Способ получения пептидов
Изобретение касается пептидов, в частности получения пептидов общей ф-лы R-(A)-S-CH<SB POS="POST">2</SB>-chr<SB POS="POST">1</SB>-C(O)-R<SB POS="POST">2</SB>, где R-бензоил, циклопентакарбонил, ацетил, пропаноил, бутаноил или водород, A = L-и D-фенилаланил, D-аланин, D-триптофан, D-лейцин R<SB POS="POST">1</SB>=CH<SB POS="POST">3</SB> R<SB POS="POST">2</SB>=L-пролил, обладающих антигипертензивной активностью, что может быть использовано в медицине. Цель - создание новых активных и устойчивых к гидролизу (IN VIRTO)пептидов. Синтез ведут реакцией соединения H-(A)-S-CH<SB POS="POST">2</SB>-chr<SB POS="POST">1</SB>-C(O)-R<SB POS="POST">2</SB> с R-галогенидом при указанных значениях A, R, R<SB POS="POST">1</SB> и R<SB POS="POST">2</SB>. Новые пептиды в сравнении с каптоприлом активны при концентрации в 2,5 раза меньшей и, более длительном действием. 4 табл.
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ
РЕСПУБЛИН
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Н IlATEHTY
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ
ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ
ПРИ ГННТ СССР (21) 4015511/23«04 (62) 3263400/23-04 (22) 28,01.86 (23) 09е03е81 (31) !28953 (32) 10 .03 ° 80 (33) US (46) 23,11,90, Бюл, М - 43 (71) Дзе Юниверсити оф Иайами (US) (72) Джеймс Вальтер Райан и Альфрэд Чанг (US) (53) 547.964.4,07(088.8) (56) Вейганд Хильгетаг, Современные методы зксперимента в органической химии - Ма Химия 1968 .с 413 (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПЕПТИДОВ (57) Изобретение касается пептидов, в частности получения пептидов общей
Изобретение относится к способу получения пептидов - новых биологически активных соединений, которые могут найти применение в медицине, Цель изобретения - способ получения новых пептидов, малотоксиЧных, обладающих высокой антигипертензив ной активностью, более устойчивых .
in vitro.ê гидролизу.
Используются следующие сокращения: АСЕ .- ангиотензинконвертирую щий фермент, А1а — L-алании, Arg—
Ьаргинин, Asp — L-аспарагиновая кис лота, Бок - трет-бутилоксикарбонил, Бпок - 2-(4-бифенил)-.2-пропилоксикарбонил, Бз - бензаил, Кбо - бензилоксикарбонил, Ддак - I ".L,L-диметил«3,5™диметилаксикарбонил, Гли гли„„SU„„1609455 А 3 (51)5 С 07 K 5/08//А 61 К 37/02
2 ф" К-(А) Б-СН, -СНК,-С(О)-К, где R. — бензоил, циклопентакарбонил, ацетил, пропаноил, бутанаил или водород, А = L- и П-фенилаланил, В-алании, D-триптофан, D-лейцин;
R» = СН, R — — L-пролил, обладающих антигипертензивной активностью, что может быть использовано в медицине, Цель - создание новых активных и ус-. тойчивых к гидролизу (in uirto) пептидов, Синтез ведут реакцией соединения Н-(А) -Б-СН -СНК„ -С(0) -Кд с
R-галогенидом при указанных значениях А, R, R» и R . Новые лептиды в сравнении с каптоприлом активны при концентрации в 2,5 раза меньшей и отличаются более длительным действием, 4 табл. церин, His — L-гистидин, Ill — L-изолейцин, Leu — L-лейцин, Phe — Ь-фенилаланин, Фпок - 2-фенилизопропилоксикарбонил, Pro — L-пролин, Д1 ro
L-3,4-дегидропролин, Ser — Ь-серик, Trp — Ь-триптофан, Tyr — L-тирозин, Val — L-валин °
Системы растворителей для хроматографии в тонком слое силикагеля (по объему):
R (1) - метанол - хлороформ 1:l:
R (?) - бензол - водя — н-бутанол 9:l:9;
К (3) " уксусная кислота - водан-бутанол 26:24-:!50
R (4) - н-бутанал - пиридннуксусная кислота - вада, 15:10:3:12;
55 (5) - н-б;:тапол — уксусная .èñ1 пото — этилацетат - вода
1:1:1:.1;
R (6) ™ хлороформ - метанол
1 уксусная кислота 2. "1:
0,003;
В ) (7) — н-бутон »! - уксусная кис лота - вода 4:1:1;
R (8) - этилацетат - уксусная
1 кислота 38: 2.
