Способ получения сыворотки крови животных для культивирования клеток

 

Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии и может быть использовано в научно-исследовательских и производственных лабораториях при культивировании клеток животных и вирусов. Цель изобретения - снижение токсичности целевого продукта и повышение чувствительности клеток к вирусам. Сущность изобретения заключается в удалении взвешенных форменных элементов крови путем первичного расслоения препарата крови животного при 6-8°С с последующей фильтрацией через пластины с размерами пор 0,85-0,95 мкм и вторичного расслоения полученной сыворотки посредством замораживания ее при минус 30-40°С и размораживания при 40-45°С. Отделяют верхний слой сыворотки и стерилизуют пропусканием его через фильтр с размерами пор 0,22 мк при комнатной температуре. Применение данной сыворотки повышает эффективность культивирования клеток и их чувствительность к вирусам, т.к. она содержит меньше общего белка, альбуминов, гамма-глобулинов. 2 табл.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИН (51)5

О?

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А BTOPGHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И OTHPblTHRM

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4409705/30-13 (22) ?2,02.88 (46) 23,02.90. Бюп. М 7 (71) Научно-исследовательский ветеринарный институт, r. Казань (72) 0.Х. Хаертынов, К.С. Хаертынов и Л,11, Льяконоя (53) 578.085.23 (088.8) (56) Хаертынов С.Х. и др. Методические рекомендации по ускоренному полу" чению сыворотки крови животных для культивирования клеток и вирусологических исследований методом центрифугирования. M., 1985. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СЫВОРОТКИ КРОВИ ЖИВОТНЫХ ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ KJIF.-i

ТОК (57) Изобретение относится к ветеринарной микробиологии и может быть использовано в научно-исследовательских и производственных лабораториях при культивировании клеток животных и

Изобретение относится к ветеринарной микробиологии и может быть использовано в научно-псс. едоватсльских и производственных лабораториях при культивировании клеток животных.

Цель изобретения — снижение токсичности целевого продукта и повышение чувствительности культивируемых клеток к вирусам.

Сущность способа сводится к тому, что отделение сыворотки от форменных элементов крови производят при 6-8 С, Затеи холодную сыворотку о, „„Я0„„154480 A 1

2 вирусов, Цель изобретения — снижение поксичности целевого продукта и повышение чувствительности клеток к вирусам, Сущность изобретения заключается в удалении взвешенных форменных элементах крови путем первичного расслоения препарата крови животного при 6-8 Г с последующей фильтрацией через пластины с размерами пор 0,85—

0,95 мкм и вторичного расслоения полученной сыворотки посредством замоо раживания ее при минус 30-40 C и размораживании при 40-45 Г, Отделяют верхний слой сыворотки и стерилизуют пропусканием его через фильтр с размерами пор 0,22 мк при комнатной тем- с пературе, Применение данной сыворотки повьппает эффективность культивирования клеток и их чувствительность к вирусам, т.к ° она содержит меньше об- С щего белка, альбуминов, гамма-глобулинов, 2 табл. без предварительного подогрева для >@, удаления взвешенных форменных элементов и выпавших криоглобулинов подвергают фильтрации через пластины с раз- ив мерами пор 0,85-0,95 мкм, В последующем, с целью расслоения на фракции, полученную сыворотку в прозрачном цилиндрической формы сосуде эаморажио вают при минус 30-40 С с последующим размораживанием при 40-45 Г, Объем сосуда зависит от потребности в качественной сыворотке, В результате замораживания и оттаивания сыворотка расслаивается. При

1 54480() этом гемоглобин и другие пигменты, а тякж< бе »ковые фрякци» с высокой молеку;»яр»<ой магсой, такие кяк гамма-гло6y I»I»it, ряспол,п.яются в ш»ж»»ел<, »ри5 легяющем ко дну сосуда, слое, что позволяет отделить их оТ верхних слоев, Отделение»»»гж»»его слоя»роизводят путем сливяния в с»учае использования для замораживания сыворотки госуда типа делите<»ьной воронки. Отделенный нижний слой, сог тавл яющий o T общей массы сыворотки 5-)Oi:, после определенной o6p36oTKII может быть г»рименен при культивировании клеток не для вирусолог»ческих исследований ил» испол»,зован в качестве концентрирован»ого препарата гамма-глобулинов, Остявшиеся верхние слои перемепгива(от и после стерилизу<ощей фильтрации используют ;0 по нг»знячен»»о, П р и tf v р, Кровь берут при noMott»If IfI".rIbt »giIf полого ножа из вени или сердца, ис»»о»т» зуя зякрыту»о систему, исклю-»яю»цую контакт с внешним инфици- 25

