Способ получения ариламидов @ -защищенных аминокислот и пептидов

 

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АРИЛАМИДОВ N -ЗАЩИЩЕННЫХ АМИНОКИСЛОТ И ПКПТИДОВ общей формулы A-B-NH-Ar, где А - бензилоксикарбонил; N - трет-бутилоксикарбонил; В - фенилаланил, аланил, пролил , глицил-пролил; Аг - 4-метилкумарил, 2-нафтил, 4-фенилазафеиил; путем взаимодействия соединения общей формулы А-В-ОН, где А и В - значения,указанные зьаае; с ариламином формулы HjN-Ar, где Аг - значения, указанны.е выше; в среде апротонного органического врастворителя в присутствии третичного амина и конденсирующего реагента, отличающийся тем, что, с целью упрощения процесса, в качестСП ве конденсирующего реагента используют дигшкилпирокарбонат общей формулы (R-Ogo)jjO, где R - линейный или разветвленный алкил, содержащий 3-4 атома углерода.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19) (И) 3(51) С 07 С 103/501 С 07. С 103/52//

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕ

К АВТОРСКОМУ. СВИДЕТЕЛЬСТВУ

A-В-ОН, Н4Н-Аг, A-В-NH-Аг, где А

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3439328/23-04 (22) 17.05.82 (46) 30.10.83. Бюл. (4 40 .(72). В.Ф. Позднев (71,) Институт биологической и медицинской химии AMH СССР (53) 547.964.4.07(088.8) (56) 1. Патент США 9 4237047, кл. 260-112,5 R, опублик. 1978.

2. Позднев В.Ф. Необычное направ- ление реакции переацилирования в ряду смешанных ангидридов карбоно» вых и алкилугольных кислот. - МО., 1978, 14, (4 7, с. 1558 (прОтотип). (54) (57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АРИЛАМИДОВ

N -ЗАЩИЩЕННЫХ АМИНОКИСЛОТ И ПЕПТИДОВ общей формулы бенэилоксикарбонил;

- трет-бутилоксикарбонил1

- фенилаланил, аланил, пролил, глицил-пролил1

Ar - 4-метилкумарил, 2-нафтил, 4-фенилазафенил1 путем взаимодействия соединения общей формулы где A и В - значения, укаэанные выше, с ариламином формулы где Ar — значения, указанные swae; в среде алротонного органического

4растворителя в присутствии третичного амина и конденсирующего реагента, отличающийся тем, что, с Е целью упрощения процесса, в качестве конденсирующего реагента используют диалкилпирокарбонат общей формулы (-OCO)до, где R - линейный или разветвленный алкил, содержащий 3-4 атома углерода.

1051062

Цель изобретения — упрощение процесса получения ариламидов N-защищенных аминокислот и пептидов.

Постанленная цель достигается способом получения ариламидон N -защиК щенных аминокислот и пептидов общей формулы

A-B-NH-Ar, 60 бензилоксикарбонил; трет-бутилоксикарбонил; фенилаланил, аланил, пролил, глицил-пролил;

4-метилкумарил, 2-нафтил, 4-фенилазафенил; где A

Ar

Изобретение относится к усовершенствованному способу получения ариламидон N -защищенных аминокислот и пептидов, которые могут быть использованы и качестве хромофорных субстратон ферментов и полупродуктов для получения хромофорных субстратон ферментов.

Известен способ получения ариламидов N"-защищенных аминокислот и пептидов, основанный на взаимодей,ствии И -защищенной аминокислоты или пептида с ариламином н присутствии дициклогексилкарбодиимида fl) .

Однако дициклогексилкарбодиимид является сильным аллергеном и об15 ладает нысокой токсичностью, что существенно затрудняет его йспользование.

