Способ получения диэтилдитиокарбамата холина

 

Изобретение касается четвертичных аммониевых соединений, в частности получения диэтилдитиокарбамата холина, проявляющего активность при лечении церебральных дегенеративных заболеваний (старческого сумашествия и болезни Алземейера). Цель - создание нового соединения указанного класса с лучшей активностью. Синтез ведут обработкой хлорида холина трехводным диэтилдитиокарбаматом натрия, выход 99%. Новое соединение практически не токсично ЛД<SB POS="POST">50</SB> = 1,4-1,7 г/кг, эффективная доза 0,1-0,3 г/кг. 1 табл.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧ ЕСНИХ

РЕСПУБЛИК (19) (11) ($y)5 С 07 С 333/16

OllNCAHHE ИЗОБРЕТЕНИЯ к патент

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

1 (21) 4356437/23-04 (22) 16. 09; 88 (31) 87 t 2968 (32) 18.09.87 (33) РК (46) 15.12.90. Бюл. N - 46 (71) Лафон фарма С.А. (СН) (72) Лат Хуонг Нгуен, Жан Рапэн и Таде Старон (РК) (53) 547.475.1.07(088.8) (56) Amer. Journ of Clinicol Nutrit, 36, October, 1982, р. 709-720, (54) CrrOCOb ЛОЛУ 1БНН НЭТНПЦНТНОКА1БАМАТА ХОЛИНА

Изобретение относится к способу получения нового производного диэтилдитиокарбаминовой кислоты, в частности диэтилдитиокарбамата холина формулы сн

С1Н М вЂ” C-S CH3-N— - СН -CH 0

СгН

S CH

3 проявляющего терапевтическую активность при лечении церебральных дегенеративных заболеваний, таких как старческое сумасшествие, болезнь

Алземейера.

Цель изобретения — изыскание нового соединения, проявляющего более высокую терапевтическую активность

t при лечении церебральных дегенеративных заболевании.

2 (57) Изобретение касается четвертичных аммониевых соединений, в частности получения диэтилдитиокарбамата холина, проявляющего активность при лечении церебральных дегенеративных заболеваний (старческого сумасшествия и болезни Алземейера). Пель изобретения — создание нового соединения указанного класса с лучшей активностью. Синтез ведут обработкой хлорида холина трехводным диэтилдитиокарбаматом натрия, выход 99Х. Новое сое единение практически не токсично, ЛД, 1,4-1,7 г/кг, эффективная доза О, I-0,3 r/Kã. 1 табл.

Диэтилдитиокарбамат холина (мол. вес. 252,40) представляет собой мелкие бесцветные или слегка желтоватые кристаллы с т.плав.96-97 С, они лего ко растворяются в воде, спиртах, гликоле и значительно меньше в органических растворителях. Кристаллы диэтилдитиокарбамата холина сильно гигроскопичны, поэтому их необходимохранить в герметичном и охлажцаемом сосуде.

Элементный анализ дает следующие результаты.

Рассчитано, 7.: С 48,85 Н 9,64;

N 11, 12; S 25,55; О 6,35.

С (О Н24N OS2

Найдено, Х: С 48,18-48,47; Н 9,379,54; N 11,59-11,51; S 24,94-24,75 °

Среднее значение, 7: С 48,33 °

Н 9,45; N 11,55; 8 24,85, ИК-, УФ-, ЯМР-спектры и масс-спектрометрия показывают наличие характе16 14? 61 ристических полос нового продукта в соответствии с изобретением.

Диэтилдитиокарбамат холина может быть получен из трехводного диэтил- 5 цитиокарбамата натрия H хпорида холина. Реакция идет следующим образом:

