Способ дифференциации sтарнylососсus aureus от других видов стафилококков
Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано при диагностике стафилококковой инфекции и изучении таксономии микроорганизмов. Цель изобретения - повышение точности и упрощение способа. Исследуемую культуру стафилококка выращивают на питательной среде. Из части полученной биомассы выделяют пептидогликан в количестве 10 мкг/мл и определяют его лизоцимсвязывающую способность (ЛСС). ДРУГУЮ ЧАСТЬ БИОМАССЫ ОТМЫВАЮТ, ГОТОВЯТ СУСПЕНЗИЮ С КОНЦЕНТРАЦИЕЙ 2<SP POS="POST">.</SP>10<SP POS="POST">8</SP> МИКР.КЛ./МЛ И ОПРЕДЕЛЯЮТ ЛСС. ЗАТЕМ ОПРЕДЕЛЯЮТ СООТНОШЕНИЕ ЛСС пептидогликана к ЛСС клеток и при его значении от 4,61 до 5,5 культуру дифференцируют как STAPHYLOCOCCUS AUREUS.
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ
ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ
ПРИ ГКНТ СССР
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
aureus, (21) 4661216/30-13 (22) 02.01.89 (46) 07.12.90, Бюл, i+. 45 (71) Оренбургский государственный медицинский институт и Горьковский государственный медицинский институт им, С.M. Кирова (72) О.В. Бухарин, А.Н. Маянский, Д.Г. Дерябин и ДЛ . Астафьев (53) 576.8.093,1(088.8) (56) Schleifer К.H„Kocur M.Classification of
Staphylococci based on Chemicai and
biochemical properties, — Arch, Microbiology, 1973, ч. 93, р. 65-85. (54) СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ
STAPHYLOCOCCUS AUREUS ОТ ДРУГИХ
ВИДОВ СТАФИЛОКОККОВ
Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано при диагностике стафилококковой инфекции и изучении таксономии микроорганизмов.
Цель изобретения — повышение точности и упрощение способа.
Пример . Для изучения лизоцимсвязывающей способности (ЛСС) используют взвесь суточной агаровой культуры стафилококка, отмытого центрифугированием в физиологическом растворе 2-3 раза в течение 10 мин при 3000 об/мин и суспендированного в физиологическим растворе до оптической плотности 0,1 ед на ФЭК-M при зеленом светофильтре в кювете шириной 5 мм, что соответствует концентрации
4 10 микр. кл./мл.
Для определения ЛСС пептидогликана .(ПГ) используют взвесь ПГ в физиологиче„„Я3„„1611933 Al (5 )5 C 12 0 1/04//(С 12 0 1/04, С 12 R 1:44) (57) Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано при диагностике стафилококковой инфекции и изучении таксономии микроорганизмов. Цель изобртения — повышение точности и упрощение способа. Исследуемую культуру стафилококка выращиваютна питательной среде. Из части полученной биомассы выделяют пептидогликан в количестве 10 мкг/мл и определяют его лизоцимсвязывающую способность (ЛСС), Другую часть биомассы отмывают, готовят суспензию с концентрацией 2 10 микр.кл./мл и опре8 деляют ЛСС. Затем определяют соотношение ЛСС пептидогликана к ЛСС клеток и при его значении от 4,61 до 5,5 культуру дифференцируют как Staphylococcus ском растворе, выделенного из изучаемого микроорганизма, ПГ используют в концентрации 20 мкг/мл. Указанная концентрация
ПГ примерно соответствует его содержанию в 4. 10 кл. стафилококка. Исследуемые взвеси смешиваются в равных обьемах (1 мл + 1 мл).с раствором яичного лизоцима: в случае целых клеток концентрация лизоцима 20 мкг/мл, в случае Пà — 4 мкг/мл, так что конечные концентрации ингредиентов составляют 2 10 кл./мл и 10 мкг лизоцима/мл, 10 мкг ПГ/мл и 2 мкг лизоцима/мл.
После инкубации в течение 10 мин при соответствующем температурном режиме (в случае изучения ЛСС целых клеток при 37 С, в случае изучения ЛСС ПГ при 4 С) проводят разделение свободного и связанного лизоцима (клетками, ПГ) центрифугированием.
Далее определяют остаточную концентрацию несвязанного лизоцима в супернатан 1611933
Составитель Г.Смирнова
Техред М.Моргентал Корректор А.Обручар
Редактор Н,Бобкова
Заказ 3813 Тираж 487 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР
113035, Москва, Ж-35,.Раушская наб., 4/5
Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул. Гагарина, 101 т : в случае изучения ЛСС ПГ исследуемый объем супернатанта 0,5 мл; в случае изучеия ЛСС клеток 0,1 мл супернатанта смеивают с 0,4 мл физиологического аствора, последнюю операцию проводят 5 я относительного уравнивания концентаций лизоцима в пробах. B дальнейшем пределяют концентрации лиэоцима в проах по степени изменения оптической плотости индикаторной культуры Mlcrococcus 10
t teus на ФЭК-М. Величину лизоцимсвязыающей способности определяют по формуе:
ЛСС = 10 мкг — (концентрация лизоцима 15 пробе, мкг), после этого определяют энаение показателя ЛСС ПГ к ЛСС целых клеок.
Микроорганизмы вида S. aureus харакеризуются показателем ЛСС ПГ к ЛСС кле- 20 ок в пределах 4,61-5,50, что существенно тличает их от стафилококков других видов.
Из полученных данных следует, что редлагаемый способ позволяет точно диференцировать S. aureus, характеризую- 25 ийся показателем ЛСС ПГ к ЛСС клеток от ,61 до 5,5 от, всех других видов стафилококов, в том числе имеющих со S. aureus сходый аминокислотный состав пептидных остиков (которые определяют в известном 30 пособе). При этом показатели соотношеия ЛСС ПГ к ЛСС клеток стафилококков других видов колеблются в пределах 0,361,93, и даже у наиболее близких к S, aureus видов S. hyicus и S, hyicus subsp.
chromogenes достигает лишь величины
1,50-1,93.
Использование способа обеспечивает высокую точность дифференциации, которая достигается методически просто, не требует дорогостоящего оборудования, и проведения сложных исследований, связан-. ных с определением аминокислотного состава ПГ, . Формула изобретения
Способ дифференциации Staphylococcus
aureus от других видов стафилококков путем выращивания исследуемой культуры стафилококка на питательной среде с последующим выделением из полученной биомассы пептидогликона и определением его свойств, отличающийся тем, что, с целью повышения точности и упрощения способа, у выделенного пептидогли кона определяют лизоцимсвязывающую способность, дополнительно готовят суспензию культуры с концентрацией 2 10 микробных клеток/мл и определяют ее лизоцимсвязывающую способность и при значении отношения лизоцимсвяэывающей способности 10 мкг/мл пептидогликана к лизоцимсвязывающей способности клеток 4,61-5,5 культуру дифференцируат как Staphylococcus aureus.
