Способ выявления антител

 

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии. Цель изобретения - повышение точности выявления антител. Способ осуществляется следующим образом. В исследуемую пробу вносят эритроцитарный диагностикум из бараньих эритроцитов, приготовленный с уменьшенной в 4-8 раз дозой антигена в сравнении с оптимальной дозой антигена, а через 10-15 мин - антительный диагностикум из куринных эритроцитов той же специфичности. Положительный результат учитывают по отсутствию агглютинации эритроцитов.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК

„.ЯО„„МЗ6315

А1 (51)5 С Ol М 33 53

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ роци ов.

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ

f10 ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

К ABTOPCHOhAY CBMQETEAbCTHV (2) ) 4329953/28-14 (22) 17,11 ° 87 (46) 15.01.90. Бюл. Ilr 2 (71) Научно-исследовательский институт эпидемиологии, микробиологии и

-+

-йнфекционных болезней (72) Ю.А.Кузьмин, Б.В,Каральник, Д.Ю.Лучинин и Л,К.Демченко (53) 615.373(088.8) (56) Кузьмин Ю.А., Каральник Б.В.

Изучение эффективности различных .методов приготовления эхинококкового антигенного диагностикума.-Медицинс.кая паразитология и паразитарные болезни, 1981, Р 2, 26-31.

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии.

Целью изобретения является повншениее точности выявления антител при помощи.агглютинационных реакций.

Hp и м е р 1. По предлагаемому способу исследуемую на антитела к шигеллам Зонне пробу сыворотки титруют в объеме 0,05 мл в 0,85%-ном растворе NaC1, содержащем 0,03% бычьего сывороточного альбумина. Во все разведения пробы и контроль (0,05 мл растворителя) добавляют по 0,025 мл

0,5%-ной взвеси. антигенного диагностикума Зонне и" эритроцитов барана.

Сенсибилизирующая зона антигена для этого диагностикума — 6,25 мкг/мл (оптимальная доза антигена для приготовления диагностикума, используемого в PHI A, — 50 мкг/мл). Через 15 мин в

2 (54) СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ АНТИТЕЛ (57) Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии. Цель изобретения — повышение;точности выявления антител. Способ осуществляется следующим образом. В исследуемую пробу вносят эритроцитарный диагностикум из бараньих эритроцитов, приготовленный с уменьшением в 4-8 раз дозой антигена в сравнении с оптимальной дозой антигена, а через 10 — .

15 мин — антительный диагностикум из куриных, эритроцитов той же специфичности. Положительный результат учитывают по отсутствию агглютинации эритэти же лунки добавляют по 0,025 мл

0,5%-ного антительного диагностикума

Зонне из куриных эритроцитов. Учет реакции проводят через 90 мин при агглютинации в контроле. Титром реакции является максимальное разведение сыворотки, дающее задержку гемагглютинации.

По известному способу определяли антитела при помощи РПГА с использо— ванием антигенного диагностикума, приготовленного с оптимальной дозой сенситина — 50 мкг/мл. Титром реакции является максимальное разведение сыворотки, дающее агглютинацию. Каждое определение повторяли 8 раз.

Полученные результаты приведены в табл.l. Видно, что чувствительность предлагаемого способа почти в 3 раза вьппе, чем известного, точность пред1536315

1 T а б,л и ц а ) Способ Обратный Достовер- Коэффициент титр реакции ность раз- варьирования

Р личия титра %

Достоверность различия коэффициента варьирования

Известный 6017 + 1,1

Предлагаемый

17440 « 1,1

3,1+ 0,8

0,9) P) 0,8

P «0,001

2,9+ 0,7 лагаемого способа, оцениваемая по раэбросу результатов измерения (коэф-!, ; фициент варьирования), совпадает с точностью известного способа.

