Штамм микроскопического гриба aspergillus niger van тiеgнем, используемый в качестве тест-культуры для определения микологической стойкости технических масел, применяемых в тропическом климате

 

Изобретение касается биоповреждений технических материалов и может быть использовано для оценки грибостойкости технических смазочных масел, применяемых в тропическом климате, в лабораторных условиях. Целью изобретения является получение агрессивного штамма микроскопического гриба-деструктора технических смазочных материалов, применяемых в условиях тропического климата, безопасного для здоровья людей. Цель изобретения достигается тем, что в качестве тест-культуры при определении грибостой кости технических масел, используемых в тропическом климате, используется штамм ASPERGILLUS NIGER BKMF-3080D, который впервые выделен из масла ИПМ-10, находившегося на хранении в течение полугода в условиях тропического климата Республики Куба. Штамм развивается на всех 19 испытанных марках технических масел, причем степень поражения 15 образцов масел оценивается в 3 балла, а остальных - в 2 балла. При развитии на маслах штамм значительно увеличивает их кислотное число, а также изменяет вязкость. 2 табл.

Соаа СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСИИХ

РЕСПУБЛИН

„„Я0„„1 604844

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

И A B7OPCHQMV СВйД-:-ТЕЛЬСТВО

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГННТ ССа (21) 4643647/31-13 (22) 30. 01,89 (46) 07. 11.90. Бжп. Е - 41 (72) Е ° Г„Торогова, Г.В. Матюша, A.À. Самунина, A.À. Герасименко, Т.П, Сизова и Л.Г. Иванова (53) 576,8 .095(088 .8) (56) Авторское свидетельство CCCI

6 1060677, кл. С 12 N 1! f4, 1981.

Масла и смазки. Методы лабораторных испытаний на стойкость к воздействию плесневых грибов. ГОСТ 9,05288. (54) ШТА1И МИКРОСКОПИЧЕСКОГО ГРИБА

ASPERGTLLUS NIGER VAN TTEGHEN„

ИСНОЛЬЗУЕМЫИ В КАЧЕСТВЕ ТЕСТ-КУЛЬТУРЫ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ МИКОЛОГИЧЕСКОЙ

СТОИКОСТИ ТЕХНИЧЕСКИХ МАСЕЛ, ПРИМЕНЯЕМЫХ В ТРОПИЧЕСКОМ КЛИМАТЕ (57) Изобретение касается биоповреждений технических материалов и может быть использовано для оценки грибостойкости технических смазочных масел, применяемых в тропическом климаИзобретение относится к области биоповреждений технический материалов и может быть использовано для оценки грибостойкости технических смазочных масел, применяемых в тропическом климате, в лабораторных условиях.

Цель изобретения -. получе:1ие аг— рессчвного штамма микроскопического гриба-деструктора технических смазочных материалов, применяемых E ус-. (I)5 C 12 N 1714, C 12 Q 1!18!! (C 1 N 1/14 C 12 R те, в лабораторных условиях. Целью изобретения является попучение агрессивного штамма микроскопического гриба-деструктора технических смазочных ма "ериалов, применяемых в условиях тропического климата, безопасно-.о для здоровья людей. 1!ель изобретения достигается тем, что в качестâå тест-куль".Уры при определении грибостойкости техн.1ческих масел, используемых в тропическом климате, используется штамм Asperpillns niger

IIIGCF-3080Д, который впервые выделен из масла И1Г1- 10„находившегося на хранении в течение полугода в условиях тропичсского климата Республики

Куба. Штамм развивается на всех 19 испытанных марках техни;еских масел, причем степень поражения 15 образцов масел оценивается в 3 балла, а ос.— тальных - в 2 балла. При развитии на маслах штамм значительно увеличивает их кислотное число, а также изменяет вязкость. 2 табл. ловиях тропического климата, безопасного для здоровья людей.

Штамм Азрег@i11us niger van Tieghem 2К-10 выделен из масла ИПМ-10 в июне 1987 года и депонирован во

Всесоюзной коллекции микроорганизмов, Это масло находилось на хранении в течение полугода в условиях тропического климата Республики Куба.

Штамм характеризуется следующ1ми признаками.

1604844

55

Культурально-морфологические свойства.

Колонии гриба на восьмой день роста при 30 С на агаризованной сре-

5 де Чапека имеют диаметр б см. На среде сусло-агар — 8,5 см. Колонии коричневат о-ч ер ног о цв ета, видимая часть колонии состоит из длинных конидиеносцев (1-1, 5 мм высоч ой), отходящих от субстратных гиф. Обратная сторона колонии складчато-морщинистаЯ блецно-желтоватого цвета.

