,7 млрд/мл по графику, в реактор вносят бактериофаг из расчета 1 инфекционная фаговая частица на 6-7 бактериальных клеток с учетом данных их одиночного цикла развития фага. Латентный внутриклеточный период размножения фага 45-50 мин. Через 3-4 генерации фага, длящейся 3-3,5 ч, наступает видимый лизис бактериальных клеток, сопровождающийся просветлением культуральной среды приблизительно до оптической плотности 0,06 ед. Затем фаголизат фильтруют через стерилизирующие фильтры непосредственно из реактора. Полученный отфильтрованный фаголизат характеризуется высокими литическими свойствами, лизируя 96% титровочных культур в разведении фага 10⁷-10⁸ (по Аппельману). В таблице даны сравнительные результаты выхода бактериофагов трех опытов по известному способу и трех опытов по предлагаемому. Предлагаемый способ обладает высокой производительностью, технологичен. Получаемый целевой продукт (в количестве 30-40 л) имеет высокую литическую активность (10^7,6 ±0,19), разница в литической активности составляет 15,6 раза.

Формула изобретения

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СТАФИЛОКОККОВОГО БАКТЕРИОФАГА путем выращивания стафилококков в условиях аэрации и перемешивания в жидкой питательной среде с последующим заражением бактериофагом, инкубацией посевов и стерилизующей фильтрацией целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода бактериофага и его литической активности, выращивание стафилококков проводят в течение 2,5 3 ч, заражение бактериофагом осуществляют при достижении концентрации бактерий 1 1,7 млрд/мл из расчета 1 фаговая частица на 6 7 бактериальных клеток и инкубирование проводят в течение 3 3,5 ч, а стерилизующую фильтрацию проводят на микропористых мембранах.

РИСУНКИ

Рисунок 1