"MP-спектры получены при 60 МГц„
I )начения - концентрация с
so
50/-ной инг))бп1-ующей активностью по отношению к превращающему ангиотен"" син фермеьЕту, Систем» испытания: 1 мл инкубируемой смеси, содержащей 0,6 мл боратного буфера, 0,2 мл 17,5 ммоль бензоил-Cly-His-Leu в боратном буфере, соединения в боратном буфере и раствор фермента, инкубирование при
37 С н течение 60 мин»
Боратныи буфер: 0,1 M раствор борной кислоты, содержащий 0,8 M NaC1 и 0,1 М NazCO, содержащий 0,8 M
ЕЕаС1, смешивают и доводят до рН 8,3, ACE - порошок легкого кролика в ацетоне, Определения: УФ-поглощение при 2?8 нм после экстрагирования бензоил»
-Gl y-этилаце татом, 1I p M e po 5I - !3-(N-трет-бутил окс ик а рб о нил-L-фенилал анилтио) -2-D-MeTnenporravosmj-L-пролин»
К раствору 2,65 r Вос-Е-Phe в о
20 мл ТГФ при -20 С добавляют 1,95 г
N,N-карбонилдинмидазола (КДИ) в
20 мл ТГФ и результирующий раствор о перемешивают при -10 С в течение 1.ч
Затем добавляют 2,17 r N-(меркапто-2-D-метилпропаноил) Е-пролина при
20 С и перемешивают 10 мин при той же температуре и еще 50 мин перемешива)от при комнатной температуре, Растворитепь отгоняют при пониженном давлении при 30 С и к остатку добав о ляют 200 мл AcOEt и 50 мл воды. Смесь доводят до рН 1,5 добавлением 2 н раствора НС1 при перемешивании и . охлаждении на ледяной ванне»
Органический слой дважды промыва*" ют насыщенным раствором NaC1 и орга"" н ческий растворитель отгоняют на центробежном испарителе после осу)яз» ния над безводным М@$04. Остаток очищают с помошью хромо " rot ðàôèï в колонке на $10z (2 см х х 5 см), что дает 4,49 г (977)
С
I i 3-(! ) трет-бутилокс скарб опил-*L5 !
О !
-фенилоланилтио) ™2-D™ìåòил)) ро)) анен.))."
"L-пролина, В.) (1) 0,6; R (2) 0,76, 0,82; R((3) 0,68, О, 72; аминокислотный анализ: рН 1,00, Pro 1,00.
К раствору 1,0 г указанного соединения в 2,1 мл анизола при перемешивании и охлаждении на ледяной ванне добавляют 1,61 мл трифторуксусной кислоты (ТФУК) и перемешивают ч при комнатной температуре. Растворитель отгоняют при пониженном давлении и 30 С, к остатку добавляют эфиро ный раствор НС1 и результирующий осадок несколько раз промывают диэтиловым эфиром.
К суспензии указанного осадка в
15 мл AcOEt при перемешивании и охлаждении на ледяной ванне добавляют
0,793 мл N-этилморфолина и 0,243 мл бензоилхлорида Реакционную смесь перемешивают 1 ч при комнатной температуре ° После добавления 2 мл воды к смеси ее рН доводят до 1,0 добавлением 2 .н раствора НС1 при пере мешивании и охлаждении на ледяной ванне.
