Среда для определения галоперидола в сыворотке крови человека радиорецепторным методом
Изобретение относится к медицине , в частности к клинической фармакологии , и может быть использовано в лечебной практике для проведения лекарственного мониторинга путем определения в крови галоперидола и iдругих нейролептиков фенотиазияового и бутирофенонового ряда. Цель изобретения - повышение чуствительности определения галоперидола в крови. Сущность изобретения заключается в том, что при радиорецепторном методе определения галоперидола в качестве рецепторного материала среда содер- -жит синаптосомальную фракцию хвостатого ядра постмортального мозга человека и дополнительно содержит паргилин и солевые добавки в виде NaCl, KCl, CaClg. и KgClz при следующем содержании компонентов, мг.%: рецеп торный материал 900-100(1, сыворотка крови 14 10Э-15- 10Э ; f3 Н спироперидол 7,9 ,8-10-6; ( + )-бутакла- 75,2 Ю 3; паргилин 0,05; аскорбиновая кислота 25,0; Трис 151,2; NaCl 175,5; KCl 9,31; CaCl2 2,77; MgCl2 5,07 и НС1 41,bo Указанный состав предлагаемой среды инкубации позволяет в два раза повысить чувствительность опредепения галоперидола в сыворотке крови радиорецепторным методом. 1 табл0
СОЮЗ СОВЕТСНИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ
РЕСПУБЛИН (51) 5 (01 iN 33/50
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ
ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМ
ПРИ ГННТ СССР (21) 4401789/14 (22) 31. 03. 88 (46) 23. 10. 91. Бюп. Н-" 39 (71) Институт клинической психиатрии
Всесоюзного научного центра психического здоровья AMH СССР (72) А.Г.Мухин и М.Л.Беляева (53) 612.015 (088.8) (56) Cohen В„М., et аl . Neuropharmacology, 1980, v . 19, p . .663-668 . (54) СРЕДА ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГАЛОПЕРИ
ДОЛА B СЫВОРОТКЕ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА РАДИОРЕЦЕПТОРНЬМ МЕТОДОМ (S7) Изобретение относится к медицине, в частности к клинической фармакологии, и может быть использовано в лечебной практике для проведения лекарственного мониторинга путем определения в крови галоперидола и ,других нейролептиков фенотиазинового и бутирофенонового ряда. Цель изобретения — повышение чуствительности
Изобретение относится к медицине, в частности к клиническо= фармакологии, и может бить использовано в лечебной практике для проведения декарственного мониторинга путем оп ределения в крови галоперидола и "-.: других нейролептиков фенотиазинового и бутирофенонового, ряда.
Цель изобретения — повышение чувствительности определения галоперидола в крови.
Способ определения галоперидола с помощью среды инкубации осуществляется следующим образом.
ÄÄ 5LJ „„1572234 А1
2 определения галоперидола в крови.
Сущность изобретения заключается в том, что при радиорецепторном метод определения галоперидола в качестве рецепторного материала среда содержит синаптосомальную фракцию хвостатого ядра постмортального мозга человека и дополнительно содержит паргилин и солевые добавки в виде . Na01, КС1, СаС1 и NgC1 при следующем содержании компонентов, мг./,: рсцепторный материал 900-1000; сыворотка крови 14 ° 10 -15"10s (Hj спироперидол 7,9 10 -11,8 10 6; (+)-бутакнамол 75,2 10- ; паргилин 0,05; аскорбиновая кислота 25,0; Трис 151,2;
NaC1 17S,5; КС1 9,31; СаС1> 2,77;
МяС1 S,07 и НС1 41,6. Указанный состав предлагаемой среды инкубации позволяет в два раза повысить чувствительность определения галоперидола в сыворотке крови радиорецепторним методом. 1 табл.
В пробирке смешивают сыворотку крови, содержащую галоперидол, Нспироперидол, рецептор ний материал и Трис-солевой буфер, перемешивают и инкубируют эту смесь. После инк бации разделяют свободный и связанный меченый лиганд эН-спироперидол с помощью фильтрации под вакуумом и просчитывают радиоактивность связанного меченого лиганда. Концентрация гало-: перидола в сыворотке определяется по калибровочной кривой на основе рассчитанного процента ингибирования
157? 23ч специфического связывания сыворотками с препаратом.
В состав среды инкубации для осуществления способа включены: Н-спироперидол, в качестве рецепторного материала - синаптосомальная фракция иэ хвостатого ядра постмортального ,мозга человека, набор калибровочных сывороток, содержащих стандартные количества галоперидола, 2 MN pack врр (+)-бутакламола, навески для пригОтовления Трис-солевого буфера и буфера для промывки фильтров, Пример 1. Материалы и метоцы. 1>
Рецепторный материал: хвостатое ядро постмортального материала мозга человека гомогенизируют в 20 объемах
0,32 М сахарозы и центрифугируют при
1000 g 15 мин. Осадок отбрасывают, а супернатант центрифугируют при
17000 g 30 мин. Далее полученный осадок трижды промывают в 50 объемах
50 мМ Трис-НС1-буфера при рН 7,7 с помощью ресуспендирования и последую- 25 щего центрифугирования при 3000у
20 мин. Конечный осадок разводят до концентрации 190-200 мг ткани/мп
50 мМ Трис-НС1 буфером, содержащим
0y1%-ную аскорбиновую кислоту, 10 HKYi 0 паргилина, 120 мМ МаС1, 5 мМ КС1, 2 мМ СаС, 1 мМ MgC1 (Трис-солевой буфер). Суспензию разливают на аликйоты и хранят до использования при
-70 С.
