Способ получения иммунореагента для выявления антигенсвязывающих лимфоцитов в реакции розеткообразования

 

Изобретение относится к медицине , а именно к иммунодиагностике.Цель изобретения - повышение стабильности реагента , расширение спектра получаемых иммунореагентов и снижение гемолиза эритроцитов при сенсибилизации„ Цель достигается фиксацией эритроцитов кур ацетальдегидом в конечной концентрации 7,2±0,05% в течение 24 ч при 37 ± 0,5°С„ (Л

(l9) (11) СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

PECfl YB JlHH (1)$ Л 61 К 39/00

Г:, t

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А BTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 44 70827/13 (22) 23 ° 06.88 (46) 15.03.9 1. Бюл. Р 10 (71) Научно-исследовательский институт эпидемиологии, микробиологии и инфекционных болезней (72) Б.В,Каральник, П.Н.Дерябин, Л.А.Прасолова, Ж,Т.Лйтбаева, С.А.Егизова, В,В.Грюнберг и И.В.Кугач (53) 615.375(088.8) (56) Зауэр Х. Методы иммунньж розеток. В кн. Иммунологические методы/

Под ред. Г. Фримеля, М., 1987, с. 278-282.

Авторское свидетельство СССР

И 1218524, кл . А 6 1 К 39/00, 1983, Изобретение относится к биологии, медицине, а именно к приготовлению реагентов для иммунологических исследований.

Цель изобретения — повышение стабильности реагента, расширение спектра получаемых иммунореагентов и снижение гемолиза эритропитов при сенсибилизации.

Пример 1, Определение стабильности иммунореагента.

Нативные эритроциты кур трижды отмывают физиологическим раствором путем центрифугирования при 1500 об/мин

15 мин и ресуспендируют до 107-ной концентрации забуференным физиологическим раствором (ЗФР) . Смешивают с равным объемом 14,47-ным раствором ацетальдегида, содержащего 0,857 хлористого натрия. Смесь осторожно

2 (54) СПОСОБ ПОЛУЧГНИЯ ИММУНОРЕЛГЕНТА

ДЛЯ ВЬ(ЯВЛЕШ1Я АНТИГЕНСВЯЗЫВА10ЩИХ ЛИМФОЦИТОВ В РЕЛКЦИ11 РОЗЕТКООБРЛЗОВАНИЯ (57) Изобретение относится к медицине,а именно к иммунодиагностике.Цель изобретения — повышение стабильности реагента, расширение спектра получаемых иммунореагентов и снижение гемолиза эритроцитов при сенсибилизации.

Цель достигается фиксацией эритроцитов кур ацетальдегидом в конечной концентрации 7,2+ 0,057. в течение

24 ч при 37+ 0,5 С. перемешивают и выдерживают 24 ч при

37 С при периодическом осторожном перемешивании„ Фиксированные эритроциты трижды отмывают ЗФР центрифугированием при 3000 об/мин в течение

5 мин и ресуспендируют в таком же растворе до 20Х„ Фиксированные эритроциты нагружают тейхоевой кислотой (ТК) из клеточных стенок золотистого стафилококка в следующем режиме: смешивают равные объемы 20Х взвеси эритроцитов, раствора ТК и 0,57 раствора хлорида хрома, смесь выдерживают 5-6 мин при комнатной температуре. Сенсибилизированные эритроциты трижды отмывают ЗФР (рН 7,2), содержащим 0,02% бычьего сывороточного альбумина, центрифугированием при

1500 об/мин в течение 3 мин и ресуспендируют в таком же растворе до

10/-ной концентрации.

1634284

55!

Iммупорелгент«! готг<вят в день постп«О!<кlt 31 «елелю до постлновки зп 1? 3(ее до «остановки реакции розеткообрлзо!Завил (РГ0), 1 РО ставят следующи<ч образом.

О, л(л Jilt«t

О, 27,— ного имму«(орепге!!тл, смесь вы-!

