Способ выделения лейкоцитов из крови

 

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологическим методам исследования , и может быть использовано иммунологическими лабораториями для оценки специфического клеточного иммунитета. Из образца крови объемом 0,5-1,0 мм выделяют лейкоциты путем гравитационного осаждения в термостате, наклоняя пробирку с кровью под углом 25°, без добавления градиента плотности Примесь эритроцитов разрушают в 0,35-0,4%- ном растворе NH CI при 30-40° С Выход количества лейкоцитов увеличивается в 4- 5 раз по сравнению с известным способом и уменьшает в 5-10 раз объемы крови для исследования 1 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (ч) G 01 N 33/531

ГОСУДАРСТБЕ ННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4498611/14 (22) 16.08.88 (46) 15.05.91. Бюл, М 18 (71) Донецкий государственный медицинский институт им. M.Ãoðüêîãî (72) Л,И,Слюсарь, В,Г.Курилова, А.А,Сохин, Н.Е.Моногарова и Ю.Н,Талакин (53) 615.375 (088.8) (56) Гюллинг Э.В„Помыткина Л.P., Земляная И.А. Модифицированный метод изучения торможения миграции лейкоцитов в агарозе, — Лаб, дело, 1977, М 12, с.733 — 734. (54) СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ ЛЕЙКОЦИТОВ

ИЗ КРОВИ

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для лабораторных методов диагностики.

Цель изобретения — повышение количества выхода лейкоцитов и снижение объемов крови.

Способ осуществляют следующим образом.

Кровь в объеме 0,5 — 1,0 мл берут иэ пальца в стерильную пробирку с антикоагулянтом (20 — 25 ед.гепарина на 1,0 мл крови).

Пробирку с кровью тщательно встряхивают и ставят в термостат при 37 С под углом наклона 25 на 20-30 мин, После экспозиции в термостате плазму и верхний слой эритроцитов переносят в чистую стерильную пробирку и центрифугируют 7 — 10 мин

„.,5U ÄÄ 1649444 À1 (51) Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологическим методам исследования, и может быть использовано иммунологическими лабораториями для оценки специфического клеточного иммунитета. Из образца крови объемом 0,5 — 1,0мм выделяют

3 лейкоциты путем гравитационного осаждения в термостате, наклоняя пробирку с кровью под углом 25, без добавления градиента плотности. Примесь эритроцитов разру шают в 0,35 — 0,4;4- ном растворе NHp CI при 30 — 40 С. Выход количества лейкоцитов увеличивается в 4-5 раз по сравнению с известным способом и уменьшает в 5 — 10 раз объемы крови для исследования. 1 табл. при 1000 об/мин; 4/5 объема сыворотки отбирают и используют для изучения факто- О ров гуморального иммунитета. K осадку клеток добавляют подогретый до. 37 — 40 С О

0,35 — 0,4%-ный раствор NH

3,0 мл. Лизис эритроцитов контролируют фь визуально, после чего лейкоциты дважды ф отмывают 5 — 10-кратным объемом питательной среды для культивирования клеток, 3атем клетки ресуспендируют в 0,5 мл среды

199 и рассчитывают количество лейкоцитов вавайю в единице объема. Полученная лейкоцитарная взвесь в концентрации не менее 1— т

2x10 клеток/мл может использоваться для оценки клеточного иммунитета в РТМЛ, РБТЛ, Е-РОК, ЕАС-РОК и других реакциях в зависимости от задач исследования. Выделенного количества лейкоцитов достаточно

1649444

Результаты выделения лейкоцитов из гепаринизированной крови предлагаемым и известным способом

Концентрация лейкоцитов в 1 мкл суспенэии, выделенных из 1,0 мл крови с помощью способа

Исходное содержание лейкоцитов

B1 мкл крови предлагаемого известного

С вЂ” ов С,И.

Ю вЂ” ов В,П.

В, — ев Н,В, П вЂ” на Н.П.

Б — я И.Н.

Б — н В.В.

К вЂ” ко В.И.

П- 0 в.с, 9800

11000

14100

3200

r 0,01 с 0,01 с 0,01 с 0,01 с 0,01 с 0,01 с 0,01 с 0,01

Составитель Г, Крюкова

Техред M.Mîðãåíòàë Корректор Т, Колб

Редактор С,Лисина

Заказ 1519 Тираж 420 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб„4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород. ул.Гагарина, 101 для комплексной оценки клеточного звена иммунитета.

Пример. Выделение лейкоцитарной взвеси с помощью сравниваемых способов было проведено иэ равных объемов крови (1,0 мл), взятой иэ пальца у детей в возрасте

1-3 года с неблагополучным аллергологическим анамнезом, Выделенная суспензия лейкоцитов использовалась для получения характеристик клеточного иммунитета (РТМЛ, РБТЛ, и Е-РОК), сыворотка крови для определения показателей гуморального иммунитета (РИД по Манчини, РПГА).

Преимущества предлагаемого способа заключаются в там, что данный метод позволяет из малых объемов крови (0,5-1,0 мл) получать суспензию лейкоцитов в концентрации, достаточной для комплексного изучения клеточного звена иммунитета.

Количество лейкоцитов, выделяемых с помощью предлагаемого способа, в 4-5 раз больше, чем с помощью известного способа, что позволяет уменьшить объем исследуемой крови в 5 — 10 раэ.

Метод позволяет отказаться от использования доротостоящих градиентов плоскости, используемых в известных способах выделения лейкоцитарной массы, что дает возможность избежать воздействия высокомолекулярных соединений на рецепторный аппарат клетки, позволяя более достоверно определять .эффекторную и функциональную активность иммунокомпе5 тентных клеток.

В предлагаемом способе сыворотка крови может быть использована для изучения факторов гуморального иммунитета и биохимических показателей крови без ка10 ких-либо ограничений. Способ выделения лейкоцитов из микрообъемов крови наряду с повышением экономичности и эффективности позволяет отказаться от венопункции и связанных с этим сложностей изучения

15 клеточного иммунитета у населения, в том числе и у детей раннего возраста.

Формула изобретения

Способ выделения лейкоцитов из крови

20 путем инкубирования гепаринизированной крови в термостате под углом наклона, с последующим отбором плазмы и эритроцитов, отличающийся тем, что, с целью повышения количества выхода лейкоцитов

25 и снижения объемов крови, используют 0,5—

1,0 мл крови, инкубируют в термостате под углом наклона 25 и разрушают примесь эритроцитов добавлением 0,35 — 0,4 -ного раствора NH CI при температуре 37 — 40 С,