Наиболее близким к предлагаемому по технической сущности и достига- 20 емому результату является способ получения ариламидов защищенных аминокислот, согласно которому конденсацию защищенной аминокислоты с ариламином осуществляют в среде 25 органического растворителя в присутствии третичного амина и смешанного ангидрида нитрозамещенной бензойной кислоты и трет-бутилугольной.кислоты в качестве конденсирующего аген- 30 та. Этот процесс состоит из двух ста. дий. На первой стадии проводят активацию N ®-защищенной аминокислоты вышеуказанным смешанным ангидридом в присутствии третичного амина. При этом в качестве побочного продукта образуется соль нитрозамещенной бенэойной кислоты и третичного амина, которая выпадает н осадок и которую необходимо удалять фильтрованием.

На второй стадии после удаления 40 осадка добавляют к реакционной смеси ариламин, перемешивают до занерше ния реакции и выделяют целевой продукт,.(2) .

Недостатком известного способа 45 является его двухстадийность. Кроме того, используемые в качестве конденсирующих реагентов смешанные ангидриды сравнительно малоустойчивы и гидролиэуются влагой воздуха. 50 путем взаимодействия соединения общей формулы

A-В-ОН, где A и  — значения указанные выше; с ариламином формулы N

2 где R — линейный или разнетнленный алкил, содержащий 3-4 атома углерода.

Осуществление предлагаемого способа позволяет проводить процесс получения ариламидов N -защищенных аминокислдт и пептидов в одну стадию.

Пример 1. 4-Метилкумариламид7-N-бензилоксикарбонил-L-фенилала- нина.

К раствору 0,6 г N-бенэилоксикарбонил-L-фенилаланина, 0,2 мл пиридина и 0,5 мл ди-трет-бутилпирокарбоната в 5 мл этилацетата добавляют 0,5 г 4-метил-7-аминокумарина и смесь перемешивают 5 ч, добавляют

10 мл диоксана и оставляют на 12 ч.

Осадок отфильтровываю, промывают зтилацетатом, сушат. Получают первую порцию продукта. Маточник разбавляют этилацетатом, промывают водой, 1 М Н2SOq водой, 1 М КrZCOg водой. Выпавший в осадок продукт отфильтровывают, промывают эфиром, сушат и объединяют с первой порцией продукта. Сухой продукт растворяют при нагревании н 25 мл диоксана, фильтруют, источник упаривают н вакууме до объема 5- 6 мл, разбавляют

10 мл эфира, выпавший осадок отфильтровывают, промывают, сушат. Выход 0,7 г (76Ъ); т.пл. 204-206оС

Ы р +57р 7 (С=l, ДМФА);

Пример 2. 4-Метилкумариламид7-N-бензилоксикарбонил-L-аланина.

К раствору 0,45 г N-бензилоксикарбонил-L-anaezva, 0,14 мл пиридина и 0,5 мл ди-трет-бутилпирокарбоната н 3 мл ТГФ добавляют 0,4 г

4-метил-7-аминокумарина. Смесь перемешивают 20 ч при 18 С. Осадок отфильтровывают, промывают этилацетатом, эфиром, высушивают и получают

0,50 r (65%) целевого продукта с пл 227-228о С 1 1 2о 32,6 (C 1

ДМФА) .

Пример 3. 4-Метилкумариламид-7-N-бензнлоксикарбонилглицилL-пролина.

К раствору 260 мг N-бензилоксикарбонилглицил-L-пролина, 200 мг 4метил-7"аминокумарина, 0 05 мл пиридина в 2 мл ТГФ прибавляют 0,3 мл ди-трет-бутилпирокарбоната, переме1051062

Составитель О. Галкин

Техред A.À÷

Коррек тор А. Зимокосов

Редактор С. КвяткЬвская

Тираж 418- Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Заказ 8594/24

Филиал ППП Патент - г. Ужгород, ул. Проектная, 4 шивают 20 ч, разбавляют этилацетатом до объема 20 мл, промывают водой, 1 М Н ЯО4 водой 1 М KgCO), водой, сушат над безводным сульфатом натрия и упаривают в вакууме. Остаток кристаллизуют из бензола, отфильтро вывают, промывают эфиром и сушат в вакууме.

