Водорастворимые 2-нитро-4-сульфофениловые эфиры защищенных аминокислот как промежуточные продукты в синтезе пептидов

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву

Союз Советских

Социалистических

Республик (22) Заяэлено05.0777 (21) 2502643/23-04 с присоединением заявки М (23) Приоритет

С 101/18

Государствсии и 1 коиитст

СССР во делам изобретений и открытий

Опубликовано 05.0180 Бюллетень М 1

Дата опубликования описания 070180

547 ° 466. (088.8) (72) Авторы изобретения

А,А, Гершкович и С.Б. Серебряный (73) 3аяВИтЕЛЬ Институт молекулярной биологии и генетики AH Украинской CCP (54) ВОДОРАСТВОРИМЫЕ 2-НИТРО-4-СУЛЪФОФЕНИЛОВЫЕ

ЭФИРЫ ЗАЩИЩЕННЫХ AMHHOKI4CJIOT KAK ПРОМЕЖУТОЧНЫЕ

ПРОДУКТЫ В СИНТЕЗЕ ПЕПТИДОВ

Настоящее изобретение относится к новым химическим соединениям, а именно к водорастворимым 2-нитро-4

- сульфофениловым эфирам защищенных аминокислот формулы !

О

II

z-2tH CK-0 — o / 8o хо т

3

В, где R — остаток аминокислоты;

Z — защитная группа; карбобенз окси-, п -толилсульфонил-, трет.-бутил-оксикарбонил.

2-Нитро-4-сульфофениловые эфиры аминокислот являются аналогами активированных эфиров защищенных амино- 20 кислот и могут быть применены в реакциях с другими аминокислотами при синтезе пептидов, Известно, что для синтеза пептидов вводят в реакцию две аминокис- 25 лоты, из которых одна защищена по аминогруппе и активирована по карбоксильной группе. Карбонильную группу аминокислоты активируют, преврао,ая аминокислоты в эфиры взаимодей- 30 ствием с замещенными фенола, например П-нитрофенолом. Однако такие .эфиры нерастворимы в воде (1).

Для получения пептидов П -нитро .фениловый эфир защищенной аминокислоты растворяют в диметилформамиде и вводят в реакцию с водным раство- ром натриевой соли другой аминокислоты, Образовавшийся пептид выделяют после отгонки растворителя и подкисления. Необходимость тщательного подбора растворителя обусловлена так же возможностью рецемизации аминокислот (2l .

2-Нитро-4-сульфофенильная группа в качестве активирующей группы аминокислоты, а также содержащие ее эфиры защищенных аминокислот и их свойства ю литературе не описаны.

Белью изобретения является синтез водорастворимых 2-нитро-4-сульфофенильных эфиров защищенных аминокислот, которые могут быть использованы в качестве промежуточных продуктов для проведения в водной среде синтеза пептидов.

Для получения 2-нитро-4-cyab4o4eнильного эфира аминокислот в реакцию ацилирования вводят защищенную по

707909.

Формула изобретения

УМ пп

Выход, R

Наименование

СЬХ- ЙЬ, -ONSP

2 C42.-L-GEu-ONSP 3 Cbz -1 -Phe-ONSP

4 Вос-Х-Trp-ONSP

5 Tos-L-М à-ONSP. 63 Ор43

80 0,49

68 Ор52

72 0,63

58 0,56

ЦНИИПИ Заказ 8429/20 Тираж 495 Подписное

Филиал ППП Патент, r. Ужгород, ул. Проектная, 4 ами ногруппе аминокислоту с натриевой солью 2-нитро-4-сульфофенола в орга-. ническом растворителе, например. днметилформамиде,при добавлении водоотнимающего средства, например.. дициклогексилкарбодиимида (ДДГК) . 5

Для получени я 2-нитро-4-сулъфофениловых эфиров применяют аминокислоты и защищенные аминокислоты хроматографически чистые.