c,í, -С-Ь-Иа+ (СНз-К-СН -СН ОН) 018

С2Н5 СН3

®

С H И-С-8 CH -N-СН -СН ОН +1 1дС1 15

СН

Пример. В двух колбах Эрлен,мейера или в двух химических стака- 20 нах соответствующей емкости раство .ряют раздельно 56 r (0,040 моль) хлорида холина в 100 мл абсолютного этаиола, слегка нагревая при помощи электрической плитки или водяной бани 25 и. встряхивая раствор, чтобы обеспечить лучшее растворение, 90 г (0,40 моль) трехводного диэтилдитиокарбамата натрия в 100 мл абсолют:ного этанола„ Когда оба раствора 30 ,станут прозрачными, медленно тон1сой струйкой наливают спиртовой раствор холина в раствор натриевой соли при сильном помешивании и наружном охлажцении баней с холодной водой, ,так как реакция сильно экзотермичес,кая. После добавления около одной трети раствора образуется большой осадок. Приливание продолжают при сильном помешивании. Добавление спирто40 вого раствора холина в спиртовой раствор натриевой соли продолжается около 1 5 мин. Затем перемешивание продолжают 30 мин. Полученный продукт охлаждают в течение ночи, при этом сосуд с реакционной смесью закрыт.

На другой день удаляют хлорид натрия путем просушивания и промывания абсолютным спиртом по 50 мл два раза на фильтре.

Получают ?3 г хлорида натрия.

Спиртово" l маточный раствор диэтилдитиокарбамата холина в этаноле концентрируют на водяной бане под вакуумом, создаваемым водяным насосом, чтобы удалить избыток этанола. Затем быстро выливают очень вязкий раствор в химический стакан или стеклянную или фарфоровую ступку. После этого высушивают в вакуумp- B сушильном шкафу, используя в качеств< ocóøèòåëÿ пятиокись АосАора. Полученный продукт имеет форму блока, которнй измельчают на мелкие кристаллы или в мелкокристаллический порошок (порошок бесцветный или слегка желтоватый). Количественный выход ITQ диэтилдитиокар.бамат холину 100 г. Выход целевого продукта 997. Полученный диэтилдитиокарбамат холина должен храниться в герметичном сосуде, так как он гигроскопичен.

В соответствии с изобретением установлены терапевтические свойства новой. соли холина, проведено полное исследование токсичности этого продукта. Токсикологическое исследование проведено на белых швейцарских мьш ах породы SWISS. На этих животных изучалась острая токсичность, хроническая токсичность, влияние на размножение, тератогенез, способность к размножению во времени и продолжительность жизни,,влияние на эффективность иммунных характеристик диэтилдитиокарбамата холина. Для всех опытов животные были рандомизированы, разделены по полу и распределены на группы по 30 особей, беременные женские особи изолировались в индивидуальных клетках. Всех животных кормили подходящим кормом, для питья применялась обычная вода.и с добавлением исследуемого продукта, т.е. диэтилдитиокарбамата холина. В применяемом корме содержались зерновые продукты, растительные белки, животные белки, минеральные соли и витамины. Измерения острой токсичности нового соединения в сОответствии с изобретением, которое вводилось интраперитональным или подкожным путем, показало, что токсичность очень слабая: при дозе ниже 1 г/кг смертельных исходов нет.

Величина ) 50 находилась в пределах

1,4-1,7 г/кг. При этом было QcTBFîâлено, что применение нового соединения значительно задерживает старение.

Этот эффект особенно заметен на му — ских особях и, по-видимому, связан с изменениями характера и поведения животного, приводящими к умейьшению уязвимости, что обычно связано с высокой агрессивностью. Контрольные мужские особи больше дрались, уставали, ранились и погибали.

1614761

Исследовалось также влияние нового соединения на эффективность иммунных характеристик у белых мьшiей SWISS.

ДЛя получения одинаковой иммунной защиты необходимо 100 мкг специАической вакцины для контрольных животных и только 20 мкг — для мьш ей, которым вводилось предлагаемое соединение в виде 1, †íî раствора в питьевой воде.

