Способ получения растений-регенерантов риса

 

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к культивированию растительных тканей, и может использоваться в селекции растений. Целью изобретения является повышение приживаемости регенераторов в почве и увеличение выхода укорененных растений. Способ состоит в том, что растения-регенеранты после регенерационной среды перед доращиванием на безгормональной среде обрабатывают раствором ауксина. 1 з.п. ф-лы, 3 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИН

ОПИОАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И OTHPblTHRM

ПРИ ГКНТ СССР (21 ) 43231 65/30-13 (22) 02.11.87. (46) 07.02.90. Бюл. У 5 (71) Всесоюзный научно-исследовательский институт риса (72) Л.А.Кучеренко (53) 578.023.85(088.8) (56) Тканевые и клеточные культуры в селекции растений. — M.: Колос, 1979, с. 34-35.(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РАСТЕНИЙ-РЕГЕНЕРАНТОВ РИСА

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в селекции растений для получения новых исходных форм риса методом

О культуры изолированных тканей.

Практическая значимость метода культуры тканей для селекции тем выше, чем больше выход из каллуса растений-регенерантов и чем выше процент их приживаемости после пересадки в почву.

Цель изобретения - увеличение выхода укорененных регенерантов и повышение их приживаемости в грунте.

Способ состоит в том, что при получении растений-регенерантов, заключающемся в получении из эксплантатов первичного каллуса, субкультивировании его, переносе на регенерационную среду и последующем доращивании на безгормональной среде, стеблевые регенеранты и каллусы со стеб„„SU„„1541252 А1 (51) 5 С 12 N 5/00

2 (57) Изобретение относится к биотехнологии, в частности к культивированию растительных тканей, и может использоваться в селекции растений.

Целью изобретения является повышение приживаемости регенерантов в почве и увеличение выхода укорененных растений, Способ состоит в том, что растения-регенеранты после регеиеран(ионной среды перед доращиванием на безгормональной среде обрабатывают раствором ауксина, 1 3 п. ф-лы, 3 табл. левыми почками перед переносом на безгормональную среду обрабатывают С рас тв ором аук с ина .

Пример 1, Получение растений-регенерантов из каллуса различньй сортов риса. Каллусы получают из различных эксплантатов (целые семена, зародыши зрелых и молодых семян, отдельные части зародьппей или прорастающих семян, зачаточные метелки) на индукционной среде Мурасиге и Скуга @ (MC) с добавкой 4 мг/л 2,4Д + агар 1X.

° Полученные каллусы субкультивируют на той же среде, но с уменьшенным содержанием 2,4Д (2 мг/л) в течение нескольких (до 10) пассажей продол,жительностью по 20-30 сут, высаживая часть каллусов по окончании каждого пассажа на регенерационную среду MC с цитокинином 6-БАП (5 мг/л). Через

20-30 сут культивирования каллусов на этой среде в них образуются зеленые почки, часть из которых в даль1 541 252

Регенерационная среда, МС +

Вид морфогенеза, полученного на регенерационной среде

6-БАП, 5 мг/л+

ИУК, 10 мг/л

6-БАП, 5 мг/л

Родина ВНИИР 22 BHHHP 7405 Альтаир Альтаир

Высажено каллусов, шт.

83 378

350

350

Получено (шт./1О каллусов) Проростки с корнями

Проростки без корневой системы (стеблевые регенеранты)

Каллусы со стеблевыми почками

5,1

5,6

4,6

1,0

1,3

26,2

40,1

22,3

3,3

5,2

75,4

33,3

19,2

l2,9

30,8 Количество каллусов показано числом . трансплантатов величиной 2-3 мм, являющихся единицей пересаживаемого материала. нейшем развиваются в проростки, а часть прекращают развитие. В табл. 1