Органический слой дважды промывают насыщенным раствором NaC1, а органический растворитель отгоняют на центробежном испарителе после осушения над безводным И@$04 .
Остаток очищают хроматографией в колонке на SiOz (2 см х 33 см), что дает 800 мг (81,0Z) продукта в виде масла.
В указанных условиях получают следующие соединения
N --!3-(ЕЕ бензоил-Ь-фенилаланил» тио)-2-D-метилпропаноил) -L-пролин, мол. м ° 468;fc) J = -116,8;
Rg (1) 0,52; Ry (2) 0,7; Rg,(3)
0,56; Rg (4) 0,61; R g (5) 0,75;
R g (6) 0,56; В. (7) 0,74, ЯМР 3 (CDC1 + CD OD): 1,19 (3H> шир д СН ) 1 5 2 4 (4Н,.м», СН ); 2,5-3,3 (5Н,:м,, СН и CHz)
3,3-3,8 (2Н, м., CH )! 4,0-4,4 (ЕН, м», СН ); 4,8-5,2 (1Н,:и., СН);
7,23 (5H, с», ароматические Н);
7,2-7,9 (5H,:м., ароматические Н);
3,4 х 10.
N - ((3-L-фенилаланилтио)-2-Р-метилпропан пл -Е -пролин: R (1)
0 51; К (4) О 52; Rg (5) О 5!", К (8) О,!. N 3-(N -бензоил-D."ôåí)!.!à.:! «нпл-: !! о -П-метнплрона)) он )-! -) р- лчч
5 16
ГоГ) = -25,1; В (6) 0 56; R((7)
0,74;
+ Ы)з(Ю) 1 ° 19 (ЗН, шир,д,, CH ); 1 5-2,4 (4Н, м,, СН ); 2,5-3,3 (5H, м», СН и CH );
3,3-3,8 (2Н :м., СН ); 4,0-4,4 (1Н, м», СЦ); 4, 8-5, 2 (I Н,: м °, СН);
7,23 (5Н,:с», ароматические «Н); 7,27,9 (5H, м., ароматические Н) °
М
N (2-(Н -бензоил -L-фенилаланилтио)-пропаноил -Ь-пролин: R (I)
0,58; R((2) 0,78; Ry (3) 0,59;
R4 (4) 0,59.
N -(2-(N -бензоил-L-фенилаланилoL тио) пропаноил J-1.-3, 4-дигидропролин:
Rg (2) 0,73; Rg (3) 0,59; Rg (4)
0,615; Ry (5) 0,73 °
N -13-(N -бензоил-D-аланилтио)2-D-метилпропаноил)-Ь-пролин:
Р 1р = -103 ; Rg (6) 0,58; Ry (7)
0,75;
SIMP О (CDC1 ): 1,19 (ÇH, шир,д., СН ); 1,48 (ÇH, д, СН ); 1,724 (4Й, м,, СН ); 2, 5- 3, 2 (ЗН, м., СН и СН ); 3,25-3,8 (2Н,:м., СН );
4, 2-4, 7 (I Н,: м», СН); 4, 89 (1Н, кв,, СН); 7,06 (IН, д., NH); 7,3-8,0 (5H .м., ароматические H) 10 21 (I Н, . с., СООН), N $3-(11";бензоил-Р-триптофилтио)-2-0-метилпропаноил 1-Ь-пролин: (о )р= -33,1: Ry (6) 0 56; Rg (7)
0,73;
SIMP 3 (CD OD): 1, 1 (ÇH, шир,д,, СН ); 1,65-2,3 (4Н,:м., СН ); 2,63 1 (ЗН,:м., СН ); 3 2 3 7 (4Н, м», СН и СН; 4»054»35 (IH» Mà»» С11)
4, 8-5, 1 (I Н, м., СН); 6,88-7, 82 (10Н,:м», ароматические Н).
