Штамм бактерий viвriо сноlеrае еlтоr, используемый в качестве тест-культуры для идентификации гемолизина типа ii подтипа @ холерных вибрионов

 

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано при решении таксономии холерных вибрионов. Цель изобретения - получение штамма холерного вибриона эльтор, продуцирующего гемолизин типа II подтипа β. Штамм получен путем селекции холерного вибриона эльтор на питательных средах, содержащих эритроциты различных видов животных. Штамм депонирован под номером КМ N81. Штамм холерного вибриона эльтор КМ N81 не лизирует эритроциты овцы и человека, однако имеет выраженную литическую активность по отношению к эритроцитам морской свинки. Для обнаружения гемолизина штамм КМ N81 выращивают на мясопептонном бульоне в течение 18-20 ч при 37° и ставят пробу по Грейгу, которую зачитывают через 30 мин. При наличии в исследуемом материале гемолизина типа II подтипа β наступает лизис эритроцитов морской свинки.

СОЮЗ.СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ÄÄSUÄÄ 1602865 А1 (51)5 С 12 11 1/20, С 12 О 1/02

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМ,Ф СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И OTHPbITHAM

ПРИ ГКНТ СССР

1 (21) 4469132/30-13 (22) 29.07..88(46) 30. 10.90. B . P 40 (71) Среднеазиатский научно-исследовательский противочумный институт (72) В. Л.Семиотрочев и А.О.Цитцер (53) 576.8.093.1 (088.8) (56) Richardson К,: et al. Hemolysin

;Production and cloning of Two Нетоlysin Determinants from classical

vibrio cho1erae< — J. Infection and

Immunity, 1986, Nov., p.415-420. (54) ИТАМ11 БАКТЕРИЙ VIBRIO CHOLERAE

ELTOR ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ В КАЧЕСТВЕ ТЕСТКУЛЬТУРЫ ДЛЯ 1ЩЕНТИФИКАЦИИ ГЕМОЛИЗИНА ТИПА II ПОДТИПА / ХОЛЕРНЫХ ВИБРИОНОВ (57) Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано при решении таксономии

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано при решении таксономии холерных вибрионов.

Цель изобретения — получение штамма холерного вибриона эльтор, продуцируюцего гемолизин типа II подтипа тамм получен путем пассирования штамма холерного вибриона эльтор 149 на питательных средах, содержащих

1,5% эритроцитов овцы. На этих средах методом селекции отобран клон с заданными свойствами — не лизируюций эритроциТы овцы, продуцируюций гемо2 холерных вибрионов. Цель изобретения — получение штамма холерного вибриона эльтор, продуцирующе ro гемолизин типа II подтипа Р, штамм получен путем селекции холерного вибриона эльтор на питательных средах, содержащих эритроциты различных видов животных. 11тамм депонирован под номером И1 1 "- 81, Итамм холерного вибриона эльтор К11 Р 81 не лизирует эритроциты овцы и человека, однако имеет выраженную литическую активность по отношению к эритроцитам морской спинки. Для обнаружения гемолизина штамм 121 Р 81 выращивают на мясопептонном бульоне н течение .1820 ч при 37 С и ставят пробу по Грейгу, которую зачитывают через 30 мин.

При наличии в исследуемом материале гемолизина типа II подтипа /3 наступает лизис эритроцитов морской свинки. лизин, активный по отношению к эрптроцитам морской свинки. Птамм Vibrio

Cholerae eltor 149 Hly +type II subtype P депонирован под номером КМ

Cb

Р 81 и характеризуется следующими СЛ

; ризнаками.

Культурально-морфологические признаки. В мазках — вибрионы, в поле Аазово-контрастного микроскопа типичная для вибрионов подвижность.

Прототрой.

На жидких и плотных питательных средах образуется типичный для холерного вибриона рост: на 1%-ной гептонной воде, диффузное помутнение, 1602865 на поверхности нежная голубая пленка, на щелочном aFape — крупные, круглые с ровными краями, плоские, прозрачные в проходящем свете колонии.