poBяи»ппм воздухол<. Объем сосуда для взятия крови и ее количество определяются потребностью в сыворотке, ОтдеJ»pIIH<:. сь»воротки методом отстоя производят при 7 Г. Отст<»яв»<»у<ося сыворотку собира(от по закрытой системе в сосуд-сборник под отрицательным давлением (О,? ятл1). Сбор сыворотки производят с»еция»»иной стеклянной трубкой диаметром !О мм, изогнутой »(а конце о под уг»»ол< 90, oткрытый конец пр»крыт стекля»»ной решетчатой пластиной с размером отверстий 0,5-1,0 мм, Гпягодаря зтому r;rene гь<воротки в трубку про»сход»»т сверху, а не снизу со

40 стороны сгустка. Такое располон.ение засагыг<я»»щего отверст»»я г»редотврящяет поступление мелк»х сгустков и осевших на IIoB(pxrloo ct $ сткя форменных элементов в трубку для отсоса сыворот-45 ки, Гобря»»»»ую гыворотку без подогрева, с целью очистки от взвешенных форменных элементов, ф»пьтруют через tttta(.— тины с размер<»м rrop 0,85-0,95 мкм, После зтогn сыворотку подверга<от ряс50 слоению путем з rtf(rp(rent»r a»IH»t ttprf - 35 Г о с »оследу»о<цим о Tòàètr err»åм Itp» «: Г, >о

Образу(ощ»йгя при этом нижний те 4IIbtA глой, содержащий ряз:»ич»» t<. п»гменты и I аммя — » л <» 6 у <1 »»(ь! > удаляют ° Вьппе ll P жящие OJI()H после «еремешивания подвергают <-терилизунпяей фильтрации с

»спользованием пластин с размером пор (), 22 мкм.

Ио (ученняя сыворотка отличается от известной Ito физико-хим»гческим показателям, меньшей токсичностью для клеток и лучшей чувствительностью к в»русам клеток, культивировянньгх в сред< с данной сывороткой, Гравн» гельные данные по ростовым качествам сывороток крови приведе}!»1 в табл, 1

11спользование способа позволяет без применения химических препаратрв получ ять сыворотку крови животных

;»чя культивирования клеток с улучшенными качествами, близкой по свойствам к дефицитной и дорогостоящей эмбриональной сыворотке. Применение данной сыворотки повьппяет эффективность вирусолог ических исследований, в том числе чувств»тель»tocTb клеток к вирусам и у(i; р .еT»х количественное накопзе:.<е и клетках за счет того, что сыг»оротка, полученная по предложенному способу, содержит меньше общего белка, альбуминов, гамма-глобулинов, Чувствительность клеток к вирусам представлена в табл.2.

Формул а изобретения

Способ получения сыворотки крови. животных для культивирования клеток, включающий взятие крови, отделение сыворотки и стерилизацию при комнатной температуре через фильтры с размером пор 0,22 мкм, о т л и ч а ю— шийся тем, что, с целью снижения токсичности целевого продукта и повышения чувствительности клеток к вирусам, отделение сыворотки проводят при

6-8 С, затем пропускают ее через фильтрь< с р<аэмером пор 0,85-0,95 мкм, ряссля»(ван»т посредством замораживания при минус 30-40 С и оттаивания при о .

40-45 С и стерилизации подвергают образовавшийся после расслоения верхний слой сыворотки, 1544800

Таблица!

Клетки

Индекс пролиферацпи изучаемьIx сывороток

КонтрольИзвестIIp едло— женная

Нижний слой ная ная

ПП =Х) 2

ВНК-21 4

1,5 2

2,5 3,75

Нет роста

I 5

П р и м е ч а н и е. контрольная сыворотка сыворотка хорошего качества; опытная сыворотка — сыворотка, обладающая токсичностью, Табл ица2

Чувствительность клеКлетки

Вирусы ток к вирусам в лг

ТЦД /мл сыворотки

Предложенный способ

Известный способ

Ринотрахеита крупного рогатого скота

Болезни

Ауески

5,15Ф0,2 6,4610,1

6)0 +0,15 7,2Ф0,2

П .3К

1П1ЗС

П р и м е ч а н и е: в опытах для культивирования клеток использовался 0,57,-ный раствор ГЛА с сывороткой 102-ной концентрации

Составитель А,. Маныкин

Техред М.Дидык

Корректор С. Иекмар

Редактор В, Данко

Заказ 471 тираж 479 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина,101