Из данных экспериментов следует, что токсичность нового соединения практически нулевая ° Видно также, что введение новой соли холина белым мышам SWISS благоприятно сказывается на размножение, продолжительньсть жизни, на поведение и эААективность иммунных реакций. фармакологические исследования предлагаемого соединения показали,,что оно обладает хелатным действием тяжелых и переходных металлов, иммунностимулирующим эффектом, антидегенеративным эААектом и оказывает влияние на нейтронные передачи и, следовательно, имеет очень интересную терапевтическую активность в области церебральных дегенеративных заболеваний, таких как старческое сумасшествие, болезнь Ллземейера и сумасшествие Ллземейера. При этих заболеваниях первыми поражаются холинэрговые .центральные нейроны либо на уровне синтеза нейромедиатора— ацетилхолина, либо на уровне мембраны, которая использует холин для своего биосинтеза. С терапевтической точки зрения нельзя непосредственно вводить ацетилхолин, который не про-ходит через мембраны, а результаты, полученные при введении холина только в Аорме хлорида, недостаточны.

Предлагаемое соединение использовали в ряде экспериментов, проведенных на двух моделях животных с нервной дегенерацией, которая была вызвана или за счет основных холинэрговых ядер, или за счет повторного введения гидроксида алюминия. В обоих случаях наблюдалось, что способности животных к обучению, разрушаемые в связи с дегенерацией, восстанавливались при оральном (через рот) введении диэтилдитиокарбамата холина.

После лечения в течение трех недель определялась эААективная доза ДЕз величина которой составляла 0,100,30 r/Kã животного °

f5

Клинические исследования диэтилдитиокарбамата холина проводили в клинических экспериментах на пациентах, имеющих церебральное дегенеративное заболевание, которое определялось в соответствии с критериями PS51111MMS на основе углубленного психометрического анализа и радиографии SANER.

Эксперименты проводили в больничной среде, лечение продолжалось от шести до двенадцати недель и состояло из плацебо, хлорида .холина, диэтилдитиокарбамата холина.

Применяли дозы активного вещества

125 мг при разовом приеме через рот три раза в день, т.е ° дневная доза составляла 375 мг. Результаты показывают, что в 701 случаев лечения данным соединением наблюдается исчезновение или значительное уменьшение расстройств поведения и настроения пациентов. Результаты объективно подтверждены психометрическими тестами.

При лечении плацебо или хлоридом холина в 30K случаев наблюдались легкие. улучшения, менее четкие и более короткие, чем в спучае лечения пациентов данным соединением.

Терапевтические составы, содержащие диэтилдитиокарбамат холина (в качестве активного составляющего), могут вводиться орально (через рот), ректально или могут инъектироваться в зависимости от психоАизиологического состояния пищеварительного тракта . больных.

1. Лктивность ДТС-холина (диэтилдитиокарбамата холина) в качестве преднественника ацетилхолина у взрослой крысы.

Крысам в возрасте 26 мес. (1 контрольная партия крыс, 1 партия с хлоридом холина, 1 партия с ДТС-холином) в течение 8 дней перорально вводили

ДТС-холин в количестве 50 мг/кг/день, причем эти дозы холина эквиваленты хлориду холина.

После умерщвления животных определяли содержание холина и ацетилхолина в разных областях мозга (кора лобная, затылочная, боковая, конек, полосатое тело, мозжечок и луковица) радиоэнзимологическим методом. Во всех этих областях содержание холина относительно контрольных животных увеличилось, но в случае применения ДТС-колина увеличение было гораздо значительнее, чем при применении хлориде холи1614761 на. В частности, показательным результатом является результат р (0,05 на уровне лобной коры. Кроме того,. синтез ацетилхолина также увеличивался

5 на уровне лобной коры у животных, по лучивших ДТС-холин, в гораздо большей степени по сравнению с животными, получившими хлорид холина: содержание ацетилхолина в лобной коре возросло на 10% (хлорид холина) и на 357. (зна-! чительная разница) — с ДТС-холином., Эти результаты показывают, что при ,эквивалентных дозах холина (хлорид холина и ДТС-холина) гораздо большее содержание холина и ацетилхолина в разных областях мозга обеспечивается

ЛТС-холином.

Клинические опыты с ДТС-холином, были проведены в больнице Сальпет риер, Паржи. Ниже приведены описание этих опытов и результаты.

ДТС-холин вводили в количестве

500 мг/день (1 капсула с 250 мг !

