Транспортная среда для соrynевастеriuм diрнтнеriае

 

Изобретение относится к медицинской микробиологии, в частности бактериологической диагностике дифтерии. Цель изобретения - повышение высеваемости коринебактерий из патологического материала. В 1 л дистиллированной воды вносят (г) казеиноводрожжевой гидролизата 19-20

изатин 0,03-0,04

β-аланин 0,01-0,015

нитрат железа 0,04-0,045

глюкозу 0,6-0,7

хинозол 0,0012-0,0014. Устанавливают PH среды 7,2±0,2, смесь нагревают до 55±5°С, фильтруют и разливают в пробирки по 4,5 мл и автоклавируют при 110°С в течение 30 мин. Тампоны с исследуемым материалом помещают в среду и инкубируют 6 ч, при 37<SP POS="POST">С</SP>, затем 0,1 мл бульонной культуры высевают на среду Бучина. Учет результатов проводят через 24-48 ч. 3 табл.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИН (19) (Ш

А1

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н АBTOPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГННТ СССР

1 (21) 4615613/30-13 (22) 06.12.88 (46) 15.11.90. Бюл, 11 - 42 (71) Научно-производственное объединение "Питательные среды" (72) А,Г.Гаджиева и P.Î.Àëèåâà .(53) 576.8.093.1(088.8) (56) Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования/Под ред, M.Î.Áèðãåðà, M.:

Медицина, 1982, с. 72; (54) ТРАНСПОРТНАЯ СРЕДА ДЛЯ CORYNEBACTERIUM DIPHTHERIAE (57) Изобретение относится к медицинской микробиологии, в частности к бактериологической диагностике дифтерии. Цель изобретения — повыИзобретение относится к медицинской микробиологии, в частности бактериологической диагностике дифтеPHH °

Цель изобретения — повышение высеваемости коринебактерий из патологического материала.

Приготовление и использование среды иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. В 1 л дистиллированной воды вносят, г: казеиноводрожжевой гидролизат 19,0; изатин

0,03; P -àëàíèí 0,01; нитрат железа

0,04; глюкоза 0,6; хинозол 0,0012.

Устанавливают рН среды 7,4 0,2. Затем смесь нагревают до 55 5 С, фильтруют и разливают в пробирки по 4,5 мл, плотно закрывают пробирки «атной (g1)g С 12 Q 1/04//(С 12 Q 1/04, С 12 R 1:16) 2 шение высеваемости коринебактерий из патологического материала.В1 лдистиллированной водь1 вносят, г: казеиноводрожжевой гидролизат 19-20, из атин 0,030 04- р-аланин 0,01-0 015; нитрат железа 0,04-0,045; глюкоза 0,6-0,7; хинозол 0,0012-0,0014. Устанавливают рН среды 7,2+0,2, смесь нагревают до 55+5 С, фильтруют и разливают в пробирки по 4,5 мл и автоклавируют при 110 С в течение 30 мин.

Тампоны с исследуемым материалом помещают в среду и инкубируют 6 ч при

37 С, затем 0 1 мл бульонной культуры высевают на среду Бучина. Учет результатов проводят через 24-48 ч.

3 табл. пробкой, автоклавируют при 110 С в течение 30 мин.

Пример 2. Готовят среду по примеру 1, но ингредиенты используют в следующих количествах, r: казеиново-дрожжевой гидролизат 19,5; иэатин

0 035- Р-аланин 0 012 нитрат железа 0,042; глюкоза 0,65 ; хиноэол

0,013 г.

Пример 3. Готовят среду по примеру 1, но ингредиенты используют в следующих количествах, г: казеиново-дрожжевой гидролиэат 20,0 изатин 0,04, P алании 0 ° 015> нитрат железа 0,045; глюкоза 0,7; хиноэол

0,0014.

Технология приготовления сухой транспортно-накопительной среды иллюстрируется следующими примерами.

535 4 щивания в накопительной среде, к числу выросших колоний до обогащения.

Прирост числа дифтерийных микро5 бов при подращивании в среде обогащения равен 70-90 . Среда обеспечивает рост дифтерийных палочек при посеве

10 клеток через 6 ч выращивания при

37 С.

10 Среда обладает бактериостатическим действием по отношению к микробам .ассоциантам. Так, иэ 100 тыс. засеянных м.кл. стафилококка после 6-часового культивирования в бульоне на

15 плотной среде Бучина данный микроорганизм не растет.

Культуры дифтерийных микробов в среде могут храниться в течение 3 сут без изменения своих биологических

20 свойств (морфологию колоний, токсигенные, биохимические, серологические).

Эффективность среды подтверждена на клиническом материале от 2118 че25 ловек (617 человек больные ангинами, 1501 человек обследованы по эпид.показателям). Тампоны с исследуемым материалом помещают в пробирки с жидкой средой и инкубируют в термоста30 те 6 ч при 37 С, после чего 0,1 мл бульонной культуры, высевают на чашки со средой Бучина. Чашки помещают в .термостат. Учет результатов ведется через 24-48 ч, Повторный высев из

35 бульона на чашки производится через

20-24 ч.

Сравнительная высеваемость коринебактерий дифтерии на контрольной и испытуемой средах представлена в

40 табл.1.

Из данных табл.1 видно, что бактериологическая расшифровка диагноза была у 52 человек, в 51 случае коринебактерии дифтерии выделялись

45 на обеих средах, в 1 случае — только на испытуемой.