Ф-t3-(N -бензоил-Э-лейцилтио)-2
Ы
-D-метилпропаноил -,-пролин: Ы.1
= 59 ; " (6) Q,58; Rg (7) Q,82;
I .ЯМР Е (CLOD): 0,99 (6Н, шир д
CH ); 1 22 (ЗН шир»д СН ) 1»5
24 (7Н, м., CH и CH ); 25-3, 15 (ЗН; м,, СН и CHz); 3,4-3,9 (2Н,:м,, CH ); 4,1-4,45 (1Н, м., СН); 4,6-5,0 (IН, м., СН); 7,5-8, 1 (5Н,:м., ароматические g).
Н - (3-(И -трет-бутоксикарбонил-Еаланилтио)-2-D-метилпропаноил)-L-пролин: $ 3>= -62,5 ; R (6) 0,59;
В (7) 0,73;
ЯМР 8 (СВС1. ): 1,2 (ЗН, р д., СН З); 1, 24 (9Н, с., С113 ); 1, 39 (ЗН, д»» СН ); 1,7-2,4 (4Н, и., СН ); 2,53,3 (ÇH,; », С11g и С11- ); 3,3-3,9
09455 6 (2H, т», СН ); 4,1-4,9 (2Н, м, NH);
7,85 ()Н, с., СООН).
N -1 3-(N -ацетил-Lôåíèëàëàíèëòèo)-2-Р метилпропаноил Е-пролин: мол, 1вес 406; Rg (1) 0,47; Ry (2) 0,65;
Rg (3) 0,45; Rg (5) 0,64; Rg (6)
Q, 54, R g (7) 0,59; аминокислотный анализ: Phe 1,00, Pro 0,89;
ЯМР g (СРС1з): 1,17 (ЗН, шир.д
СН1); 1, 75-2, 35 (4Н,:м,, CHz); 1,91 (3H,:с., СН ); 2,55-3,25 (5H, M °, СН и CH<); 3,4-3,8 (2Н, м», CH );
4,1-4,6 (IH, .м., CH); 4,6 5,0 (1Н, 15 м., СН); 6,63 (1H, д», NH); 6,82 (1Н, с., СООН); 7, 17 (5H, шир,с,, ароматические H).
N -- 3-(Ф -циклопентилкарбонил
-1 -фенилаланилтио)-2-D-метилпропа»
2О ноил7"?.-пролин: R (1) 0,48; R (2)
0,73; В. (3) 0,62; Кт (5) 0,72 °
N -t3-(N -циклопейтилкарбонилЫ
-1 -лизил-L-фенилаланилтио)-2-Р-метилпропаноил -Ь-пролин: R< (3) 0,16;
25 Rg (4) 0,52; Ry (5) 1,58.
N --1 3-Ф -пиро-Ь-глютамил-Ь-фенилю( аланилти:.>)-2-0-метилнропаноил)-1пролин: Rg (1) 0,43, 0,45; Rg (2)
0,63; Rg (3) 0,48; В (5) 0,75; аминокислотный анализ: Glu 0,99, Phe
1,00 Pro 1,07 ° Д- (2- (N -ацетил-L-фенилаланил0 о тио) пропаноил)-Е-пролин: (Ы =-44, 4
Rg (6) 0,83.
