Штамм бактерий sтrертососсus lастis - продуцент низина

 

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано в медицинской, пищевой, молочной и консервной промышленности. Цель изобретения - создание штамма - продуцента низина, дающего высокий выход низина при снижении срока. Штамм выделен из накопительной культуры молочнокислых бактерий микрофлоры свежего коровьего молока фермы ТСХА. Предложенный штамм имеет высокую антибиотическую активность низина в культуральной жидкости - 3200-3600 МЕ/мл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК ((9(SU ((((ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АBTOPCKOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

« (ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4357887/31-13 (22) 04.01.88 (46) 23.03.90. Бюл. ll(1! (7l) МГУ им. М.В.Ломоносова и Всесоюзный научно-исследовательский и конструкторский институт молочной промышленности (72) Н.С.Егоров, Л.Г.Стоянова, И.Н.Пятницына и С.Б.Задояна (53) 577.15(088.8) (56) Авторское свидетельство СССР !! - 787471, кл. С 12 P 21/00, 1980. (54) ШТАММ БАКТЕРИЙ STREPTOCOCCUS

LACTIS — ПРОДУЦЕНТ НИЗИНА

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано в медицинской, пищевой, молочной и консервной промышленностях.

Целью изобретения является создание штамма — продуцента низина, дающего высокий выход целевого продукта при снижении срока инкубации при обычной температуре.

Штамм выделен из накопительной культуры молочнокислых бактерий микрофлоры свежего коровьего молока фермы ТСХА.

Морфологические признаки. Грамположительные бактерии, неподвижные, бесспоровые ° Стрептококки образуют цепочки иэ двух-четырех кокки, диплококки. На агаровых средах образуют колонии белые, блестящие, круглые с ровными краями мелкие (от 1 до 2 мм) лодочнообразной формы. При глубинном росте на этих же средах (51)5 С 12 P 21/00, С 12 N /20

2 (57) Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано в медицинской, пищевой, молочной и консервной промышленности. Цель изобретения — создание штамма — продуцента низина, дающего высокий выход низина при снижении срока. Штамм выделен из накопительной культуры молочнокислых бактерий микрофлоры свежего коровьего молока фермы ТСХА.

Предложенный штамм имеет высокую антибиотическую активность низина в культуральной жидкости 32003600 МЕ/мл. колонии круглые, белые с диаметром до 2 мкм.

Культуральные признаки. При росте в стерильном обезжиренном молоке образует плотный сгусток. Характер роста в лакмусовом молоке: при 2530 С восстанавливает лакмусовое молоко и образует сгусток, при 40 С наблюдается частичное восстановление беэ образования сгустка. В бульоне (МПБ) с NaCl в концентрации 2-4Х наблюдается рост, с 6,5X NaCl роста нет. В гидролиэате молока с рН 9,2 растет, с рН 9,6 не растет.

Физиолого-биохимические признаки.

Оптимальной температурой инкубирования

О шт ° 199Х является 25 С. Рост минимао лен при 10 С, при 45 С вЂ” роста нет.

Хорошо растет на средах, приготовленных на основе гидролизата молока, солевых средах с дрожжевым автолиза1551744 том, содержащих соли азота и фосфора.

Штамм сбраживает глюкозу, лактозу, маннозу, галактозу, маннит, не сбраживает мальтозу, глицерин, сорбит, глицерин ° Образует аммиак из аргинина, не образует каталазу, ацетоин, диацетил, т ° е. является типичным представителем гомоферментативного молочнокислого брожения. При росте образует молочную кислоту (0,45 ), полипептидный антибиотик низин (3000-3600 ME/ìë). Штамм 119Х устойчив к эритромицину в концентрации

0,25 мкг/мл и фузидину (до 1 мкг/мл). 15

Фагоустойчив, патогенностью не обладает, Бактерии хорошо развиваются на средах с рН 6,8-7,0, при рН 9,6 рост отсутствует, при рН 3,5 — рост также ингибирован, 20