ДТС-холина утром и в полдень).. Лече- 25 ние продолжалось 3 мес.,двойные сле пые опыты или плацебо проводили на. параллельных группах. Результаты

;показывают значительное улучшение

: (р (0,01) тестов мозгового наруше- ния (мини психическое состояние„ VRT Бентон) и нарушения памяти (VRT Бентон, MAIS, профиль мнезической про изводительности, RRM2) — это улучшение имеет значительное клиническое выражение (р ) 0,05).

Клинические исследования ДТС-холина.

Предварительная Aaaa II: исследование эффективности и толерантности .4О

ДТС-холина у больных, страдающих старческим слабоумием типа Ллземейра (npoAeccop Ранкурель, больница Сальпетриэр).

Речь идет .о двойных слепых опытах 45 или плацебо на параллельных группах, проведенных на 30 амбулаторных пациентах в возрасте 50-70 лет, страдающих прогрессирующей дегенеративной формой слабоумия типа Алземейера, диагностированной по следующим критериям: критерии слабоумия DCM-ТТТ, мини психическое состояние между 10 и 20 (Mini Mental State) MMS, шкала

Кашинского (7, отсутствие депрессии по ИАЭКБ, отсутствие причин излечения: токсическая, метаболическая, 4 изобретения

Формула

Способ, получения диэтилдитиокарбамата холина формулы с2Н5 О сн г 1Ч-С-S CH>-N-CH -СН 0

С2Н5

S СН

Ь отличающийся тем, что хлорид холина обрабатывают трехводным диэтилдитиокарбаматом натрия. эндокринная, опухолевая, гидроцефалическая (сканирование).

Все больные были в стадии II no классификации Б?О СВЕИ критериями

Р оценки были (день 0 и день 90): MAIS, тест на визуальное восприятие Бентона, фигуры Рея, MMS профиль мнезической производительности RRM2, клиническая оценка врачом и семьей (аналогичные шкалы) °

Больные, разделенные на две параллельные группы по 15 пациентов, J получали в течение 3 мес, либо 2 кап-, сулы по 125 мг jtTC-холина (250 мг/24 ч), либо 2 капсулы плацебо

Результаты, приведенные в предлагаемой таблице, являются очень обнадеживающими по следующим причинам. резкое улучшение по Бентону, значительное улучшение всех исследуемых параметров, включая такой инструментальный анализ как мини ментальстат, чувствительность которого к изменениям всегда считается слабой, резкое улучшение активности пациентов как по мнению врача, так и по мнению семьи.

Данное соединение проявляет более высокую терапевтическую активность при лечении церебральных дегенеративных заболеваний, таких как старческое сумасшествие, болезнь Алземейера и сумасшествие Алземейера в сравнении с известным средством (хлоридом холи на) вследствие способности полученного соединения выделять в различные участки мозга холин и нейромедиатор— ацетилхолин, которые обычно поражаются при церебральных заболеваниях.

,. 6147б!

Каракте рис ти дТС-холин

Реэуль— тати день Разница

Ииии психическое состояние

3 р.< О (ММБ)

MAIS

6,60 2,19 8,93+2,40 2,33+1,72 8,27+2,28 8,60 2,4! - 0,33+0,49

Бентон UPT

4,86+1,30 5,87+1,18 . 1+0,926

4,86+1,32 5,13-1-1,46 0,27+0,46

p<0

Оценка врача

3 ° 53+0 81 4 6+ 1 11 f 07+0 59 Зю36+1ю29 3у63Я1 ° 30 0 ° 42 0е 108

2,50+0,93 3,43+1,47 0,93+0,86 3, 20+1, t 8 3,33+1, 23 О, 17+0, 5" семьи

Корректор А. Обручар

Техред Л.Олийнык

Редактор М. Петрова

Заказ 3900 Тираж 333 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГЕНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r.Ужгород, ул. Гагарина, 101

Профиль мнезической производительности

11,07Ф4,20 12,40+4,27 1,33+0,90 14,33+3,50

4,98+1,49 6,40И,50 1,47+1,06 5,73+1,28

14,60 3,46 0,27 0,96

5,73i1,49. " О+0,65

t 4 р <О

t 4 р <0

t " 4 р z0

2 р с0