Ы
N -(3-(N -ацетил-D-аланилтио)-2-2 D-метилпропаноил -L-пролин Pg =
= -72,3 °
N -L3-.(N -пропаноил-D-аланилтио) м ОЕ
-2-D-метилпропаноил -пронин: .:
4О ( N -13-(N -бутаноил- Раланилтио)М г -2-D-метилпропансил) -L-пролин: (0 = -57 9О / г .Ю N -1 3-(Ь -циклопентилкарбонил-D45 -аланилтио) -2»D-ме тилпропаноил) -1.пролин: ГЫ ()= -47,2; Ry (6) 0,62; Rg (7) 0,74; SlMP Р (CDC1 g + CD gOD): 1,2 (ЗН, шир.д., СН ); 1, 38 (311, д., CHZ); 1,5-2,4 (!2Н, м., CH ); ?,4-3,2 (4H, м»» СН и CII ); 3,3- 3,8 (2Н, м», СН ); 4,2-4,8 (2Н, м„, Clk). г < N — - (3-(N :-пропаноил-D-триптофилтио)-2-D-метилпропанопл1 -1.-пролин: 55 ГЛ= -28,6; Ry (6) l!, ; R (7) 0,75; (С 301 ) 1 (11 СН 3) 1,08 (ЗН, шир.д., (;11,,); 1. 3-?,5 (4Н, .м., СН»)» 2 2 (2Н кв» -1 -) 1 2» 5 1609455 7,5) жидкость.3,1 (3Н,-M. СН и СН ); 3,1-3,9 (4Н, .м.„ CH ) 4,1 4,5 (1Н, м,, СН); 4,75,0 (1Н,:м., СН);.6,95 7,8 (5Н,:м., ароматические Н)„ М Г: .,К N — З-(N -ацетил-13лейцилтио)-2" -П-метилпропаноил)-Ь-пролин: ОД = оС и< 29,5; Rg (6) 0,55; Ry (7) 0,59» N - 3»(N -ацетил-D-валилтио)-2-0-метилпропаноил)-Ьпролин: Pg) = 10 73,8 Проведены биологические испытания Соединений, полученных в условиях предлагаемого способа. Проведены предварительные испытания на крысах, сравнивающие противогипертонические характеристики каптоприла и четырех соединений по изоб» ретению, В табл,1 показан средний процент . (Х) ингибирования индуцированного повьппенного давления, вызванного введением 0,4 ммоль/кг каждого из указанных соединений„ Из приведенных данных видно, что несмотря на колебания эффективности в зависимости от времени и конкретного использования предлагаемого соединения проявляются эффекты, которые сопоставимы с эффектом каптоприла при выбранном уровне дозировки. Причем столь высокие уровни дозировки каптоприла сопровождаются сравнительно высокой частотой появления неже" 35 лательных побочных эффектов у чело,века - это обусловливает много меньший уровень дозировки при реальном клиническом лечении людей, Предлагаемые соединения существен-,40 но более стабильны, чем каптоприл. как в биологических средах, так и в прочих условиях Это доказывается их стойкостью к немедленному гидролизу и K j, БИФМ C.0, 154 М фосфатньй буфер (рН 2,5Х 105, ОООх g надосадочная 10 мМ целевое соединение в условиях сильно гидролитической среды и сравнительно длительной сохраняемостью. Представленные данные in vitro демонстрируют характерную стабильность многих из этих соедине ний в условиях разлагающихся сред плазменных и тканевых гомогенатов (табл» 2). Использованные методики гидролиза in vitro. А. Инкубационная смесь: 1 мл IOX-, ного гомогената печени крыс (0,1 M калий-фосфатный буфер, рН 7,4) + lмп испытуемого соединения 2 х 1(Г M в том же . фосфатном буферном растворе, Метод анализа: 100 мкл отбирают из инкубационной смеси, депротеинизиру" ют добавлением 200 мкл этанола и центрифугируют На жидкостную хроматографию высокого давления направляют 20 мкл надосадочной жидкости, В, Инкубационная смесь: 1 мл 5Хного гомогената печени-крыс (0,1 M калий-фосфатный буфер, рН 7,4) + 1 мл испытуемого