При рассмотрении на месте роста головки конидиеносца крупные, радиальные (до 1000 мкм в диаметре, но чаще — мельче, т.е. 250-300 мкм).

Конидиеносцы гладкие, с толстыми стенками, бесцветные,.но под вздутием конидиеносца — светло-желтые, Пузырь конидиеносца крупный, округлый, 20-50 мкм в диаметре, иногда больше., Профиалиды расположены на пузыре плотно, размер их 25-30 х 5-7 мкм.

Фиалиды в количестве 4-5 в пучках на каждой профиалиде величиной 6-10 х, х 2-3 мкм. Конидии круглые, вначале бесцветные и гладкие, затем — коричневые, шиповатые, диаметром большей частью 2,5-3,5 .мкм. Склероции у данного штамма отсутствуют.

На масляно-минеральной среде в соотношении масло:среда 2:5 и инкубировании в пробирках в термостате при

30-35 С на 5-8 сут появляется рост

35 на границе раздела водно-масляного слоя, который со временем увеличивается до плотного черного осадка волокнистой формы. Состав минеральной среды, %: NANO> 0,2-0,35; MgSOg

0,35 — 0,6; KH 70g 0,07-0,15; КС1 0,15О, 25, вода водопроводная остальное.

Температурный минимум роста составо О ля ет 5 С, оптимум 30-3 5 С, максимум

45 С.

Фи эи ол огич ес ки е признаки .

Штамм способен активно расти на технических смазочных маслах. OTHO шение к источникам углерода: штамм хорошо усваивает сахарозу, глюкозу, сорбит, маннит, крахмал, хуже — глицерин и целлюлозу. Отношение к источникам азота: хорошо усваивает ñ6— аспарагин„ DL-g.-аланин, DL-ь(;лейцин, L-rëvòамин, хуже DL-аспарагиновую кислоту, L-глутаминовую кислоту, мочевину, азотнокислый аммоний, азотнокислый натрий, сернокислый аммоний.

Штамм хорошо растет на сусло-агаре, на среде Чапека, на масляно-миФ неральной среде при рН 6-11 и 30-35 С.

Антибиотическая активность на среде

Чапека по отношению к левомицетину, тетрациклину и эритромицину у штамма

Aspesgillus niger van Tieghem ВКИГ3080Д выражена слабее, чем у Asperя11lus niger van Tieghem BKMF-1119.

При испытании методом перпендикулярных штрихов подавляет pocт Сhaetomium globosum Kunze, Trichoderma

viride Pers, ех. Pr, S.P. Gray.

его развитие не подавляется другими видами грибов.

На образцах технических масел различных марок Aspergillus niger van

Tieghem BKMF †308 чаще всего развивается с Penicillium chrysogenum u бактериями рода Bacillus. С разной интенсивностью Aspergillus niger van

Tieghem BKHP-308ОД растет на технических маслах.. Предлагаемый штамм не патогенен.

Пример 1. Лабораторные испытания грибостойкости технических смазочных .масел в лунках минеральной среды в чашках Петри. Проводят испытания 19 марок технических масел.

Оценку поражения исследуемых образцов масел осуществляют по 4-бальной системе: Π— полное отсутствие роста микроорганизмов в образце; 1 — зарастает 25Х поверхности образца;

2 — зарастает 50Х поверхности образца; 3 — зарастает 100% поверхности образца. За конечный результат принимают цифру, соответствующую усредненному значению степени эарастания материала в каждой из пяти лунок, Результаты приведены в табл ° 1.

Из табл. 1 видно, что штамм

BKMP-308ОД развивается на всех испытанных маслах различных марок.

Причем он весьма агрессивен, так как степень поражения 15 образцов масел оценивается в 3 балла и только четырех образцов — в 2 балла. Эти результаты свидетельствуют о высокой агрессивности штамма Aspergillus niger van Tieghem BKMF-3080Д.

Пример 2. Изменение фиэикохимических свойств масел и рН водных фракций под воздействием штамма гриба А.niger BKMP-3080Д.