Высокая активность штамма относительно стабильна при длительном хранении (4 г) в лиофильном состоянии в защитной среде, содержащей, : желатоза ll, сахароза 22; глютамат 25 натрия 4,4; 3-замещенньй цитрат натрия 50; в ампулах при 4-6 С. В течение месяца штамм 119Х можно хранить в виде молочного сгустка. Перевивку производят через месяц посредством внесения I микробиологической петли сброженного культурой молочного сгустка в стерильное обезжиренное молоко (8-10 мл), засеянньй инокулят выращивают при 22-25 С в течение

3, 5

10-12 ч, Пример, Штамм Streptococcus

1actis 119Х восстанавливают в стерильном обезжиренном молоке и инкубируют 4р о при 25 С до образования сгустка °

Микробиологической петлей сгусток переносят в стерильное обезжиренное молоко (8-10 мл) и инкубируют в течение

l0-12 ч. Затем тем же способом cryc- 45 ток вносят в посевную промежуточную среду состава: глюкоза 1, дрожжевой автолизат 25 мг . по азоту аммония, после 10-.12 ч инкубирования 3% инокулята переносят из посевной среды в солевую среду, содержащую, .: глюкоза 1,0; К НРО 2,0; NaCl 0,2; MgSO

0,02; дрожжевой автолизат — в том же количестве, что и в посевной среде.

Процесс ферментации ведут 10-12 ч при комнатной температуре (22-25 С), что обеспечивает антибиотическую активность культуральной жидкости на уровне 3600 МЕ/мл.

Антибиотическую активность определяли микробиологическим методом с тест-культурой Bacillus coagulans.

Среду для культивирования теста готовили на бульоне Хотингера с добавлением, %: глюкоза 1,0; NaC1 0,2 агар-агар 2,0. Средой для титрования антибиотика низина служили среда, приготовленная на фосфатном буфере с рН 5,0 с добавлением, ь,пептон

2,0; глюкоза 1,0; агар 2,0, Ход определения. Культуральную жидкость экстрагируют ацетонуксусной смесью (в соотношении 4:I:5 соответственно) в воде при 55 С в течение о

l ч. Для этого 0,5 мл культуральной жидкости разводят в 4,5 мл смеси, полученный экстракт разводят фосфатным буфером (рН 5,0) в соотношении 1:10 и .1:20 и 0,12 мл вносят в лунки на агаровой среде, засеянной

l суточной тест-культурой. По зонам ингибирования роста тест-организма в течение 14 ч определяют антибиотическую активность экстрактов в пересчете по калибровочной кривой, полученной при титровании растворов стандартного препарата "И1зар11п", содержащего 5, 10, 15, 20 мкг/мл чистого низина.

Сравнительные данные антибиотической активности и процесса ферментации предлагаемого и известного штаммов приведены в табл.1.

Генетические особенности предлагаемого и известного штаммов приведены в табл. 2.

Предлагаемый штамм по сравнению с известными обеспечивает высокую антибиотическую активность низина в культуральной жидкости, сокращение длительности ферментационного процесса полу ения целевого продукта, а также ведение процесса инкубации продуцента без дополнительных затрат на подогрев ферментера, т.е. при комнатной температуре, Формула изобретения

Штамм бактерий Streptococcus

lactis 119Х BKIIM В-4204 — продуцент низина.

1551744

Таблица 1

Время ферментации,ч

Антиб иотическая акМикроорганизм тивность

МЕ/мл

1800-2000 15-20 22-25

3200-3600 10-12

Таблица 2

Микроорганизм Отличительные при знаки

Mal MTL ery fuz

Mal Mtl ery fuz

Составитель Н.Афанасьева

Редактор Н.Рогулич Техред М.Дидык Корректор А.Обручар

Тираж 480

Заказ 309

Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.Ужгород, ул. Гагарина,101

Известный штаммStreptococcus

lactis шт. МГУ

Предлагаемый штамм — Streptococcus lactis 119Х

Известный штамм—

Streptococcus

lactis шт.МГУ .Предлагаемый штамм — Streptococcus lactis

119Х

Температура ферментации, С