соединения 2 x IO M в roM же фосфатном буферном растворе ° Метод анализа: 100 мкл отбирают из инкубационной смеси, затем добавляют шесть капель, 1,0 н НС1 и 5 мл этилацетата. После механического перемешивания в течение 10 мин и центрифугирования в течение 10 мин упаривают отобранный этилацетатный слой ° Остаток растворяют с помощью 1 мл воды, затем добавляют 0,5 мл 0,4 М фосфатного буфера (рН 6,85) и 5 мкл 5 х х 10 M БИФМ и оставляют стоять в -3 течение 40 мин при 0 С. Измерение проводят на линии возбуждения 310 нм и линии испускания 365 нм (предел: 0,14 r каптоприла). БИФМ: N-1п-(2 бензимидазои фенил1-малеимид N SR О -R- -Я-ф О Флюоресценция 1 5 мл 0,5 0,1 Всего:2,1 мл 7 С, О, ЗО, 60, ) 120 180 мин 100 мкл инкубационной смеси метанол 200 икл встряхивание и центрифугированне 10 л надосадочной жидкости ЖХВД ! 6094 Условия ЖХВД: колонка "Бондапак С18", смесв растворителей СН СН 0,1Х гидроокись тетраметиламмония- детектор; 220 нм, расход 1 мл/мин. D ° Инкубационная смесь: 1 мл кры синай плазмы (0,1 М калий-фосфатный буфер, рН 7,4) + 1 мл раствора испытуемого соединения (400 мкг/мл того же буфера). Метод анализа: 100 мкл отбирают иэ реакционной смеси, затем депротеинизируют добавлением 200 мкл ECOH и центрифугируют, 20 л надосадочной жидкости направляют на ЖХВД, .Е. Инкубационная смесь: 1 мл 20Хного гомогената кишечника крыс (0,1 М калий-фосфатный буфер рН 7,4) + 1 мл раствора испытуемого соединения (400 г/мл того же буфера) ° Метод анализа: 100 мкл отбирают из реак« ционной смеси, затем депротеинизируют добавлением 200 мкл EtOH и цент" рифугируют, 20 мкл надосадочной жидкости направляют на ЖХВД, F. Инкубационная смесь: 1 мл 203- 25 ного гомогената крысиной печени (0,1 M калий-фосфатный буфер, рН 7,4) + 1 мл раствора испытуемого соединения (400 г/мл того же буфера). Метод анализа: 100 мкл отбирают из 30 реакционной смеси, затем депротеинизируют добавлением 200 мкл ECOH u центрифугируют, 20 мкл надосадочной жидкости направляют на ЖХВД„ Характерная стабильность этих соединений подтверждается данными in vivo, демонстрирующими, что в большинстве случаев существенный процент исходного соединения остается в кровотоке в течение мноГих минут после введения крысам. Внутривенное введение. Двум крысам расы 5D делают внутривенную инъекцию 36 мг N- (3-(N-бензоил-Ь-фенилаланилтио)-2 D-метилпропаноил11-про45 лина (В 1-Phe- SQ) и Ь- (3- (N-бензоил-Э-фенилаланилтио)-2«D-метилпро паноил1-L-пролина (Bz-L- Phe- SQ) в 0,5 мл О,1 M NaHCO> . Крысы имеют массу каждая 360 г и голодают в те чение 21-ч до инъекции» Концентра- ции в плазме введенных инъекций соединений и их гидролитов, бензоил«Э фенилаланина (Bz- D-Phe) и бензоилЬ-фенилаланина (Вг-L- Phe) измеряют 55 с помощью жидкостной хроматографии (табл. 3) ° Оральное введейие. 