Способ получения липополисахарида менингококков серогруппы а

 

Изобретение относится к медицине, в частности к получению липополисахаридов из менингококков. Целью изобретения является повышение чистоты целевого продукта. Для этого водный раствор, содержащий липополисахарид, полученный в результате водно-фенольной экстракции менингококков по методу Вестфаля, перед ультрацентрифугированием инкубируют при 35 - 39°С в течение 13 - 20 суток, а ультрацентрифугирование экстрагированного липополисахарида осуществляют в растворе солей с ионной силой, равной 0,3 - 0,6.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

I (19! (!!) А1 (51)5 А 61 К 39 02

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АBTOPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ

®

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И OTKPblTHRM

ПРИ ГКНТ СССР (21 ) 4256432/28-! 4 (22) 02,06.87 (46) 23,01.90, Бюл. ¹ 3 (7!) Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им, Г.И.Габричевского (72) Г.В.Бобылева и В.И.Кувакина (53) 6 12.015 (088 ° 8) (56) Патент США ¹ 3.148120, кл. 424-92, 1964. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЛИПОПОЛИСАХАРИДА МЕНИНГОКОККОВ СЕРОГРУППЫ А

Изобретение относится к медицине, в частности к получению биологически активных микробных антигенов,используемых в диагностике и лечения инфекционного менингита, и касается выделения иммунохимически чистого липополисахарида (ЛПС) менингококка.

Целью изобретения является повышение чистоты целевого продукта.

Поставленная цель достигается тем, что препарат липополисахарида, полученный в результате водно-фенольной экстракции по Вестфалю,- подвергают термостатированию в течение несколь" ких суток с последующим ультрацентрифугированием.

Способ осуществляется следующим образом.

20 г высушенных ацетоном микробных клеток. штамм А-208 суспендируют в 700 мл дистиллированной воды с темо пературой 65 — 68 С, добавляют к сус2 (57) Изобретение относится к медицине, в частности к получению липополисахаридов из менингококков. Целью изобретения является повышение чистоты целевого продукта, Дпя этого водный раствор, содержащий липополисахарид, полученный в результате водно-фенольной экстракции менингококков по методу Вестфаля, перед ультрацентрифугированием инкубируют при 35 — 39 С в течение 13 — 20 сут, а ультрацентрифугирование экстрагированного липополисахарида осуществляют в растворе солей с ионной силой, равной 0,3 — 0,6, пензии 700 мл 90Х-ного фенола,предва- ( рительно нагретого до той же температуры. Смесь выдерживают на водяной 2 бане 165 — 68 С в течение 30 мин при перемешиванйи, а затем охлаждают до

5-10 С и центрифугируют, Верхний вод-ный слой отсасывают, а нижний фенольный вновь перемешивают с 600 мл воды при 68 С в. течение 10 мин. Смесь охлаждают и центрифугируют. Водный слой отделяют от фенольного и объединяют с первой порцией. Полученный раствор диализуют против дистиллиро- ванной воды и лиофилизируют. Выход

"сырого" липополисахарида составляет

1,0 — 1,4 г. 1 г "сырого" липополисахарида растворяют в 200 мл воды, добавляют в качестве консерванта 17. (2,0 мл) толуола. Флакон с раствором липополисахарида плотно закрывают и помещают в термостат при 37 С на

16 сут для разрушения полисахарида, 1537263 при проведении различных иммунологических исследований.

Формула изобретения

Составитель О. Кононова

Техред Л.Олийнык Корректор И.Муска

Редактор Г.Гербер

Тираж 527

Подписное

Заказ 124

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r,Óæãoðîä, ул. Гагарина,101

Зачтем добавляют NaC1 до концентрации 0,5М и раствор центрифугируют п и 105000g в течение 2-х ч. Суперн таит удаляют а осадок липополисав

5 х рида ресуспендируют в исходном о ъеме дистиллированной воды.. Повторяют центрифугированием при том,же режиме, Супернатант отбрасывают, а осадок лиофилизируют.

1

Предлагаемый способ позволяет пол ать препараты менингококковых .

С, свободные от примеси группоспец фического полисахарида и с низким . c ержанием белка и нуклеиновых кисл . Липополисахарид, полученный па п дложенному методу, является биолог ески и иммунологически активным п паратом и может быть использован

Способ получения липополисахарида менингококков серогруппы А путем зкстрагирования микробных клеток смесью фенол-вода с последующим ультрацентрифугированием водной части смеси, содержащей липополисахарид, о т л.и ч а ю шийся тем, что, с целью повышения чистоты целевого продукта, перед ультрацентрифугированием проводят инкубирование водной части смеси при. 35-39 С в течение

13-20 сут а ультрацентрифугирование осуществляют в растворе солей с ионной силой, равной 0;3-0,6.