Результаты биологического испытания среды показали, что она не уступает контрольной по чувствительнос50 ти и скорости роста, эффективности (табл,2), селективности, выживаемости (табл.3), сохранению основных биологических свойств.

55формула изобретен ия

3 1606

Пример 4. В шаровую мельницу (З-литровую), помещают 20 шаров, затем вносят, г: каэеиново-дрожжевой, гидролизат 19,0, иэатин 0,03, 15-алании 0,01, нитрат железа 0 04 глюкоза 0,6, .хинозал 0,0012. Мельницу закрывают для смешивания ингредиентов, прокручивают в течение 1 ч.

Затем среду фасуют в банки из темного стекла..

Пример 5. В шаровую мельницу (3-литровую) помещают 20 шар: затем вносят, r: казеиново-дрожж. вой гидролизат 19,5, изатин 0,035, -алании 0,012, нитрат железа 0,042, глюкоза 0,65, хинозол 0,0013; Мельницу закрывают и прокручивают в течение 1 ч. Затем среду фасуют в бан« ки из темного стекла.

Пример 6. В шаровую мельницу (3-литровую) помещают 20 шаров, затем вносят, r: казеиново-дрожжевой гидролизат 20,0, изатин 0,04, Р-ала нин 0 015 нитрат железа 0,045, глюкоза 0,7, хиноэол 0,0014. Мельницу закрывают и прокручивают в течение ч. Затем среду фасуют в банки из . темного стекла.

При практическом использовании среды навеску в количестве 19,720,8 r вносят в колбу с 1 л дистиллированной воды, перемешивают, нагревают до 55+5 С, фильтруют и разливают в пробирки по 4,5 мл и автоклавируют при 110 С 30 мин.

Исцытание среды проводят тестштаммами С,diphtheriae У 203 С.diphtheriae 9 611, С diphtheriae 11 4465, Staphylococcus aureus 11 209-Р.

Перед высевом тест-штаммов в транс портно-накопительную среду культуры коринебактерий дифтерии смывают с физиологическим раствором и делают ряд разведений до 10, а при посеве стафилококка до 10

Качество среды оценивают по чувствительности и скорости роста, эффективности, ингибирующим. свойствам, сохранению основных биологических свойств, выживаемости.

Для определения эффективности среды используют дифтерийную культуру, содержащую в посевной дозе 100 микробных клеток.

Показатель эффективности определяют по отношению числа колоний дифтерийного микроба, выросших на плотной среде Бучина после 6-часового подраТранспортная среда для Corynebaeterium diphtheriàå, содержащая питательную основу, стимулятор росl606535 6 щем количественном отношении компонентов, г/и:

Казеиново-дрожжевой гидролиэат

Р-Алании

Иэатин

Глюкоза

Нитрат железа

Хиноэол

Дистиллированная вода 1 ë

Таблица 1

Число положительных находок

Всего проб

В том числе на обеих средах испытуемой контролькой всего Ж всего Ж всего Ж всего Ж

2118 52

2,45

98 52 100 51 98

Таблица 2

Сравнительные данные испытания среды по тесту эффективности

Колонии, сформировавшиеся на плотной среде при высеве из

Количество микробных клеток в

0,1 мл жидкой среды

ТестштаМмы 9Ô исло жизнепособ Транспортно-накопитель-. . ного бульона Сывороточного рыбного бульона леток

Коли- Прирост, Эффек- Коли- Прирост, Эффективчество раэ тив- чество pas, ность. X ность,Ж

3

2ОЗ 10

611 10

4465 10

4. 75 3,7 72,7

4 75 3,3 70

6,7 85 4,3 77

11

12

12

П р и м е ч а н и е. Приводятся данные иэ 5 параллельных опытов (при коэффициенте вариации, не превышающем 20X)< та, селективный агент, о т л и— ч а ю щ а я с я тем, что, с целью поввппения высеваемости коринебактерий из патологического материала, она дополнительно содержит нитрат железа, 5 глюкозу и дистиллированную воду, в качЕстве питательной основы она содержит каэеиново-дрожжевой гидролизат, в качестве стимулятора роста — изатин и -алании, в качестве селективногО агента — хинозол, при следую19-20

О, 0 l 0-0, 015

0,03-0,04

0,6-0,7

0,04-0,045

0,0012-0,0014

1606535

Таблица 3 анные оста к..льт С.di htheriae no

Сравнительные д р у ур р теСту выживаемости (посевная доза

10 м/кл) Колонии, сформировавшиеся на среде Бучина при высеве из

Время куль" тивиТранспортно-накопительного бульона

Сывороточного рыбного бульона рования, ч

99 тест штаммов

203 611 4465

)) -Р тест-штаммов

4465

203 611

П р и м е ч а н и е. Данные приводятся из 5 параллельных опытов (при коэффициенте вариации не превышающем 20#).

Составитель Г.Смирнова

Редактор Н.Киштулинец Техред М,Zоданич Корректор А.0бручар

Заказ 3528 Тираж 484 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина, 101

2

6

)2

24

48

1

2

Много трудно считать

1

2,5

298

Много, трудно считать а

Нет роста

2

17

112

Много, трудно считать

1

2

1500:

Нет роста

2

16

71

„й 500

0,5

Нет роста

2

49

%500