100 мг Б j3-(бензоил-1-фенилаланилтио)-2» 55 10 -D-метилпропаноил -L-пролина на килограмм массы тела вводят орально крысам массой 350 r, голодавшим в течение ночи Испытательный раствор содержит 20 мг N-(3-(бензоил-Ь-фенилаланилтио) 2Р-метилпропаноил) -1 пролина в 1Х-ном водном растворе гуммиарабика, Пробы отбирают периодически с помощью интактного кровообращения в энтерогелатической системе, Концентрации N-1 3-(бензоил-Ь-фенилаланилтио)-2-D-метилпропаноил -Ь-пролина и его гидролита, бензоил-1-фенилаланина в плазме из воротной вены и в токе желчи измеряют с помощью жидкостной хроматографии (табл.4), В указанных условиях каптоприл быстро разлагается до своего дисульфида и других метаболитов, которые неактивны как ингибиторы. По прошест вии 66 мин инкубирования с плазмой крыс, человека, обезьяны и собак количество .неизменного S-каптоприла составляет соответственно 0,7, 10 и 25Х, основной продукт дисульфид. Надосадочная фракция 9000 х g гомогената печени, почек и кишечника крыс почти полностью переводит каптоприл в его дисульфид и другие продукты в течение 120 мин. По крайней мере, одно из соединений по изобретению N- (3-(N-циклопентилкарбонил-D-аланилтио)-2-D-метилпропаноил -Ь«пролин (cpcD-aLa-SQ) демонстрирует не снижающуюся эффек тивность на протяжении 90-180 мин после орального введения (табл. 1). Каптоприл достигает пиковой эффектив ности к 90 мин, а затем она.падает, По прошествии 180 мин N-! 3-(N-цикло пентилкарбонил-Паланилтио)-2-D-ме« тил -1«пролин более эффективный ин гибитор без каких-либо признаков ос лабления его реакций Хотя ни одно из указанных соединений еще не испытывалось на людях, подобное испытание проведено на соединении, близком аналоге, N-13-.(N-циклогексилкарбонил-D-аланилтио)-2 -ме i HJIIIpoiiaiioJJJI)-I.-пролила (chc- D— aLa- 2- D) метилпропапоил-L-пролина, Это соединение идентично N- 3-(М-циклопентилкарбонпл "D-аланилтио)-2-метилпропаноил-L-прслиновому соединению, с исключе.пп и, что в концевом кольце присутствует дополни« тельная -СН -группа» 1 609455 Сравнительные исследования на здо" ровых людях показали, что действие 40 мг (0,096 ммоль) N-(3-(N-циклогексилкарбонил-D-аланилтио) 2-D-Me тилпропаноил -Ь-пролина продолжается дольше, чем действие 100 мг (0,46 ммоля) каптоприла„ Полученные результаты подтвержда ют большую продолжительность действия сложнотиоэфирных соединений каптоприла с ациламинокислотами по сравнению с самим каптоприлом. Кроме тоГо, эти соединения более удобны в обращении, чем каптоприл, благодаря своей более высокой химической ста бильности, Срок хранения каптоприла необычно короток, его период полу распада в водных растворах составляет приблизительно 30 мин. Сухой порошок также разлагается более, чем о - на 507, спустя три недели при 85 С. Соединения по изобретению, не имея -свободной меркаптогруппы, огранически более стабильны, Растворы этих соединений могут храниться более длительное время, Например, 1 мг/мл N-(3-(N-бензоил-Ь фенилала нилтио)-2 D-метилпропаноил )-L iipo. лина в 1;1 метанол/водном раствори-. теле не дают никаких признаков раз ложения по проишествии шести часов хранения ° Кроме того, соединения по изобретению не требуется смешивать 20 Таблица 1 12 15 21 35 42 42 .42 41 36 31 26 56 58 48 37 14 28 35 12 23 46 Испытуемое соединение N (3-(N-Цнклолантан» карбонил Э-аланилтио).2-П-метилпропаноил)L-пролин