Получают 335 мг (84,5%) целевого продукта с т.пл. 140 С (с разложением) и с . = 120,7 С ° (C=l

ДМФА) .

П р и м р р 4. 2-Нафтиламид-Мбензилоксикарбонил-L-фенилаланина. а) Раствор 0,30 г N-бензилоксикарбонил-Ь-фенилаланина, 0,05 мл пиридина и 0,27 мл ди-трет-бутилпирокарбоната в 3 мл бензола перемешивают 40 мин и добавляют раствор этилацет ата. Реакционную смесь перемешивают б ч, прибавляют 10 мл петролей- . ного эфира, выпавший осадок отфильтровывают, промывают эфиром и сушат в вакууме.

Получают 0,26 г (61Ъ) целевого продукта с т.пл. 180-181 C;5(4) +

+ 45, 5 . (C=l; ДМФА) . б) Раствор 0,60 r N-бенэилоксикарбонил-L-@e a a sa.

0,2 мл N-метилморфолина и 0,4 мл ди-изопропилпирокарбоната в 3 мл бензола и 1,5 мл ТГФ перемешиивают

1 ч,добавляют 0,3 г кристаллического

2-нафтиламина, перемешивают 3 ч. 3атем разбавляют эфиром, образовавшийся осадок отфильтровывают, промы-. вают эфиром и сушат в вакууме.

Получают 0,55 r (64,8%) целевого соединения с т.пл. 175-176 С.

Пример 5. 2-Нафтиламид-Nбенэилоксикарбонил-Ь-аланина.

Аналогично примеру 48 получают 2нафтиламид"N-бензилоксикарбонил-Lаланина с выходом 64,6Ъ, т.пл. 185187 C;(CAN — -26, 5 (C=l; ДМФА) °

П р и М е р б. 4-ФенилазоанилидN-Трет-бутилоксикарбонил-Ь-пролина.

Раствор 1,0 г И-трет-бутилоксикарбонил-Ь-пролина, 0,1 мл пиридина, 1,0 r 4-фенилазоанилина и 1,3 мл дитрет-бутилпирокарбоната в 10 мл бензола перемешивают 10 ч. Смесь разбавляют эфироФ, образовавшийся оса10 док отфильтровывают, промывают эфиром и сушат.

Получают 1,5 r (82%) 4-фенилазоанилида-N-трет-бутилоксикарбонил-Ьпролина с т.пл. 205-206 С;Го1)в — — -80 (C=l; ДМФА) .

П р.и м е р 7. 4-ФенилазоанилидN-трет-бутилоксикарбонил-L-аланина.

Раствор 1,0 r N-трет-бутилокси- . карбонил-L-аланина,- 0,5 мл N-метилморфолииа и 1,2 мл втор-бутилпирокарбоната в 5 мл бензола.перемешивают 30 мин и добавляют раствор 1,0 г

4-фенилаэоанилина в 5 мл ТГФ. Реакционную смесь перемешивают 5 ч, разбавляют этилацетатом до объема 30 мл, промывают водой, 5%-ным раствором лимонной кислоты, водой, 1М.К2СО3, водой, сушат Йад безводным сульфатом натрия и упаривают в вакууме. Остаток перекристаллизовывают из эфира.

Получают 1,3 r (663) 4-фенилазоанилида-N òðåò-бутилоксикарбонил-Lаланина с т,пл. 172-173 С;(о Д и — -79,2 (C=l; диоксан).

Таким образом, предлагаемый спо35 соб получения ариламидов N-защищенных аминокислот и пептидов представляет собой простбй в технологическом отношении процесс, осуществляемый в одну стадию, который позволяет

4() выделять целевые продукты с высокой степенью чистоты без использования специальных методов очистки.