Биохимические свойства. 5

Штамм разлагает глюкозу в аэробных и анаэробных условиях, маннозу, сахарозу, маннит, крахмал - образоI ванием кислоты без газа. Продуцирует ацетилметилкарбинол, индол. Декарбоксилирует лизин, орнитин. Не расщепляет арабинозу, не дегидролизирует аргинин ° Не образует сероводород.

I Обладает протеолитической активностью,1я

Серологические свойства.

Штамм агглютинируется О холерной сывороткой до титра, сывороткой OraBa до титра, с Инаба сывороткой не дает положительных результатов. 20

Фагочув ствительно сть.

Лизируется фагом Эльтор до. титра, фагами:ДФ 3,4,5 до ДРТ, относится к 10 фаготипу по Дрожевкиной-Арутюнову, не лизпруется haroM С.. 25

Чувствительность к антибиотикам.

М3К тетрациклина 0,015 мкг/мл. Растет на полимиксине — 30 ед/мл.

Реакция гемагглютинации положительная.

Реакция Фогес-Проскауэра положитель30 ная. Вирулентность для кроликов-сосунков. Обуславливает холерогенную реакцию в дозе 10 м.к.

Способ, условия хранения и состав среды для хранения штамма агар

Иартена, рН 7,2, посев уколом, сох35 раняют под вазелиновым маслом при комнатной температуре.

Пример 1. Для выявления продукции гемолизина штамм КИ Р 81 (149) выращивают на мясопептонном бульоне, рН 7,2, в течение 18 ч при 37 С, который в дальнейшем используют для постановки пробы по Грейгу, титрования в лунках полистироловых пластин или 45 наносят пятнами на пластинки агара, содержащие 1,5% эритроцитов морской свинки. В пробе по Грейгу используют

1%-ную взвесь эритроцитов морской свинки, а в.лунки пластин вносят по одной капле 2,5% этих же эритроцитов.

Указанные объекты для тестирования гемолизина ставят в термастат при 37 на 30 мин и зачитывают результат по наступившему гемолизу эрич рсщитов.

Дпя определения активности гемолизина полученную культуру центрифугируют при 8000 об/мин н в надосадочной жидкости определяют наличие гемолизина и его титр с помощью

1%-ной взвеси эритроцитов морской свинки на физиологическом растворе.

Гемолизин обуславливает лизис эритроцитов морской свинки при 37 С в течение 30 мин. Титр гемолизина 1:800.

Полученный гемолизин, продуцируемый штаммом, фильтруется через керамические свечи, лизирует эритроциты морской свинки в течение 30 мин при

37ОС как в.жидких (1%-ные взвеси эритроцитов), так и на плотных (1,5%ные взвеси эритроцитов) питательных средах. Не разрушает эритроциты человека и овцы.

Пример 2. Исследуемый штамм холерного вибриона эльтор высевают на плотные питательные среды, содержащие 1,5% эритроцитов овцы, и: после пнкубации в течение 18-20 ч при

37 С отбирают колонию, не образующую зоны лизиса. Параллельно высевают тест-культуру — штамм 149. Далее с обеими культурами ставят пробу по

Грейгу с 1%-ной взвесью эритроцитов морской свинки. Наличие лизиса эритроцитов морской свинки и отсутствие лизиса с эритроцитами овцы свидетельствует о наличии у штамма гемолизина типа ?Х подтипа . При исследовании штаммов классического биовара этап высева на плотные среды с эритроцитами овцы исключается, поскольку холерные вибрионы классического биовара продуцируют гемолизин типа II подтипа Р, с этими культурами непосредственно ставят пробу по Грейгу с эритроцитами морской свинки. В качестве контроля используют штамм 149.

Использование штамма позволяет проводить идентификацию холерных вибрионов по тесту образования гемолизина соответствующего типа. Кроме того, штамм может быть использован как носитель стабильного маркера при изучении структуры гена холерного вибриона.

Формула и з о б р е т е н и я

Штамм бактерии Vibrio Cholerae

eltor 1И Р 81, используемый в качестве тест-культуры для ипентификации гемолизнна типа II подтипа холерных вибрионов.