Полученные соединения являются устойчивыми продуктами, хранятся при комнатной температуре в течение длительного времени без изменения свойств.

2-Нитро-4-сульфофениловые эфиры защищенных аминокислот растворимы в воде и легко вступают в реакцию с незащищенными аминокислотами в щелочной среде.

Для применения в синтезе пептидов они не требуют специальной

20 очистки, Пример, 2-Нитро-4-сульфофениловый эфир карбобензоксиглицина ,(Ct)2. — 680 -ONSP), Исходным веществом для синтеза является карбобензоксиглицин (х,ч,),„

2,1 г (0,01М) карбобензоксиглицина и 2,4 r (0,01М) натриевой со,ли 2-нитро-4-сульфофенола растворяют в 20 мл диметилформамида (х,ч,) и

30 охлаждают до 0 С, Затем прибавляют

2р1 r (0,01М) дициклогексилкарбодиимида (ДБГК) и перемешивают в течение 1 ч. Смесь оставляют на 20 ч при

18ОC. После отделения образовавшейся .дициклогексилмочевины и отгонки растворителяр маслянистый остаток раство- ряют в спирте и осаждают эфиром.

Получен 2-нитро-4-сульфофениловый ,эфир карбобензоксиглицина

40 (СЪ2.-ЖУ-О-NSP), Выход 2 7 г (63%), Перекристаллизованный из полунасыщеиного водного раствора хлористого натрия продукт представляет собой желтоватый порошок. 45

По способу, описанному в примере, 1получают 2-нитро-4-сульфофениловые эфиры N-замещенных L-глутамина (L-66й), L-аланина (L-AEa), Ь-фенилаланина (L-Рпе) р L-триптофана (L"Тгр) ° 0

Их характеристики представлены в таблице, Далее показана способность полученных эфиров реагировать с аминокислотами в водной среде на примерах синтеза пептидов карбобензоксиглицил-фенилаланинà (Cbz.-GK> -РЪеОН) и тозилаланиллейцина (То -Ма-),еоОН), Синтез карбобензоксиглицил — фенилаланина (Cbz-06р-Р*еОН), Растворяют 1,0 г СЬт — GPw-ONSÐ â 8 мл дистиллированной воды, добавляют 0,4 г

Е -фенилаланина и 0,12 r NaOH (х,ч,), Перемешивают полтора ч, при 20 С, подкисляют 2И-раствором HCC до рй равным 2.

Выпавшее масло экстрагируют этилацетатом, промывают 25Ъ раствором хлористого натрия и сушат над сульфа-. том магния. После отгонки растворителя остаток растирают с петролейным эфиром. Выход 0,5 r (63%), Полученный пептид представляет собой бесцветный аморфный порошок с температурой плавления 124-125 С (сЦ Д = + 38,5 (C-1, спирт) °

Синтез тозилаланиллейцина (Tos-ACa-LeuOH) Растворяют в воде

1,5 r Tos-L-ACa-ONSP, прибавляют

0,53 r L-лейцина и избыток бикарбоната натрия, Смесь перемешивают 4 ч при 20 С, Затем подкисляют соляной кислотой до рН 2. Выпадает осадок, который после стояния в течение 2 ч о при .5 С отфильтровывают водой и сушат в вакуум-зксикаторе.

Выход 60%, Температура плавления

187 С, (сО 1 = -29,5 (С-1, спирт), Водорастворимые 2-нитро-4-сульфофениловые эфиры защищенных аминокислот формулы где R — остаток аминокислоты, Z - -защитная группа: карбобенэо-, кси, п-толилсульфонил-, трет.-бутил-оксикарбонилкак промежуточные продукты в синтезе пептидов.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе . 1. Шредер Э,,Любке К, Пептиды, М,, Мир, 1967, с. а .

2. Авторское свидетельство СССР рр 215227„ кл, С 07 С 103/52,опублик.

1966 °