N-(3-(Н-Трет-бутилоксикарбонил- D-аланил тио) 2-Пметил-пропа ноил1-Ь-пролин N-(3-(N-Ацетил-D-лейцилтио)-2-Эметилпропаноил1-L-пролин N (3 (D-Аланилтио™2 D-метил-пропаноил1-L-пролин Каптоприл с восстановителем в порошковом виде, чтобы избежать протекания реакций димеризации, которым подвержен капто5 прил. Таким образом, соединения, полученные в условиях предлагаемого способа, активны, малотоксичны и более устойчивы при хранении, чем кап топрил. Формула изобретения Способ получения пептидов формулы r O B-(A)-S-CV -CH-С вЂ” R R1 где R — бензоил, циклопентакарбонил, ацетил, пропаноил, бутаноил, водород; А - L u D — Phe, D - Ala, DTr p, D Leu, R,— СН R<= Ь-пролил, о т л и ч а.ю шийся тем, что осуществляют взаимодействие соединения формулы Ф Н-(A j — S— - CH -СН вЂ” С 30 г р 2 1 с К-галогенидом, значения A, R, R<, R< имеют указанные значения. нгибирование индуцированного овышенного давления, о> за время 7 11 12 22 26 - 15 9 12 17 31 31 34 21 ХdблHöа 2 Испытуемое соецннепи» етодика 60 28 18 60 28 18 А 58 25 14 85 67 56 А 96 85 96 95 15 5 94 6 ! 8 7 ° 92 93 92 80 В В А 1) Я А Е 29 8 3 62 31 23 95,0 87,0 86,8 88,6 97 96 94 99 98 97 105,1 99,6 97,0 92,1 86 65 52 99,4 93,5 92,1 82,4 Таблида 3 Стабильность соедииени!! по нвобретенив и гидролизу при виутривенном введении при времени> мин Испытуемое соедине 7!"(3 (венаоил-1, феиилаланилтио) 2-0 ниетнл-пропаноил)» «!.пролин Bz-1,-Phe 5-(3-{Бенаоил &-фенилалянцл» тио)-2-!л-метил«пропаноил) Ьпролин Вв 0-РЬе 58! 423 14 36 492 334 227 17 !35 117 22 35 15 33 57 76 85 100 lll !!2 120 (-! ) N» (3 «{ Я }з,". и з о щ «1) а д а и ! ! т ! о ) -2-1)-метилпро! I аноил 1 "1. "пролпп N-(3-(N-Ацетил"-D-фенну!Илаиилтио) -2-Р".мс тплпропа!!о и)-1пролин N-!3-(N-Цику!опентанкароонил)L «2-1)-ме илпропаноил) Ьпролин N" (3-(N-Бензоил-D-фенилалан ил т ил ) 2-!ц-ил 1 ил п!> о п н ил ил 1-Е-пролин N-(3-(N-Бензопл-1)"фенилаланнлтио)-2-D-метилпропаноил)«L-пролин N-13-(N™Üåíýoèë-D-лейцилтпо) -2-1)-1!етилпропаноил -L-нролин N- (3-(N-Пропаноил-D-триптофилтио)-2-D-метилпропано!1л)«L-пролин М- 3-(И-Бутилоксикарооннл-D-аланилтио) 2-D-метилпропаноил -Е-пролин N-(3-(N«Ацетил 07!ейцилтио)-2-П-мети1!пропаноил)™ -L-пролин N-(D-Аланилтио-2 "D-метил-пропаноил) 1.пролин N- (3-(11-Ацетил-D-изолейцилтио) 2-1) метил-пропаноил «L-пролин 1О 30 60 80 120 180 4 6 8 10 25 35 60 243 149 !19 98 33 57 I г/мп 79 9! !05 96 !43 119 127 (Ки! ) 15! 609455 Таблица 4 Отбор проб из Испытуемое соединение Стабильность соединений к гидролизу при оральном введении, моль/мл, при времени, мин 30 120 N- 3- (Б е из о ил-L-фе нил ала нил тио)-2-Э-метилпропаноил -L-пролин N-(3-(Вензоил-Ь-фенилаланилтио)-2-D-метилпропаноил -1.пролин Бензоил- .-фенилаланин Воротная вена 0,025 0,246 0,010 0,002 0,312 0,054 Желчь 0,493 0,300 0,677 0,786 0,102 0,164 ° Ееэаеа еалеаееаеаэаэаэаеае ааэаеаэаеаеаэае ал еа ° ае аеаеаээаа ееае аеалэаеаеее Составитель В, Волкова Техред M.Õoäàíè÷ Корректор В,Гирняк Редактор И.Шулла Заказ 3627 Тираж 317 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Иосква, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина, 101