Как видно иэ табл. 1, число получаемых неукорененных проростков и стеблевых почек значительно выше, 1 чем регенерантов с корнями. При этом добавка в среду ауксина ИУК, 10 мг/л не способствует увеличению корнеобра- 40 зования у регенерантов. Образовавшиеся на регенерационной среде нормальные проростки переносят в почву, а стеблевые регенеф@нты икаллусы со . с теблевыми почками, п рек ратившие ра з- 45 в итие, извлекают из проб ирок или колб, разделяют на отдельные проростки, а каллусы — на кусочки величиной

2-3 мм, после чего проводят их обра- ботку ауксином о(-НУК в концентрации 50

10 мг/л. Каллусы с почками, а также проростки высотой, не превышающей

1 см, помещают в чашки Петри на фильтровальную бумагу, смоченную раствором ауксина с -НУК (слой не бо55 лее l мм). Чашки закрывают и оставляют в стерильном боксе при комнатной температуре на 1-2 ч. Это время необходимо и достаточно для проникнове,приведены результаты культивирования каллусов на регенерационной среде.

Таблица 1 ния раствора в клетки тканей трансплантатов, Проростки высотой более

1 см помещают в пробирки с раствором ауксина, высаживая их на мостики иэ фильтровальной бумаги так, чтобы обработке подвергалась лишь нижняя часть проростка ° По истечении указанного времени трансплантаты переносНТ на безгормональную среду, не промывая их от ауксина, В контрольном варианте трансплантаты пересаживают на безгормональную среду для доращивания, не обрабатывая их ауксином. Все работы проводят с соблюдением обычных правил асептики, принятых в работах с культурами тканей.

Примеры 2-4 осуществляются аналогично примеру 1, отличие состоит в использовании другой концентрации ауксина o(-НУК, а также используют ауксин ИУК в двух концентрациях. Результаты пересадки регенерантов на безгормональную среду с предварительной обработкой их ауксином (сорт ри6

Таблица 3

41?52

Пересажено

Обработка

5 трансплантатов пеВыжило проростков в шт. ред пересадкой на безгормо10 н,л,ную среду почву, шт

Без обра15 ботки

A-НУК, 100 мг/л

110 43

140 100 79

Таблица 2

Обработка трансплантатов перед пересадкой на безгормональную среду

Выход укорененных растений, X из стеблевых из каллусов со стеблевырегенерантов ми почками

71

87

113

113

131

83

33

63

108

Без обработки

ИУК, 10 мг/л

PYK 100 мг/л

Q-НУК, 10 мг/л о(-НУК, 100 мг/л

Обработка ауксином e(-НУК способствует образованию у проростков мощной корневой системы, что обеспечивает хорошую приживаемость их после пересадки в почву, показанную в табл. 3.

Сос тавитель В . Демк ин

Техред М.Ходанич Корректор О, Кравцова

Редактор А. Мотыль

Заказ ?64 Тираж 484 Подп ис н ое

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r Ужгород, ул. Гагарина, 101

5 са ВНИИР. 7405, 1986-1987 r. ) приведены в табл. 2.

Как видно из табл. 2, обработка регенерантов ауксинами резко повышает выход укорененных растений. При этом лучший результат получен при использовании 4-НУК в концентрации

100 мг/л. Выход укорененных растений более 1007 по отношению к числу пересаженных трансплантатов объясняется тем, что часть стеблевых регенерантов имеют по несколько почек роста, после укоренения они начинают расти и дают по несколько отдельных рас тений.

Формула изобретения

1 . Способ получения растений-регенерантов риса, включающий посадку

25 эксплантантов на питательную среду с образованием первичного каллуса, субкультивирование его, перенос на регенерационную среду, доращивание регенерантов на безгормональной среде и последующую пересадку растений в грунт, о т личающийс я тем, что, с

1 целью увеличения выхода укорененных регенерантов и повышения их приживаемости в грунте, перед переносом на

35 б езгормональную с р еду per енеранты об— рабатывают раствором ауксинов в концентрации, обеспечивающей максимальное укоренение.

2.Способпоп.1отлича

40 ю щ и Й с я тем что используют аук сины — индолил-3-уксусную кислоту и

g-нафтил уксусную кислоту.