3<1«эж«!Вп!<Зт 5 trit!3 при 37" (., затем центр«фугrtpyrn1 10 ми««rprr 1000 Об/и«!н

< T ° < ((г(е р ж1 (13 и ют д Оп Оп !1! ! Сл 1з но 1 ч при

< С, 1(a Ослдкл готовят мазок на пред3Ic1 ((О.(стекле, А«ксир ют его метлноЛОГ! If ОВГЗ Ilrrrfnrlr

13:3

1 р ft м е 3 2. Для or(<.r«

«О..to

trot! г«3,:«рокси(ил(и«о!3(!л(и и пт«генлми (ГЛ) протее<«1!ри rro«far<(«! ам«дола. Во всех случаях, коглп иммуrrc

II р и м е р 3. Ку!3«13! (е эритрОцит<;1 «тля ((за ют, как Овис.3 «о в п«эим<.— рс 1, IIocl! p. этОГО сме!(п(13 3!<31 p 113«ые

О б3 ъ c nf ь(1 0 i! в 3 в (с и 3 13 и т р О 1 (и т О В к у«3

<1?иксирую(<(ег0 рлст!Зорл. Ф«кол((1!!<3 ,«13<эво (ят при ?О «37 С в тече(!Ие 1?о, 72 ч «р

иксиру!<(<(е

5, 4; 3, (17-. 1 роме тогг, эpltтрalttlть! кУР < ?IfêcltPÓ((3T фОРмпл(.!(< г«;(Ом ГО всех случаях «1! Ф((ьс«рую

35 хпорида натрия 0,857 ° Всего фиксируют 40 проб эритроцитов в условиях, рлзличающ«(хся хотя бы по одному параметру. Результаты оценивают по следую!!(им показателям. гемолиз при фиксации; гемолиз при хранении; спонтанная агглютинация эритроцитов; спонтанное розеткообразова«(ие с л«!м<«3оц«(тами человека при использова«пш ненагруженных эритроцитов. Дополнительно сравнивают пригодность эритроцитов связывать различные бактериальные антигены при применении рлзличньгх методов сенсибилизации.

Лг(я этого каждую отобранную пробу эритроцитов нагружают бактериальными антигенами при использовании оптимального метода сенсибилизации: СЭ эпидермального стафилококка и стафилококковым анатоксином — при помощи амидола3 ЛПС синегнойной палочки— без посредников, 3ТА синегнойной папочки — при помощи хлорида хрома.

Для каждого лнтигена и каждой пробы эритроцитов подбирают оптимальную сенсибилнзирующую дозу. Уровень сенсибилизации проверяют в реакции пассивной гемагглютинации с гомологичными иммунными сыворотками.

Таким образом, оптимальными оказались следующие условия фиксации: содержание ацетальдегидл в смеси

7,24- 0,05Х, 24 ч 37 + 0,5 С.

При использовании фиксированных данным способом эритроцитов кур были приготовлены 4 стафилококковых, 8 псевдомонадных и 9 протейных иммунореагентов. Они используются в течение года и сохраняют свою стабильность. С их применением обследовано

102 больных с бактериологическим подтверждением диагноза.

Полученные данные демонстрируют высокую специфичность антигенсвязывающих лимфоцитов с иммунореагентами, пр<(готовленными по данному способу, обеспечивающему стабильность иммуно- релгентл и возможность его полу .ения оптимальным для каждого используемого антигенл методом.

Формула и з о б р е т е н и я

Способ получения иммунореагента дня выявления антигенсвязывающих

JI«3«f<33oII«f ТоВ в реакции розеткообразовпния, включающий сенсибилизацию

Составитель О. Петрачева

Техред Л.Олийнык Корректор С.Черни

Редактор Н. Горват

Заказ 712 Тираж 452 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно †издательск комбинат "Патент", г.укгород, ул. Гагарина, 101

163428 эритроцитов кур антигеном, о т л и— ч а ю шийся тем, что, с целью повышения стабильности реагента, раснирения спектра получаемых имиунореагентов, а также снижения гемо5

4 6 лиза эритроцитов при сенсибилизации, перед сенсибилизацией эритроциты обрабатывают ацетальдегидом в конечной концентрации 7,20 + 0,05Х ь течение

22-24 ч при 36,5-37,5 С.