Пример 2, По предлагаемому способу определяли,в сыворотке крови антитела к Тохор1авша gondii с ис- . пользованием антигенного эритроцитар- 10 ного диагностикума, приготовленного с дозой 62,5 мкг/мл сенситина, и антительного эритроцитарного.диагностикума. В остальном способ осуществляли, как в примере I. 15

По известному способу определяли антитела при помощи РПГА с использо, ванием антигенного эритроцитарного

,диагностикума, приготовленного с оптимальной дозой — 250 мкг/мл. 20

Каждый опыт повторяли 8 раз, Результаты приведены в табл.2.

Видно, что чувствительность предлагаемого способа в 3 раза выше в сравнении с известным, а точность 25 обоих способов не различается.

Пример 3. Выбор оптимальной дозы антигена-сенситина Занне для приготовления антигенного эритроцитарного диагностикума, используемого в предлагаемом способе. Способ осуществляли, как в примере 1, но использовали серии антигенного диагностикума, полученные с разными (1,6100,0 мкг/мл) дозами сенситина. Па35 раллельно применяли известный способ.

Каждый опыт повторяли 4-8 раз. Результаты приведены в табл.3.

Оптимальной дозой антигена для известного способа является та минимальная доза сенситина, которая обеспечивает получение максймального титра агглютинации, а для предлагаемого способа — та минимальная доза сенситина, которая обеспечивает получение максимального титра задержки агглютинации. Видно, что оптимальней дозой Зонне для известного способа является 50 мкг/мл. Лучшие результаты предлагаемого способа получены с диагностикумами„ приготовленными с антигенами, взятыми в дозе в 4 и 8 раз меньшей (12,5 и 6,25 мкг/мл), чем доза, оптимальная для агглютинации.диагностикума антителами. С дозой

3,1 мкг/мл в контроле слабая агглютинация, а с диагностикумом, приготовленным с дозой антигена 1,6 мкг/мл, агглютинация эритроцитов s контроле отсутствует. Следовательно, при двух последних дозах антигена-сенситина предлагаемый способ невыполним. Таким образом, оптимальная чувствительность предлагаемого способа обеспечивается применением антигенного диагностикума на бараньих эритроцитах, приготовленного с антигенцм в дозе в 4-8 раз меньшей оптимальной для агглютинации диагностикума антителами.

Таким образом, предложенный способ обеспечивает более высокую чувствительность определения антител при помощи реакции агглютинаиионного типа при сохранении высокой специфичности и точнбсти определения.

Ф о р м у л а и з обре т е н и я

Способ выявления антител путем добавления к исследуемой сыворотке бараньих эритроцитов, сенсибилизированных специфическим антигеном, с последующей оценкой результатов в реакции пассивной гемагглютинации, о т л и — . ч а ю шийся тем, что, с целью повышения точности способа, через

10-15 мин после добавления бараньих эритроцитов вносят куриные эритроциты, сенсибилизированные тем же антигеном, причем для сенсибилизации бараньих эритроцитов используют антиген в 4-8 раз уменьшенной дозе. !

1536315

Т а блица 2

Достоверность различия коэффициента варьирования

Способ

4,8+1,2

0,4)Р )0,3

P ((0,001

3,3+ 0,8

Таблица 3

Способ Средний титр антител при сенсибилизирующей дозе антигена, мкгlмп

1 1 ) (100 50 25 12,5 6,2 3,1

ИзвестHbIA

6400+1,? 6001.1, 3 800+1, 0 60041, 2 Отр

6400+165

Отр.

Предлагаемый м41

Слабая

Отр.

4800+1,2 19200+1,2 19200>1,2 19200+1,3 аггл. в контроле

Отр.

Ф

Нет задержки агглютинации. эритроцитов.

%Ф

Нет гемагглютинации в контроле.

Составитель Г. Крюкова

Редактор М. Циткина Техред М. Ходанич Корректор Н,Король

Заказ 106 Тира к 502 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета но изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно"издательский комбинат "Патент", г.у кгород, ул. Гагарина, 101

Средний обратный титр реакции

Известный 2560 + 1, 1

Предла r а емый

7674+ 1,1

Достоверность pasличия титра

Коэффициент варьирования, й

) 1,6