Стандарты: в работе используют сыворотки, содержащие стандартные ко
Личества галоперидола, с концентрациями последнего 100, 40, 20, 59 2ф
1 нг/мл, которые готовят с помощью 4 добавления к 1 мл сыворотки 50 мкл соответствующего стандартного раствора галоперидола в 50 мМ Трис НС1 буфере при рН 7,7. Для определения неспецифического связывания готовят
2 мМ раствора (+)-бутакламола.
Меченый лиганд: Н-спироперидол:
2,0-3,0 нМ в 50 мХ трис-НС1 буфере при рН 7,1 (фирма- NEN) . 88 Ки/ммоль.
Процедура определения. В стеклянной пробирке объемом 10 мл смешивают
140-150 мкл сыворотки, содержащей стандартные концентрации галоперидола, 100 мкл H-спироперидола (конечная концентрация 0,2-0,3 нМ), 250 мкл Трис-солевого буфера и 500 мкл
55 мембранного материала, который перед использованием размораживают, разводят в 10 раз Трцс-солевым буфером и гомогенизируют Содержимое пробирок перемешивают и инкубируют прн комнатной температуре (20-23 С) в течение 45 мин. Далее в каждую пробирку добавляют по 5 мл холодного Трис-НС1 буфера при рН 7,7, и немедленно фильтруют под вакуумом через стекловолокнистые фильтры СГ/В. Фильтры промьгвают еще 2 раза по 5 мл тем же буфером и помещают в сцинтилляционные флаконы с 8 мл сцинтиллятора "Bray" .
Радиоактивность проб подсчитывают через 18 ч.
Для определения неспецифического связывания в пробирку, содержащую сыворотку без галоперицола„ вносят
10 мкл 2 мМ раствора (+)«бутакламола, Специфическое связывание вычисляют как разность между пробами, не содержащими и содержащими (+)-бутакламал.
При обработке результатов вычисляют процент ингибирования сыворотками. содержащими стандартные количества галоперидола, специфического связывания Н-спироперидола в присутствии сыворотки, не содержащей галоперидоп.
Пример 2. Аналогично примеру
1, но с изменением концентрации кои" понентов среды инкубации.. Результаты по определению чувствительности определения галоперидола приведены в таб лицее
Среда указанного состава позволя ет в два .раза повысить чувствитель ность определения галоперидола в сыворотке крови по сравнению с прото типом
Формула из обретения
Среда для определения галогеридола в сыворотке крови человек. радиорецепторным методом, включающая
Трис-буфер, сыворотку крови, рецелторный материал, (Нj спьфоперидол, (+)-бутакламол и аскорбиновую кисло ту, воду, отличающаяся тем, что, с целью повышения качества продукта за счет усиления чувстйи тельности определения галоперидола, в качестве рецепторного материала среда содержит синаптосомальную фракцию хвостового ядра постморталь ного мозга человека и дополнительно содержит паргилин и солевые добавки в виде NaC1 К01, СаС1> и М8С1 при следующем соотношении компонентов, мг% а
1572?34
Аскорбиновая кислота
Трис-буфер
NaC1
КС1
СаС1
МКС12
НС1
Вода
P ецептор ний материал
Сыворотка крови (зН) спироперидол (+)-бутакламол
Паргилин
25 0
151,2
175,5
9,31
2,77
5,07
41 6
Остальное
900-1000
14 ..10з 15" 10з
-6
7,9 ° 10 - 11,8- 10
75,2 tO
0,05
Пример
Состав
Изменение состава
Параметры среды
1 2
Концентрация рецепторного материала, мг %
Концентрация сыворотки, мг %
Концентрация з Н-спироперидола, мг Х
1500
900-1000
14 10з 15, 10з
500
10 10з 20 ° 10з
3,95 ° 10 15,8 ° 10 (7,9 10 )(11,8 ° 10 ) Концентрация (+)-бу . .такламола мг Х
Трис-солевой буфер, .мг %
Трис
НС1
Na(:1
КС1
Сас1
Ngc12
Аскорбиновая кислота
Паргилин
Чувствительность (10Х ное ингибирование), нг/ип сыв
Уменьшение чувствительности, раз
56, 4 "10 з 94, 0 10 з
75,2 10 3
151,2
41,6
175,5
9,31
2,77
5,07
25,0
0,05
151,2
41,6
175, 5
9,31
2,77
5,07
25,0
0 05
151, 2
41,6
175,5
9,31
2,77
5,07
25,0
0,05
0,6 (0,5-0, 7) 1,49
2,08
2,48
3,47
Составитель А.Скурат
Редактор С.Рекова Техред А.Кравчук Корректор И.Муска
Ф
Заказ 4596 Тираж Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5
Производственно-издательский комбинат "Патент", r.ужгород, ул. Гагарина, 101