Для определения влияния исследуемого штамма грибов на физико-химические показатели технических масел

160ч844

1 последние заражают суспензией спор гриба и инкуб«руют в колбах на качалках. Испытуемые образцы масел в копичестве 70 мл наливают в колбы

Эрленмейра объемом 750 мл, куда вно сят 30 мл посевного материала, приготовленного в водопроводной воде, Колбы с опытными образцами помещают на качалку, вращающуюся со скоростью

200 об/мин и инкубируют E течение

30 сут при 30 С, 0 развити« микроскопических грибов в поставленных на испытания образцах судят по изменению внешнего вида масла, образованию эмульсий и накоплению волокнистого черного мицелиального осадка в сравнении с контролем, Контролем служат масла с добавлением стерильной водопроводной воды.

По истечении заданного срока культивирования штамма гриба в колбах на качалке проводят QIIpеделение некоторых физико-химических показателей масел. Для этого содержимое колб переливают в делительные воронки.

При отстаивани! образуются 3 слоя. верхний — масло, средний — тела ми- кроорганизмов, нижний — водный слой ..

После отслаивания верхний слой масла деконтацией сливают в отдельные стаканчики. Для удаления из масла следов воды стаканчики ставят в сугш.гльный шкаф, где выдерживают при

120 С в течение 2 ч (в отсутствии воды убеждаются пробой на потрескивание). После этого определяют вязкость и кислотное число во всех поставленных на испытания пробах.

Определяют вя" êîñòü масел и кислотное число. Нижний слой (водную фракцию) сливают из делительных воронок в стаканы и определяют величину его pH.

Изменение физико-химических свойств масел и рН водных фракций под воздействием штамма гриба А.niger приведены в табл, 2;

Из табл. 2 следует, чтс штамм

ВКМР-3080Д при использовании в качестве единственного источника углерода технических масел MC-8РК, ИК-8 +

+ 10% Акор-1 ИПМ-10, AMI — 10 и

ВНИИНП 30 1 чф значительно увеличи вает кислотное число указанных марок масел. В меньшей степени, но также значительчо штамм ВКИР-3080Д изменяет «вязкость масел. Изменение физикс-химических показателей масел под действием выделенного из тропического климата штамма ВЬЮГ-3080Д говорят о значительной его агрессивности по отношению к исследуемым техническим маслам, Таким образом, Aspergillus niger

van Tieghem ЭКЮ-3080Д способен активно развиваться на технических маслах широкой номенклатуры, используя их в качестве единственного источника углеродного питания, при этом он изменяет в большой степени кислотное числе и вязкость. Уменьшение (сдвиг) рН водных фракций после развития штамма ВКМР-3080Д в маслах свидетельствует о выделении кислых продуктов метаболизма, способных приводить к интенсификации процессов коррозии стальных деталей, контактирующих с техническими маслами. Все этс позволяет рекомендовать выделенный штамм для использования его в качестве одного из перспективных и безопасных для здоровья человека тест-организмов при проверке грибостойкости технических масел в процессе «х разработки для промыгпленного применения в странах с тропическим климатом.

Формула из о бр ет ения

Штамм микроскопического гриба

Aspergillus niger van Tieghem BIMl3080Д, используемый в качестве тесткультуры,для определения микологической стойкости технических масел„ применяемых в тропическом климате.

1604844

Та блица 1

Штамм гриба Aspergillus niger чап

Tieghem ВКМГ-3080Д

Марка масла

АМГ-10

MK-8

Акор-1

МК-8+10 Акор-1

ВНИИНП-50-1-4Ф

KIM-10

МН-7,5у

МН-7,5РК

MC-8п

МС-8РК

К-1 7

MC-29п

М-14ГБ

MT-16п

ТС-14, 5+хлор еф

АС-8

ДС-8

ТАП-15В

ГТЖ-22РК

Таблица 2

Марка масла

Штамм BIFF-3080 jl, Вязкость, мм /с, при

50 С рН

Кислотное число масла, (мг КОН на

1 г) 4,56

7,86

4,32

7,9

6, 09.

7,56

4,63

7,71

Составитель И. Болотина

Техред М.Ходани г

Корректор А. Осауленко

Редактор EI. Яцола

Заказ 34 34 Тираж 500 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина,101

MC-8РК

Контроль

MK-8 + 10 Акор-1

Контроль

HIIM-1 О

Контр оль

АМГ-10

Контроль

ВНИИНП-50-1" 4Ф

Контроль

1,03

О, 129

0,51

О, 029

0,81

0,042

1,12

О, 026

6,23

0,252

3

3

3

3

3.

2

3

3

2

9,36

9, 155

12,13

10,90

9,59

9,46

7,82

10,60

7,42

9,22